Ile robi się pcr w przypadku infekcji utajonych. Jak przeprowadzana jest analiza PCR: opis procedury. Jeśli zrobisz rozmaz, jest to konieczne

Diagnoza chorób zakaźnych różnych typów - zarówno wirusowych, jak i bakteryjnych - ma na celu identyfikację patogenów na wczesnym etapie, co umożliwia przepisanie terminowego i szczególnie skutecznego leczenia. Najnowocześniejszą metodą wykrywania infekcji jest PCR, co oznacza reakcję łańcuchową polimerazy. Jaka jest istota tej metody i jaki jest jej cel?

Istota reakcji polimerazy

Struktura każdego wirusa i mikroorganizmu zawiera cząsteczki RNA lub DNA. Charakterystyczne jest, że związki te są unikalne dla każdego, dlatego izolując kwasy nukleinowe w badaniu krwi u dorosłych lub dzieci, można postawić diagnozę z absolutną dokładnością.

Niestety stężenie DNA, zarówno w próbkach krwi, jak i innych materiałach biologicznych, jest dość niskie, dlatego nie można go określić zwykłymi metodami diagnostycznymi. Aby poradzić sobie z tym problemem, wynaleziono kiedyś reakcję łańcuchową polimerazy.

Istota tej analizy polega więc na specyficznym przetwarzaniu próbki krwi, dzięki czemu wzrasta w niej stężenie cząsteczek DNA, a ustalenie ich rodzaju w przyszłości umożliwia również identyfikację rodzaju patogenu co do postawienia prawidłowej diagnozy.

Jak wykonuje się badanie krwi PCR?

Metodę PCR przeprowadza się wyłącznie w warunkach laboratoryjnych. W tym celu stosuje się specjalne enzymy, które kilkakrotnie zwiększają strukturę RNA i DNA pacjenta. W takim przypadku należy utworzyć taką ich liczbę, aby umożliwić przeprowadzenie badania wizualnego. Podczas ankiety wykonywana jest kopia takiej strony, która pod każdym względem spełnia wymagane warunki. Co to jest badanie krwi PCR na RNA jest interesujące dla wielu.

Laboratorium dysponuje niezbędną bazą danych, która wskazuje dokładną strukturę różnych czynników zakaźnych. Zastosowanie metody PCR pozwala nie tylko ustalić rodzaj patogenu, ale także obliczyć jego proporcję ilościową.

Diagnostyka PCR obejmuje również pewne innowacje, wśród których wyróżniają się:

Połączenie różnych fragmentów DNA;

Wprowadzenie mutacji;

Ustalenie ojcostwa itp.

Jakie choroby wykrywa PCR?

Dzięki PCR można zidentyfikować prawie wszystkie patologie bakteryjne i wirusowe. Do badań można wykorzystać nie tylko krew, ale także inne materiały biologiczne, takie jak wymazy z cewki moczowej oraz z szyjki macicy, śliny i nasienia. Analiza staje się dość pouczająca, gdy czynnik sprawczy pewnej choroby dostanie się do ludzkiej krwi. Dlatego przepisuje się badanie krwi na PCR w przypadku następujących patologii:

Wirusowe zapalenie wątroby typu A, B, C, D i TT;

Infekcja o charakterze herpetycznym (czyli wirusy pierwszego, drugiego i czwartego typu);

Wirus cytomegalii;

Infekcja enterowirusowa;

zakażenie wirusem HIV;

Różyczka;

listerioza;

Półpasiec;

Zakaźna mononukleoza;

Toksoplazmoza.

Jeśli weźmiemy pod uwagę realizację PCR przy użyciu innych biomateriałów, to do listy patologii, które można wykryć tą metodą, należy dodać:

salmonelloza;

Błonica;

Gardnereloza;

mykoplazmoza;

Gruźlica;

rzęsistkowica;

- zakażenie wirusem brodawczaka (około stu różnych szczepów wirusa brodawczaka ludzkiego).

Szczególnie istotne stało się teraz badanie krwi metodą PCR w czasie ciąży na infekcje TORCH, do których należą toksoplazmoza, wirus cytomegalii, infekcja opryszczki i różyczka. Wynika to z faktu, że powyższe choroby mogą powodować nieprawidłowości w rozwoju płodu.

Zalety PCR

Jakie są zalety tej metody?

• Stuprocentowa dokładność diagnozy: jeśli we krwi znajduje się co najmniej kilka fragmentów DNA patogenu, zostaną one określone przez reakcję PCR, co oznacza, że ​​zostanie postawiona prawidłowa diagnoza. To jest główna różnica między tą metodą a innymi metodami diagnostycznymi - pełną morfologią krwi, ELISA i innymi.
• Specyficzność. Na przykład podczas testu PCR krwi na boreliozę nie ma czegoś takiego jak wynik fałszywie ujemny lub fałszywie dodatni, co odróżnia go od testu immunoenzymatycznego, czyli ELISA.
• Analizę można przeprowadzić w celu oznaczenia kilku patogenów jednocześnie na podstawie pojedynczej próbki biomateriału, co czyni tę metodę wygodną dla pacjenta, ponieważ nie musi on przeprowadzać analizy kilka razy.
• Szybkość. Nie ma potrzeby izolowania i hodowania patogenu na specjalnych pożywkach, co jest niezbędne podczas badania bakteriologicznego. Gotowy wynik możesz otrzymać w dniu analizy.

• Za pomocą testu krwi PCR na zapalenie wątroby, na przykład, ukryty czynnik wywołujący chorobę w organizmie określa się, gdy pacjent działa jako nosiciel infekcji (HIV lub zapalenie wątroby).
• Przystępna cena. Koszt analizy PCR w celu określenia jednego patogenu wynosi od dwustu pięćdziesięciu do pięciuset rubli. Półilościowe badanie wirusów kosztuje nieco więcej - około tysiąca rubli.

Wady metody

PCR to zaawansowana technologicznie metoda badawcza, która stawia wysokie wymagania sprzętowi laboratoryjnemu. Pomieszczenie do analizy musi koniecznie mieć filtr biologiczny, ponieważ w powietrzu zawsze znajdują się cząsteczki śliny i skóry, które zawierają cząsteczki DNA. Nieprzestrzeganie wymagań technicznych dotyczących pracy z biomateriałami może prowadzić do błędnej diagnozy.

Kto powinien wykonać badanie krwi do PCR?

Każdy może wziąć udział w ankiecie. Wskazaniem do tego jest podejrzenie infekcji przenoszonych drogą płciową (zakażenie HIV, bakteryjne zapalenie pochwy, chlamydia). Jeśli przypadkowo doszło do niezabezpieczonego kontaktu seksualnego, tylko PCR umożliwi postawienie prawidłowej diagnozy na wczesnym etapie, jeśli dana osoba została zarażona określoną chorobą.

Krew do kompleksu TORCH jest obowiązkowa dla kobiet w ciąży, a także tych, które dopiero planują poczęcie dziecka.

Chociaż PCR to maksimum skuteczna metoda diagnostyka, ale nie trzeba w niej chodzić cyklicznie. Konieczne jest kompleksowe zbadanie pacjenta w obecności jakiejkolwiek patologii. Jeśli reakcja łańcuchowa polimerazy umożliwia określenie patogenu, to dzięki badaniu serologicznemu można ocenić poziom skuteczności terapii, reakcję organizmu ludzkiego na patogen i leki. Badanie krwi PCR na obecność wirusa HIV powinien zlecić lekarz.

Cechy zabiegu i przygotowania

Pacjenci badani techniką PCR otrzymują najbardziej wiarygodny wynik. Trzeba powiedzieć, że w tym przypadku prawdopodobieństwo błędów jest prawie całkowicie wyeliminowane. Wyniki tej analizy są również przygotowywane dość szybko, co ułatwia postawienie diagnozy i umożliwia terminowe przepisanie niezbędnych procedur medycznych.

Wiarygodność wyniku uzyskanego metodą PCR zależy od prawidłowego dostarczenia materiału biologicznego do badania. Nie powinien być niczym zanieczyszczony, w przeciwnym razie wynik nie będzie obiektywny.

• zakaz współżycia seksualnego na dzień przed zabiegiem;
• badanie krwi w celu wykrycia infekcji należy wykonywać rano i tylko na pusty żołądek;
• mocz podaje się również rano w sterylnym pojemniku.

Półtora lub dwa dni po zabiegu test krwi PCR zostanie odszyfrowany i wynik będzie gotowy. Zdarzają się nawet przypadki, kiedy możesz otrzymać wynik tego samego dnia.

Jak przygotować materiał do analizy?

Aby przeprowadzić badanie tak pomyślnie, jak to możliwe, konieczne jest prawidłowe pobranie materiału od pacjenta i przeprowadzenie jego kompetentnego przygotowania. Powszechnie wiadomo, że w badaniu laboratoryjnym podczas przygotowania próbki występuje duża liczba błędów (do około siedemdziesięciu procent).

Obecnie w niektórych laboratoriach krew pobierana jest za pomocą systemów próżniowych. Z jednej strony minimalnie ranią pacjenta, z drugiej strony umożliwiają zabranie materiału tak, aby nie miał on kontaktu ani z otoczeniem, ani z personelem. Pozwala to uniknąć zanieczyszczenia materiału biologicznego i maksymalizuje wiarygodność analizy.

Rozszyfrowanie wyników

Wynik badania krwi na PCR może być dodatni lub ujemny. Jeśli wynik badania krwi jest ujemny, oznacza to brak patogenów zakaźnych w materiale przekazanym przez pacjenta. Pozytywna analiza potwierdza obecność czynników zakaźnych we krwi, co oznacza, że ​​wymagane jest najbardziej skuteczne i wysokiej jakości leczenie pacjenta.

Otrzymany wynik może być pozytywny nawet przy braku jakichkolwiek objawów choroby. Wskazuje to albo na początek procesu patologicznego, albo na to, że osoba jest nosicielem. W przypadku wykrycia tego ostatniego nie są wymagane żadne zabiegi medyczne. W takim przypadku zaleca się, aby pacjent był stale monitorowany przez lekarza, co oznacza na przykład okresowe badanie krwi PCR na opryszczkę i inne infekcje.

Najczęściej znajdują się w cewce moczowej, w zeskrobin wykonanych z kanału szyjki macicy, w ślinie. Trzeba jednak pamiętać, że chory jest w stanie zarazić ludzi zupełnie zdrowych, nawet jeśli nie dokucza mu ta choroba. Może stać się przewlekły. Trzeba powiedzieć, że przy pozytywnym wyniku uzyskanym za pomocą PCR konieczne jest przepisanie odpowiednich procedur medycznych.

Ilościowa charakterystyka PCR

Badanie krwi PCR pod kątem infekcji jest również scharakteryzowane ilościowo. Taki wynik może ocenić tylko specjalista, ponieważ jest on indywidualny dla różnych infekcji. Jest to charakterystyka ilościowa, która pozwala lekarzowi określić stopień aktywności takiego patologicznego procesu, aby określić dokładny etap rozwoju konkretnej choroby.

Badanie uzyskanych wyników pomoże specjaliście wybrać odpowiedni lek, określić wymaganą dawkę.

Dokładność diagnostyczna

Istnieją trzy najważniejsze cechy PCR, a mianowicie:

Wrażliwość;

Specyficzność;

Precyzja.

Diagnostyka infekcji za pomocą PCR charakteryzuje się dużym prawdopodobieństwem wykrycia czynników zakaźnych w organizmie. Analiza krwi i innych płynów jest bardzo specyficzna. Dzięki niemu możesz łatwo określić konkretny proces zakaźny, przechodząc np. badanie krwi PCR na zapalenie wątroby lub HIV. Również diagnostyka PCR jest bardzo czuła. Jeśli w badanym materiale znajduje się minimalna liczba czynników zakaźnych, metoda PCR zawsze będzie pozytywna.

W bardzo rzadkich przypadkach można uzyskać fałszywie dodatni wynik. W przypadku braku infekcji będzie to odpowiednio ujemne.

Identyfikacja ukrytych chorób

Jeśli dana osoba jest podejrzewana o chorobę przenoszoną drogą płciową, przepisuje się badanie krwi w celu wykrycia ukrytych infekcji. Wszelkie choroby okolicy narządów płciowych można określić tylko poprzez badanie pacjenta.

Następujące choroby mogą mieć utajony charakter kursu:

• ureaplazmoza;
• chlamydia;
• mykoplazmoza;
• opryszczka;
• rzeżączka;
• gardnereloza.

Te infekcje są dość powszechne i bardzo podstępne. Na początku choroby nie mają dobrze zdefiniowanych objawów, więc pacjenci nie chodzą do specjalisty. Wyniki szybkiego testu krwi PCR na chlamydię, boreliozę i inne infekcje pomogą lekarzowi przepisać skuteczne leczenie.

Choroby przenoszone drogą płciową niekorzystnie wpływają na układ rozrodczy. Mogą powodować bezpłodność lub pojawienie się wad płodu. Dlatego ważne jest, aby przed planowaniem ciąży wykonać test PCR.

Zawartość

Osoby zainteresowane nowymi metodami diagnostycznymi powinny dowiedzieć się, czym jest metoda PCR. Nowoczesne możliwości techniczne w terenie badania laboratoryjne dają możliwość wykrycia wielu chorób na początkowych etapach. Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest obecnie uważana za najdokładniejszą i nową metodę.

Analiza PCR

Analiza PCR - co to jest? Metoda ta wykorzystuje zasady biologii molekularnej. Do badania materiału stosuje się specjalne enzymy, które wielokrotnie i szybko kopiują DNA, fragmenty RNA patogenów. istnieje różne rodzaje Analiza PCR w zależności od badanego materiału (krew, mocz, kał itp.). Po przetworzeniu pracownicy laboratorium porównują wynik z bazą danych, identyfikują stężenie, rodzaj patogenu.

Analizę PCR umieszcza się w specjalnym wzmacniaczu (urządzeniu), które podgrzewa i chłodzi probówki z biomateriałem. Do replikacji fragmentów potrzebne są zmiany temperatury. Dokładność wyniku będzie zależeć od dokładności reżimu temperatury. Metoda reakcji łańcuchowej polimerazy pomaga zidentyfikować:

• Zakaźna mononukleoza;
• zakażenie wirusem cytomegalii;
• wirusowe zapalenie wątroby typu G, C, B, A;
• infekcje / choroby przenoszone drogą płciową (STI / STD): gardnereloza, rzęsistkowica, ureaplazmoza;
• infekcja opryszczkowa;
• wirusy onkogenne;
• listerioza;
• infekcja helicobacter;
• kleszczowe zapalenie mózgu, borelioza;
• gruźlica;
• kandydoza.

Krew

W tej chwili, ze względu na nowość technologii, badanie krwi PCR nadal ma wysoką cenę. Do przygotowania biomateriału nie jest konieczne spełnienie pewnych wymagań. Nawet spowodowane aktywnością fizyczną, stresem, zmianą diety, zmianami w składzie nie wpływają na wynik badania. Badanie krwi PCR może tylko zepsuć przyjmowanie środków przeciwbakteryjnych, dlatego przed jego przyjęciem należy zrobić przerwę między leczeniem a badaniem.

Badanie krwi PCR jest najczęstszą opcją diagnozowania przewlekłych, ostrych patologii zakaźnych z manifestacją wirusową lub nietypową. Metody badań serologicznych mają pewną trudność w przeprowadzeniu - obecność patogenu zależy od obecności przeciwciał w ludzkim ciele. Wynik może być fałszywie ujemny, jeśli stan pacjenta nie dawał czasu na ich rozwój.

rozmaz

W dziedzinie ginekologii stosuje się analizę rozmazu PCR do badania obecności drobnoustrojów zakaźnych. Praca z materiałem odbywa się na tej samej zasadzie, co z krwią: wielokrotne zwiększenie fragmentów DNA patogenu w celu łatwej jego identyfikacji. Pomaga również wykryć ukryte infekcje u kobiety. Do analizy można pobierać różne płyny biologiczne: ślinę, plwocinę, mocz, krew. W ginekologii dla dokładności oznaczenia częściej stosuje się wymaz z błony śluzowej pochwy z kanału szyjki macicy.

Istnieją pewne wskazania do PCR. Często trzeba to zrobić, aby zidentyfikować oporny na antybiotyki typ patogenu. U kobiet głównymi wskazaniami do diagnozy tą metodą są:

• trudna ciąża;
• ostra faza chorób przenoszonych drogą płciową;
• jeśli istnieje podejrzenie przejścia chorób przenoszonych drogą płciową do stadium przewlekłego;
• poszukiwanie przyczyn niepłodności.

Cala

Aby wykryć infekcję, lekarz może przepisać test PCR w kale. Aby uzyskać najbardziej wiarygodne wyniki po teście, przed pobraniem biomateriału należy przestrzegać następujących zasad:

• przestań na kilka dni zażywać środki przeczyszczające: olejki, czopki;
• wyklucz leki, które nadają konkretny kolor stolcu, na przykład z zawartością żelaza.

Do pobierania próbek użyj sterylnego patyczka i pojemnika. Coś je dodatkowo przetrzeć, płukanie nie jest konieczne. Podczas zbierania materiału należy uważać, aby nie dotknąć ręką wewnętrznych ścianek pojemnika. Upewnij się, że w kale nie ma zanieczyszczeń moczu, nie możesz używać dodatkowych środków wspomagających wypróżnienia (lewatywy). Materiał należy odebrać w dniu dostawy, wystarczy 1/3 objętości kontenera. Ta metoda diagnostyczna ma następujące zalety:

Mocz

W razie potrzeby lekarz może pobrać mocz do badania. Wysoka dokładność otwiera możliwość pracy z dowolnym płynem biologicznym, z którego można wyodrębnić DNA wirusa. Aby zdać test moczu PCR, przed pobraniem materiału należy przestrzegać następujących ograniczeń:

• co najmniej 1 dzień przed zabiegiem przerwać stosunek seksualny;
• 3 tygodnie przed porodem należy zakończyć kurację antybakteryjną, ponieważ leki zamazują obraz;
• musisz wykonać test na pusty żołądek (płyn jest również zabroniony);
• musisz wziąć pierwszą poranna porcję materiału.

Wyniki testu PCR

Z powyższego jasno wynika, czym jest analiza PCR i widoczne są wyraźne zalety tej metody badawczej. Kolejnym plusem tej procedury diagnostycznej jest łatwość odczytywania wyników. Biorąc pod uwagę, ile wykonywana jest analiza PCR (sam proces trwa około 5 godzin, ale laboratorium wydaje dane w ciągu 1-2 dni), ta metoda diagnostyczna staje się najlepszą opcją do wykrywania wielu infekcji. Na podstawie wyników lekarz może powiedzieć, że test:

1. Negatywny – badany materiał nie zawierał pożądanego patogenu.
2. Pozytywny - znaleziono RNA, DNA patogenu.

Czasami przeprowadza się ilościowe oznaczanie drobnoustrojów. Jest to konieczne w przypadku chorób wywołujących patogeny oportunistyczne. Osobliwością tych wirusów jest to, że pojawiają się tylko w nadmiarze i bardzo trudno jest je znaleźć w konwencjonalnych badaniach. Czynnik ten jest ważny przy wyborze taktyki terapeutycznej w celu skutecznego leczenia infekcji wirusowych, na przykład zapalenia wątroby, HIV.

Na 12 infekcji

Aby w pełni zrozumieć, czym jest PCR do diagnozowania infekcji i jaka jest jego skuteczność, musisz wiedzieć, że jest w stanie wyizolować do 12 patogenów. Tekst wykonywany jest wyłącznie w warunkach laboratoryjnych. Do badań wykorzystywane są specjalne enzymy, które wielokrotnie zwiększają ilość RNA, fragmentów DNA wirusa. Analiza PCR dla 12 infekcji może ujawnić:

• Prątek gruźlicy;
• wirus cytomegalii;
• zapalenie wątroby typu C, G, B, A;
• opryszczka 1, 2 rodzaje;
• Wirus Epsteina-Barra (mononukleoza zakaźna);
• infekcje przenoszone drogą płciową, na przykład przez chlamydię;
• listerioza;
• infekcja Candida;
• Helicobacter pylori;
• borelioza, kleszczowe zapalenie mózgu.

W przypadku zapalenia wątroby typu C

Ta metoda diagnostyczna pomaga określić obecność wirusa we krwi. Daje to lekarzom możliwość porozmawiania o jego obecności lub braku. Istnieją dwa rodzaje analizy PCR dla zapalenia wątroby typu C: jakościowa i ilościowa. Pierwsza opcja wskazuje tylko na jego obecność i może być sformułowana jako „wykryto” / „nie wykryto”. Ten typ testu ma czułość 10-500 IU/ml. Sugeruje to, że przy niskiej zawartości patogenu w organizmie analiza zostanie „nie wykryta”.

Analiza ilościowa jest dokładniejsza i pokaże stężenie infekcji we krwi. Wskaźnik ten jest określany jako „obciążenie wirusem”, mierzone w ilości wirusowego RNA na określoną objętość krwi. Deszyfrowanie w różnych laboratoriach może się różnić. Oprócz pomiaru w IU / ml stosuje się jednostki „kopiuj”. Możesz przeliczyć kopie na j.m., korzystając ze wzoru: 1 j.m. = 4 kopie. Jeśli w transkrypcie wartość obecności wirusa przekracza 800 000 IU / ml (lub 800 * 103), wskazuje to na wysoką zawartość patogenu.

Na gruźlicę

Test należy wykonać rano. Jest to ważne, aby cała plwocina powstała w nocy nie opuściła żołądka. Analiza PCR na gruźlicę jest tak samo ważna jak ELISA, Mantoux, tomografia. Test pomaga określić obecność prątków, stan moczu, całkowitą immunoglobulinę, OB oraz określić aktualny stan płuc. Dla dokładności uzyskania wyników w analizie PCR konieczne jest przeprowadzenie jej zgodnie z następującymi zasadami:

1. Siew przeprowadza się 3 razy, ale pełną aspirację zawartości żołądka należy przeprowadzić tylko w szpitalu.
2. Wykrywa prątki poprzez hodowlę istniejących guzów w żołądku w mniej niż 50% diagnoz. Nawet po uzyskaniu optymalnych warunków, zamiast tego zaleca się ultradźwięki.
3. Nawet przy wyniku ujemnym nie można całkowicie wykluczyć prawdopodobieństwa rozwoju gruźlicy ze zmianą ESR, immunoglobuliny lub innych wskaźników.
4. Hodowla PCR jest mniej podatna na stany patologiczne, jeśli zostanie uzyskana w ramach badania bronchoskopowego, co wyklucza podejrzenie gruźlicy u dziecka.

Na HIV

Dla wielu osób ta diagnoza jest uważana za wyrok śmierci. Z tego powodu po częstym stosunku seksualnym osoba staje się bardziej uważna na sygnały, które daje jego ciało (a czasami je wymyśla). Najbardziej niezawodną opcją uzyskania potwierdzenia lub odrzucenia tej choroby jest test PCR na HIV. Test może służyć do identyfikacji następujących możliwych problemów zdrowotnych:

1. Zaprzeczenie/potwierdzenie obecności wirusa HIV w okresie seronegatywnego konia.
2. Określenie genotypu HIV-1, HIV-2.
3. Wyjaśnienie opisu procesu patologicznego z wątpliwym wynikiem immunoblot.
4. Zakażenie po transfuzji krwi.
5. Określanie statusu HIV u dzieci urodzonych przez matki nosicielki.
6. Pomaga ustalić monitorowanie miana wirusa w organizmie.

Dla HPV

Wirus brodawczaka można wykryć u każdej osoby, przez długi czas może znajdować się w stanie utajonym. Rozwój wywołuje osłabienie układu odpornościowego, stres lub wybuchy emocjonalne. Analiza PCR dla HPV pomaga określić stężenie wirusa we krwi. Z tego powodu zaleca się wykonanie oznaczenia ilościowego, a nie jakościowego. Dane te pomogą przewidzieć prawdopodobieństwo rozwoju złośliwego charakteru infekcji.

Technika diagnozowania obecności HPV opiera się na głównej właściwości PCR polegającej na izolacji DNA wirusa z materiału. Ze względu na wysoką czułość testu wykryta zostanie nawet niewielka ilość bakterii. Badania ilościowe dają lekarzom możliwość określenia stopnia zagrożenia chorobą, prognozowania na przyszłość. Ta diagnoza jest obowiązkowa dla wszystkich mężczyzn i kobiet, którzy znaleźli się z brodawkami. Ilościowa analiza PCR pomoże określić, co spowodowało rozwój HPV: tymczasowy spadek odporności lub przewlekła choroba.

Na opryszczkę

Ten rodzaj diagnostyki w mikrobiologii pomaga w przeprowadzeniu z dużą dokładnością analizy PCR na opryszczkę. Kopiowanie fragmentów DNA wirusa nastąpi tylko wtedy, gdy pożądany gen będzie obecny w materiale. W takim przypadku test oparty na wynikach postępowania może wskazywać na obecność lub brak patogenu. Będzie można go wykryć nawet przy niskim stężeniu we krwi.

Kolejnym plusem analizy PCR jest to, że może wykryć infekcję wirusem opryszczki natychmiast po zakażeniu, przed wystąpieniem objawów klinicznych. Możliwe jest określenie rodzaju opryszczki (1 lub 2), do przeprowadzenia analizy nie jest wymagane żadne specjalne przygotowanie, ale lekarze zalecają odmowę przed pobraniem krwi:

• smażony;
• ostry;
• alkohol;
• tłuszczowy.

Podczas ciąży

Podczas noszenia dziecka bardzo ważne jest przeprowadzenie tego badania, aby uwzględnić stan kobiety. Analiza PCR podczas ciąży znajduje się na liście najskuteczniejszych metod określania obecności różnych chorób. Konieczne jest przeprowadzenie testu nie tylko w celu zidentyfikowania patologii, ale także określenia prawdopodobieństwa zakażenia dziecka w macicy. Dopiero dzięki diagnostyce PCR możliwe stało się określenie stopnia zaawansowania, rozwoju wielu infekcji wewnątrz macicy matki.

Dostarczanie analiz PCR

Jeśli zastanawiasz się, jak przeprowadzana jest analiza PCR, należy rozważyć każdy indywidualny przypadek, biorąc pod uwagę rodzaj biomateriału. Na przykład skrobanie, rozmaz lub pobieranie krwi ma swoje własne cechy.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) to wysoce precyzyjna metoda w zakresie diagnozowania dziedzicznych patologii, infekcji, chorób wirusowych na dowolnym etapie (ostrym lub przewlekłym), a także - na wczesnym etapie - przed oczywistymi objawami choroby poprzez identyfikację patogenów na podstawie ich DNA, RNA, które są materiałem genetycznym, w próbkach pobranych od pacjenta. A dzisiaj porozmawiamy o istocie, etapach diagnostycznych i zasadach metod reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR), a także o jej koszcie.

Co to jest reakcja łańcuchowa polimerazy?

Podstawą analizy jest amplifikacja (podwojenie) – tworzenie wielu kopii z krótkiego odcinka DNA (kwasu dezoksyrybonukleinowego), który reprezentuje ludzki kompleks genetyczny. Badanie wymaga bardzo małej ilości substancji fizjologicznych (plwocina, kał, zeskrobany nabłonek, sok prostaty, krew, nasienie, płyn owodniowy, śluz, tkanka łożyska, mocz, ślina, płyn opłucnowy, płyn mózgowo-rdzeniowy). W takim przypadku na przykład w układzie moczowo-płciowym pacjenta można wykryć nawet pojedynczy szkodliwy drobnoustrój.

Technika PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) została opracowana przez amerykańskiego naukowca K. Mullisa, który otrzymał Nagrodę Nobla w 1993 roku.

Aktywnie używany:

• we wczesnej diagnostyce infekcji genetycznych;
• w sądowym badaniu lekarskim w obecności bardzo małej ilości DNA do badań;
• w weterynarii, farmacji, biologii, genetyce molekularnej;
• do identyfikacji osoby przez DNA, potwierdzenie ojcostwa;
• w paleontologii, antropologii, ekologii (w śledzeniu jakości produktów, czynników środowiskowych).

W tym filmie dowiesz się, czym jest reakcja łańcuchowa polimerazy:

Do kogo jest przypisany?

Reakcja łańcuchowa polimerazy w diagnostyce chorób zakaźnych jest jedną z najbardziej niezawodnych metod o wysokiej dokładności i niezawodności. Na przykład wiarygodność analizy PCR dla chlamydii i wielu innych patogenów zbliża się do 100% (bezwzględna). Najczęściej procedurę reakcji łańcuchowej polimerazy przepisuje się pacjentom, którzy podczas diagnozowania mają trudności z identyfikacją określonego patogenu.

Stosowany jest laboratoryjny test PCR:

• wykrywanie patogenów powodujących infekcje narządów moczowych i narządów płciowych, które są trudne do zidentyfikowania za pomocą roślin uprawnych lub metod immunologicznych;
• do ponownej diagnozy HIV na początkowym etapie w przypadku pozytywnego, ale wątpliwego wyniku wstępnej analizy (na przykład u noworodków z rodziców zakażonych AIDS);
• ustalenie choroby onkologicznej na wczesnym etapie (badanie mutacji onkogenów) i indywidualna korekta schematu leczenia dla konkretnego pacjenta;
• w celu wczesnego wykrywania i potencjalnego leczenia patologii dziedzicznych.

Tak więc przyszli rodzice są testowani, aby dowiedzieć się, czy są nosicielami patologii genetycznej, u dzieci PCR określa prawdopodobieństwo narażenia na chorobę dziedziczną.

• wykrywać nieprawidłowości płodu wczesny termin ciąża (poszczególne komórki rosnącego zarodka są badane pod kątem możliwych mutacji);
• u pacjentów przed przeszczepieniem narządu – do „typowania tkanek” (określenie zgodności tkankowej);
• wykrywanie niebezpiecznych organizmów chorobotwórczych w oddanej krwi;
• u noworodków - w celu wykrycia ukrytych infekcji;
• ocena wyników leczenia przeciwwirusowego i przeciwdrobnoustrojowego.

Po co przechodzić tę procedurę?

Ponieważ PCR jest wysoce skuteczną metodą diagnostyczną dającą prawie 100% wynik, stosuje się procedurę:

• potwierdzić lub wykluczyć ostateczną diagnozę;
• szybka ocena skuteczności terapii.

W wielu przypadkach PCR jest jedynym możliwym testem do wykrycia rozwijającej się choroby, jeśli inne bakteriologiczne, immunologiczne i wirusologiczne metody diagnostyczne są bezużyteczne.

• Wirusy są wykrywane metodą PCR natychmiast po zakażeniu i przed pojawieniem się objawów choroby. Wczesne wykrycie wirusa pozwala na szybkie leczenie.
• Tak zwane „obciążenie wirusem” (lub liczba wirusów w organizmie) jest również określane przez ilościową analizę DNA.
• Specyficzne patogeny (takie jak prątek gruźlicy Kocha) są trudne i trwają zbyt długo w hodowli. Analiza PCR pozwala szybko zidentyfikować minimalną liczbę patogenów (żywych i martwych) w próbkach, które są wygodne do badań.

Stosowana jest szczegółowa analiza DNA patogenów:

• określić jego wrażliwość na określone rodzaje antybiotyków, co pozwala natychmiast rozpocząć leczenie;
• kontrolowanie rozprzestrzeniania się epidemii wśród dzikich zwierząt domowych;
• identyfikowanie i monitorowanie nowych zakaźnych gatunków drobnoustrojów i podtypów patogenów, które napędzały poprzednie epidemie.

Rodzaje diagnostyki

Metoda standardowa

Analiza reakcji łańcuchowej polimerazy odbywa się na podstawie wielokrotnej amplifikacji (podwojenia) określonego fragmentu DNA i RNA przy użyciu specjalnych enzymów starterowych. W wyniku łańcucha kopiowania uzyskuje się wystarczającą ilość materiału do badań.

Podczas procedury kopiowany jest tylko żądany fragment (odpowiadający określonym specyficznym warunkom), nawet jeśli faktycznie jest obecny w próbce.

Ten szczegółowy film z przydatnymi diagramami pokazuje, jak działa PCR:

Inne metody

• PCR w czasie rzeczywistym. W tego typu badaniach proces identyfikacji danego fragmentu DNA rozpoczyna się po każdym cyklu, a nie po zakończeniu całego łańcucha 30-40 cykli. Ten rodzaj badania pozwala uzyskać informacje o ilości patogenu (wirusa lub drobnoustroju) w organizmie, czyli przeprowadzić analizę ilościową.
• RT-PCR (tryb odwrotnej transkrypcji). Test ten służy do znalezienia jednoniciowego RNA w celu wykrycia wirusów, których podstawą genetyczną jest RNA (na przykład wirus zapalenia wątroby typu C, wirus niedoboru odporności). W takim badaniu stosuje się specjalny enzym - odwrotną transkryptazę i pewien starter, a jednoniciowy DNA budowany jest na bazie RNA. Następnie z tej nici odzyskuje się drugą nić DNA i przeprowadza się standardową procedurę.

Wskazania do trzymania

Procedura PCR stosowana jest w klinice chorób zakaźnych, neonatologii, położnictwie, pediatrii, urologii, ginekologii, wenerologii, neurologii, nefrologii, okulistyce.

Wskazania do analizy:

• wyjaśnienie ryzyka rozwoju nieprawidłowości genetycznych u dziecka z prawdopodobieństwem dziedzicznych patologii;
• diagnozowanie obojga rodziców podczas planowania ciąży lub ciężkiego stanu matki w trakcie trwającej ciąży;
• trudności z poczęciem, identyfikacja przyczyn niepłodności;
• podejrzenie infekcji seksualnych w ostrym stadium iz objawami ich przejścia w przewlekłe;
• wykrywanie przyczyn procesów zapalnych o niejasnym pochodzeniu;
• niezabezpieczone przypadkowe i stałe kontakty seksualne;
• określenie wrażliwości drobnoustroju chorobotwórczego na określone antybiotyki;
• pacjenci z podejrzeniem infekcji utajonej w celu wykrycia patogenów przed wystąpieniem objawów jawnych (diagnoza przedkliniczna);
• pacjenci w celu potwierdzenia powrotu do zdrowia po chorobie (diagnoza retrospektywna);

Diagnostyka jest również stosowana, jeśli konieczne jest dokładne zidentyfikowanie następujących patogenów:

• wirusy zapalenia wątroby (AB C G), ludzki niedobór odporności, cytomegalowirus;
• wibrio cholera;
• wirus opryszczki pospolitej, gatunki herpetiform;
• retro - adeno - i rinowirusy;
• wirusy różyczki, Epstein-Barr, ospy wietrznej (Zoster - wirus);
• parwo i pikornawirusy;
• bakteria Helicobacter pylori;
• legionella, patogenne typy Escherichia coli;
• Staphylococcus aureus;
• patogen;
• Clostridia, błonica i Haemophilus influenzae;

Służy również do określania infekcji:

• Zakaźna mononukleoza;
• borelioza, listerioza, kleszczowe zapalenie mózgu;
• kandydoza wywołana przez grzyby Candida;
• infekcje seksualne - rzęsistkowica, ureaplazmoza, blada treponema, gardnereloza, rzeżączka, mykoplazmoza, chlamydia;
• gruźlica.

Przeciwwskazania do trzymania

Ponieważ zabieg nie jest wykonywany z pacjentem, bez wpływu na organizm, ale z materiałem biologicznym pobranym do badań, nie ma przeciwwskazań do PCR ze względu na brak potencjalnego zagrożenia.

Po zabiegu kolposkopii nie pobiera się jednak biomateriału z kanału szyjki macicy. Dostarczenie wymazów, zeskrobin do analizy jest dozwolone tylko 4 do 6 dni po zakończeniu miesiączki i całkowitym ustaniu wydzieliny.

Czy metoda jest bezpieczna?

Nie jest możliwy negatywny wpływ na pacjenta w izolowanym badaniu jego biomateriału w laboratorium.

Przygotowanie do zabiegu (dostarczenie substancji biologicznych do analizy)

Jako próbkę do analizy PCR, w której wykrywa się DNA obcego patogenu, stosuje się dowolny płyn biologiczny, tkankę, wydzieliny ciała. Pobieranie próbki substancji badanej odbywa się w formie pobrania krwi z żyły, zeskrobania z krtani, jamy nosowej, cewki moczowej, jamy opłucnej, szyjki macicy.

Przed zabiegiem diagnostycznym lekarz wyjaśnia pacjentowi, jaki materiał zostanie pobrany:

1. Podczas badania infekcji seksualnych pobiera się wydzieliny z narządów płciowych, mocz i wymaz z cewki moczowej.
2. Analizując infekcje opryszczkowe, cytomegalowirus, mononukleozę - pobierają mocz, wymaz z gardła do analizy, na zapalenie wątroby, toksoplazmozę - krew z żyły.
3. W celu zdiagnozowania różnych typów pobiera się płyn mózgowo-rdzeniowy.
4. W pulmonologii próbkami do analizy są plwocina i płyn opłucnowy.
5. Podczas przeprowadzania badania możliwych infekcji wewnątrzmacicznych podczas ciąży do analizy wykorzystuje się płyn owodniowy i komórki łożyska.

Wiarygodność i dokładność analizy zależy od sterylności warunków podczas pobierania materiału. Ponieważ test PCR jest bardzo czuły, każde zanieczyszczenie badanej substancji może zniekształcić wynik.

Kompetentne przygotowanie do dostarczenia biomateriału nie nastręcza pacjentom żadnych trudności. Istnieją pewne zalecenia:

• przy analizie pod kątem infekcji seksualnych:
  • wykluczyć kontakty intymne na 72 godziny przed dostarczeniem materiału;
  • przestań używać jakichkolwiek produktów dopochwowych przez 3 dni;
  • od wieczora poprzedniego dnia nie przeprowadzaj higieny badanego obszaru;
  • wykluczyć oddawanie moczu przez 3-4 godziny podczas pobierania próbki z cewki moczowej;
• zaprzestać przyjmowania antybiotyków na miesiąc przed badaniem pod kątem infekcji;
• oddaj krew rano przed jedzeniem i piciem;
• pobranie pierwszej porannej porcji moczu odbywa się w sterylnym pojemniku po dokładnej intymnej toalecie.

Przeczytaj więcej o tym, jak przeprowadza się diagnostykę metodą reakcji łańcuchowej polimerazy.

Jak przebiega procedura?

Podczas ciągłego badania PCR w reaktorze (wzmacniaczu lub termocyklerze), niektóre cykle są powtarzane:

1. Pierwszym krokiem jest denaturacja. Ślina, krew, biopsja, próbki ginekologiczne, plwocina, w których podejrzewa się obecność DNA (lub RNA) patogenu, umieszcza się we wzmacniaczu, gdzie materiał jest podgrzewany, a DNA rozdzielane na dwa oddzielne łańcuchy.
2. Drugim krokiem jest wyżarzanie lub lekkie ochłodzenie materiału. i dodanie do niego starterów, które mogą rozpoznać pożądane odcinki w cząsteczce DNA i związać się z nimi.
3. Trzeci krok to wydłużenie- występuje po dodaniu 2 starterów do każdej z nici DNA. Podczas tego procesu fragment DNA patogenu zostaje uzupełniony i powstaje jego kopia.

Cykle te powtarzają się jak „reakcja łańcuchowa”, za każdym razem prowadząc do podwojenia kopii określonego fragmentu DNA (na przykład segmentu, w którym zaprogramowany jest określony wirus). W ciągu kilku godzin powstaje wiele kopii fragmentu DNA i wykrywana jest ich obecność w próbce. Następnie wyniki są analizowane i porównywane z bazą danych różnych rodzajów patogenów w celu określenia rodzaju infekcji.

Przeczytaj o interpretacji wyników i wnioskach na podstawie reakcji PCR poniżej.

Rozszyfrowanie wyników

Ostateczny wynik badania wydawany jest 1-2 dni po dostarczeniu materiału biologicznego. Często - już w pierwszym dniu po analizie.

Analiza jakościowa

• Negatywny wynik oznacza, że ​​w zgłoszonej do badań substancji nie znaleziono śladów czynników zakaźnych.
• Pozytywny wynik oznacza wykrycie patogennych wirusów lub bakterii w próbce biologicznej z bardzo wysokim stopniem dokładności w momencie składania wniosku.

Jeśli wynik jest pozytywny, ale nie ma oznak aktywacji infekcji, taki stan organizmu nazywamy bezobjawowym „zdrowym nosicielem”. Najczęściej obserwuje się przy pobieraniu biomateriału z określonego miejsca (kanał szyjki macicy, cewka moczowa, jama ustna) w chorobach wirusowych. Leczenie w tym przypadku nie jest wymagane, ale konieczny jest stały nadzór lekarski, ponieważ istnieje możliwość:

• rozprzestrzenianie się wirusa od nosicieli i zakażenie zdrowych ludzi;
• aktywacja procesu i przejście choroby do postaci przewlekłej.

Jeśli jednak wynik badania krwi jest pozytywny, oznacza to, że infekcja wpłynęła na organizm i nie jest to już stan nosicielstwa, ale patologia wymagająca natychmiastowej specyficznej terapii.

Analiza ilościowa

Wynik ilościowy określa specjalista specjalnie dla konkretnego rodzaju infekcji. Na jego podstawie można ocenić stopień rozwoju, stadium choroby, co pozwala szybko przepisać prawidłowe leczenie.

średni koszt

Ceny za przeprowadzenie reakcji łańcuchowej polimerazy określa: rodzaj badania, złożoność identyfikacji patogenu, trudność pobrania materiału biologicznego, rodzaj analizy (jakościowa lub ilościowa), poziom cen w laboratorium.

Z drugiej strony w badaniu PCR można wykryć jednocześnie kilka patogenów, biorąc do analizy jeden rodzaj materiału. Oszczędza to na innych testach laboratoryjnych.

W przybliżeniu koszt analizy PCR w rublach:

• gonokoki, gardnerella, trichomonas vaginalis - od 180
• chlamydia trachomatis - od 190
• wirus brodawczaka - od 380 do 500
• biocenoza układu moczowo-płciowego u kobiet (ilościowa i jakościowa ocena mikroflory) - od 800.

Nawet więcej przydatna informacja dotyczące badania PCR, zobacz poniższy film:

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) to wysoce precyzyjna metoda molekularnej diagnostyki genetycznej, która umożliwia wykrycie różnych chorób zakaźnych i dziedzicznych u ludzi, zarówno w ostrych, jak i przewlekłych stadiach oraz na długo przed ujawnieniem się choroby.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) została opracowana w 1983 roku przez Cary'ego Mullisa (USA), za którą w 1993 roku otrzymał Nagrodę Nobla w dziedzinie chemii.

Analiza PCR stała się rodzajem „złotego standardu” dla większości infekcji. Większość specjalistów mierzy się z nim niemal codziennie i nie wyobraża sobie bez niego ostatecznej diagnozy. PCR często staje się jedyną reakcją wykrywającą aktywne stadia choroby w tych momentach, w których inne bakteriologiczne, wirusologiczne i immunologiczne metody diagnostyczne nie działają.

Zalety diagnostyki PCR we współczesnej medycynie:

Bezpośrednie wykrycie obecności patogenu (mianowicie określonego regionu DNA lub RNA patogenu) w badanej próbce.
Wysoka swoistość umożliwia określenie unikalnego odcinka DNA lub RNA charakterystycznego dla konkretnego patogenu, co eliminuje możliwość fałszywych reakcji.
Wysoka czułość metody PCR umożliwia wykrycie nawet pojedynczych komórek patogenów (wirusów, bakterii). Czułość analizy PCR wynosi 10-1000 komórek w badanej próbce (przykładowo czułość testów immunologicznych i mikroskopowych to tylko 103-105 komórek).
Opracowanie uniwersalnej techniki PCR do wykrywania różnych patogenów. Przedmiotem badań metodą PCR jest materiał genetyczny (DNA, RNA) patogenu. Technika pozwala na wykrycie kilku patogenów z jednej próbki biologicznej.
Stosunkowo szybkie wyniki analizy. Pełne badanie przeprowadza się w 4-4,5 godziny, rzadziej - trochę dłużej.
Zdolność do wykrywania patogenów przed wystąpieniem objawów choroby (diagnoza przedkliniczna) i po przebytej chorobie (diagnoza retrospektywna). Przykładem diagnozy przedklinicznej może być badanie w okresie inkubacji (od momentu infekcji do wystąpienia dolegliwości pacjenta), a także infekcja utajona (gdy nie ma żadnych objawów, ale są tylko dane laboratoryjne - PCR , na przykład). Jednym z ważnych punktów diagnostyki PCR jest PCR w materiale archiwalnym lub szczątkach biologicznych, co ma znaczenie dla identyfikacji osoby lub ojcostwa.

Obecnie diagnostyka PCR przechodzi znaczący rozwój. Sama metoda jest udoskonalana, wciąż pojawiają się nowe rodzaje PCR, na rynek medyczny wchodzą nowe systemy testowe dla tej reakcji. Dzięki temu z roku na rok koszty badań PCR stają się coraz bardziej przystępne dla szerokiego grona pacjentów.

Jaka jest podstawa metody PCR

Podstawą reakcji łańcuchowej polimerazy jest wielokrotne podwajanie (amplifikacja) pewnego odcinka DNA lub RNA za pomocą enzymów w laboratorium. W rezultacie powstaje ilość DNA lub RNA wystarczająca do analizy wizualnej. W trakcie badań kopiowany jest tylko obszar, który odpowiada określonym warunkom i to tylko w sytuacji jego obecności w próbce badawczej.

Na przykład materiał do badań, w którym oczekuje się obecności fragmentów DNA lub RNA patogenu (śliny, krwi, moczu, wydzieliny z narządów płciowych) umieszcza się w specjalnym reaktorze (wzmacniaczu). Ponadto dodawane są do niego określone enzymy, które wiążą się z DNA lub RNA patogenu, a jego kopia jest syntetyzowana. To kopiowanie odbywa się w kilku etapach, jak „reakcja łańcuchowa”, a ostatecznie z jednej kopii materiał genetyczny można utworzyć setki i tysiące kopii. Potem następuje analiza i porównanie wyniku z istniejącą bazą danych na temat budowy różnych patogenów. Dzięki PCR można nie tylko zidentyfikować rodzaj patogenu, ale także podać ilościowy wynik analizy, czyli ile patogenów znajduje się w ludzkim ciele.

Metoda PCR rozszerza obecnie zakres możliwości prowadzonych badań: wprowadzanie mutacji, składanie fragmentów DNA i jest szeroko stosowana w medycynie np. do ustalenia ojcostwa, pojawienia się nowych genów i tak dalej.

Jakie infekcje można wykryć za pomocą diagnostyki PCR

1) Zakażenie wirusem HIV (można wykryć ludzki wirus niedoboru odporności HIV-1)
2) Wirusowe zapalenie wątroby typu A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Zakaźna mononukleoza (DNA wirusa Epstein-Barr - EBV)
4) Zakażenie wirusem cytomegalii (DNA-CMV)
5) Zakażenie herpetic (DNA - wirus opryszczki pospolitej HSV typu 1 i 2)
6) STI (infekcje przenoszone drogą płciową) - ureaplazmoza, gardnereloza, chlamydia, mykoplazmoza, rzęsistkowica,
7) Gruźlica (prątki gruźlicy)
8) Wirusy onkogenne - zakażenie wirusem brodawczaka (wirus brodawczaka ludzkiego (w tym jego onkogenne gatunki 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 i 59)
9) Borelioza, kleszczowe zapalenie mózgu
10) Listerioza
11) Kandydoza (grzyby z rodzaju Candida)
12) Zakażenie Helicobacter pylori
i inni

Biorąc pod uwagę spektrum patogenów, diagnostyka PCR jest aktywnie wykorzystywana w praktyce chorób ginekologicznych, urologicznych, zakaźnych, pulmonologii, ftyzjologii, gastroenterologii, hematologii, onkologii i innych.

Materiał do badań i zasady jego zbierania

Materiałem do badań PCR, w którym można wykryć obce DNA bakterii lub DNA lub RNA wirusa, mogą być różne podłoża biologiczne i płyny ludzkie: śluz, mocz, krew, plwocina, zeskrobanie komórek nabłonka, tkanki łożyska, krew , sok prostaty, płyn owodniowy, płyn opłucnowy.

Podczas badań przesiewowych w kierunku infekcji przenoszonych drogą płciową (STI) mężczyźni i kobiety pobierają wydzieliny z narządów płciowych, wymaz lub skrobanie z szyjki macicy, wymaz lub skrobanie z cewki moczowej (cewki moczowej), mocz.

Podczas badania pod kątem infekcji (infekcje opryszczkowe, CMVI, mononukleoza, toksoplazmoza, wirusowe zapalenie wątroby typu B, C, zakażenie wirusem HIV) pobiera się krew do PCR.

W celu rozpoznania mononukleozy zakaźnej, CMVI, zakażenia opryszczkowego pobiera się wymaz z gardła do badania na CMVI - mocz. Często płyn mózgowo-rdzeniowy jest pobierany w celu zbadania uszkodzenia układu nerwowego w wielu badaniach.

W pulmonologii materiałem jest plwocina, płyn opłucnowy.

Podczas badania infekcji wewnątrzmacicznych - płyn owodniowy, tkanka łożyska.

Przygotowanie do dostawy materiału i diagnostyka PCR

Prawie wszyscy pacjenci poddawani diagnostyce PCR mają prawo liczyć na rzetelny, dokładny i szybki wynik, który w dużej mierze zależy od możliwości laboratorium i profesjonalizmu asystenta laboratoryjnego. Jednocześnie wielu nie uważa, że ​​ta niezawodność w dużej mierze zależy od nas samych, a mianowicie od zaleceń lekarza prowadzącego, stylu życia i poprawności pobierania materiału. Podczas pobierania próbek materiału wymagane są warunki, które wykluczają skażenie (skażenie) materiału, a zatem podają w wątpliwość obiektywność analizy.

Właściwe przygotowanie do dostarczenia materiału nie jest szczególnie trudne. Istnieją następujące zalecenia lekarzy dla pacjentów:

1) nie żyć seksualnie na dzień przed dostarczeniem materiału;
2) krew do badań podawana jest rano na czczo (nie jedz, nie pij);
3) przy oddawaniu moczu pierwszą porcję rano zbiera się do czystego sterylnego pojemnika.

Terminy analizy PCR

Ostateczny wynik jest gotowy w 1,5-2 dni po dostarczeniu materiału. W niektórych przypadkach wynik jest gotowy już pierwszego dnia.

Interpretacja wyników PCR

Negatywny wynik PCR wskazuje na brak śladów czynników zakaźnych w badanym materiale w momencie jego dostarczenia. Większość przypadków wskazuje na brak infekcji, którą próbowano znaleźć w próbce testowej.

Pozytywny wynik PCR wskazuje na wykrycie śladów infekcji w badanej próbce biologicznej. Z dużą dokładnością wynik dodatni wskazuje na obecność infekcji w określonym czasie.

Zdarzają się sytuacje, w których PCR jest dodatni, ale nie można mówić o aktywnej infekcji - jest to tak zwany „wóz zdrowy” bez klinicznych objawów choroby, który nie wymaga leczenia, ale wymaga dynamicznej obserwacji przez lekarza. Częściej obserwuje się ją w wielu infekcjach wirusowych (HPV, CMVI, infekcja EBV, infekcja opryszczka i inne) w materiałach takich jak ślina, zeskrobanie kanału szyjki macicy, cewki moczowej, czyli z ogniska miejscowego. Nie wolno nam jednak zapominać, że przeniesienie zakażenia z nosicieli na zdrowe osoby jest możliwe, podobnie jak przejście do przewlekłej postaci choroby z aktywacją procesu. Jeśli PCR jest dodatni we krwi, oznacza to, że nie jest to już stan nosicielstwa i wymaga specyficznego leczenia.

Wynik ilościowy PCR jest oceniany tylko przez lekarza indywidualnie dla konkretnej infekcji osobno i nie ma ogólnych gradacji. Na podstawie ilościowego wyniku PCR lekarz może określić stopień aktywności infekcji i ustalić stopień zaawansowania choroby, co z pewnością wpłynie na przebieg i dawki przepisanych leków.

Jedno z ostatnich ekscytujących pytań: jak dokładna jest diagnostyka PCR?

Istnieją 3 definicje analizy PCR:

1. Dokładność (z dużym prawdopodobieństwem możliwe jest wykrycie lub brak infekcji).
2. Swoistość (dokładność w wykrywaniu określonej infekcji).
3. Czułość (nawet przy niskiej zawartości materiału genetycznego patogenów w próbce testowej infekcja zostanie wykryta).

Reakcja łańcuchowa polimerazy praktycznie nie daje wyników fałszywie dodatnich (to znaczy nie ma próbek dodatnich, w których nie ma infekcji). Wyniki fałszywie ujemne są rzadkie (częściej jest to spowodowane brakiem aktywnej infekcji u osoby w tej chwili). Na przykład infekcja utajona, infekcja przewlekła bez aktywności.

Specjalista chorób zakaźnych Bykova N.I.

Film o tym, dlaczego i jak wykonać test PCR na infekcje

Istota metody diagnostycznej PCR

Metoda reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) opiera się na zasadach biologii molekularnej i należy do dziedziny badań genetycznych.

Każdy żywy organizm zawiera w swojej strukturze cząsteczki kwasów nukleinowych - DNA i RNA. Jest to rodzaj paszportu genetycznego, który pomaga określić, do jakiego gatunku należy ten lub inny „nosiciel”. Jednak do zeskanowania tego „paszportu” do niedawna wymagana była pewna minimalna ilość materiału biologicznego. Jeżeli stężenie DNA było niższe niż to konieczne, analiza diagnostyczna nie była możliwa.

Podczas diagnozowania metodą PCR próbkę materiału biologicznego traktuje się specjalnymi enzymami (polimerazami), które pozwalają rozpocząć proces wielokrotnego kopiowania istniejącego DNA (RNA). Stosując kaskadę reakcji łańcuchowych, zgodnie z zasadą postępu geometrycznego, w ciągu zaledwie kilku godzin z jednej cząsteczki kwasu nukleinowego można uzyskać kilkadziesiąt bilionów kopii. Ten tom jest więcej niż wystarczający dla wszelkich badań porównawczych.

Do analizy wykorzystywany jest wzmacniacz, w którym w ściśle określonych warunkach temperaturowych zachodzi proces wielokrotnej replikacji DNA. Zwykle wystarcza 20-30 cykli replikacji. Każdy z nich obejmuje 3 kolejne etapy:

• denaturacja – podgrzanie matrycy DNA do 96°C z zniszczeniem wiązań wodorowych pomiędzy sąsiednimi łańcuchami;
• wyżarzanie - obniżenie temperatury o 4°C w celu wytworzenia widełek replikacyjnych;
• elongacja - uruchomienie polimeraz DNA do syntezy nowych łańcuchów nukleotydowych na bazie rodzica.

Każdy trzyetapowy cykl trwa średnio 15-20 minut.

Korzyści z diagnostyki PCR

Analiza PCR jest zaawansowana technologicznie i wymaga profesjonalizmu personelu laboratorium, ale dla współczesnej medycyny stała się źródłem niespotykanych dotąd możliwości w dziedzinie dokładnej diagnostyki.

Zalety PCR:

• uniwersalność (można zbadać każdy materiał biologiczny - od krwinek, śliny i włosów po podejrzane miejsca na miejscu zbrodni);
• wysoki próg czułości (metoda jest w stanie dać wynik w obecności pojedynczych komórek lub pojedynczych cząsteczek DNA w próbce);
• wielozadaniowość - w jednym podejściu można jednocześnie wykryć kilka różnych rodzajów nośników informacji (metody bakteriologiczne nie są do tego zdolne, ponieważ wymagają różnych pożywek dla każdego rodzaju mikroorganizmu);
• umiejętność przeprowadzenia dokładnej analizy ilościowej;
• szybkość przetwarzania (w przeciwieństwie do innych rodzajów badań genetycznych, diagnostyka PCR zajmuje tylko 5-7 godzin);
• dokładność wyniku (jeśli technologia jest obserwowana, błąd jest praktycznie wykluczony);
• stosunkowo niski koszt (analiza PCR nie wykracza poza średnią cenę za standardowe testy).

Wszystkie te zalety umożliwiają wykorzystanie reakcji łańcuchowej polimerazy do regularnego monitorowania procesu obróbki.

Twórca metody diagnostycznej PCR nie bez powodu otrzymał Nagrodę Nobla za „pomysł”. Metoda reakcji łańcuchowej polimerazy umożliwia:

• określić szczep czynnika zakaźnego o minimalnej zawartości w biomateriale (do pojedynczych struktur wirusowych);
• obliczyć dokładne stężenie patogenu w całym ciele (w celu określenia optymalnej dawki leków);
• ocenić stopień patologicznego wpływu na pacjenta i zidentyfikować szczepy o wysokiej oporności farmakologicznej;
• ustalić kolejne etapy infekcji i dokonać dalszej prognozy.

To interesujące! Możliwości analizy PCR są znacznie szersze niż ilościowa i jakościowa ocena tła zakaźnego w organizmie człowieka. Oprócz wykrywania infekcji służy do ustalenia pokrewieństwa, określenia osobowości, identyfikacji patologii genetycznych i porównywania biomateriału w kryminalistyce.

Jakie infekcje można wykryć za pomocą diagnostyki PCR

Analiza PCR jest w stanie z dużą dokładnością obliczyć każdego nosiciela zakaźnego zawartego we współczesnym medycznym katalogu chorób:

• czynniki sprawcze zapalenia wątroby wszystkich typów (PCR pozwala zidentyfikować źródło infekcji na etapie okresu inkubacji i rozpocząć leczenie na długo przed wystąpieniem objawów choroby);
• patogeny HIV i STD (ureaplazmy, mykoplazmy, chlamydia, rzęsistki);
• grupa infekcji TORCH (istotna przy badaniu kobiet w ciąży w celu wczesnego wykrycia patologii płodu);
• gruźlica (utajona postać choroby);
• kandydoza (postać utajona);
• infekcja enterowirusowa;
• mononukleoza;
• listerioza;
• salmonelloza (definicja konkretnego szczepu);
• wirus brodawczaka;
• gardnereloza;
• wirus kleszczowego zapalenia mózgu.

Szczególnie popularna jest analiza infekcji wewnątrzkomórkowych (na przykład chlamydii), których określenie w zwykły sposób jest trudne nawet przy wysokim stężeniu tych drobnoustrojów w tkankach pacjenta.

Biorąc pod uwagę wielozadaniowość metody, możliwe jest wykonanie jednoczasowej analizy PCR dla 12 podstawowych infekcji. Zintegrowane podejście jest wygodnym wyborem do rutynowych badań przesiewowych organizmu pod kątem infekcji przenoszonych drogą płciową przy minimalnym ryzyku błędnej diagnozy.

Uwaga! Za pomocą diagnostyki PCR prognozuje się tak zwane „śpiące” formy infekcji, które występują w organizmie bez objawów choroby (szczególnie ważne w leczeniu chorób ginekologicznych i urologicznych, gruźlicy, odkleszczowej zapalenie mózgu, wirus brodawczaka).

Jakie materiały biologiczne są badane

Nie ma ustalonych zasad ani granic. Wszechstronność metody pozwala na wykorzystanie do analizy dowolnego materiału biologicznego:

• wymaz z pochwy, skrobanie z cewki moczowej i kanału szyjki macicy (do diagnozy chorób przenoszonych drogą płciową);
• mocz (gruźlica, niektóre choroby przenoszone drogą płciową, cytomegalowirus);
• krew (HIV, zapalenie wątroby, infekcje TORCH);
• wymaz z gardła (mononukleoza, wirus cytomegalii);
• alkohol (neuroinfekcja)
• płyn owodniowy i tkanki łożyska (analiza infekcji TORCH w celu zapobiegania patologiom rozwoju płodu);
• płyn opłucnowy (infekcje płuc).

Do innych rodzajów diagnostyki PCR (ustalenie pokrewieństwa, porównanie biomateriału) wykorzystuje się ślinę, włosy, paznokcie, komórki nabłonkowe i inne źródła informacji genetycznej.

Uwaga! Metoda diagnostyki PCR ujawnia patogeny nie tylko w składzie żywych tkanek, ale także w próbkach gleby, wody, podłoży roślinnych; ocenić patogenną aktywność drobnoustrojów zarówno w organizmie człowieka, jak i w jego środowisku (obecność ustalonego źródła choroby pozwoli na podjęcie odpowiednich działań zapobiegających jej w przyszłości).

Jak przygotować się do analizy

Pacjenci naszej kliniki nie muszą się zastanawiać, gdzie wykonać test PCR. Zapewniamy wszelkie warunki do sterylnego pobrania materiału i wysłania go do laboratorium.

Specjalne szkolenie nie jest wymagane, ale wskazane jest przestrzeganie listy ogólnych zaleceń. Zrezygnuj z alkoholu na kilka dni, ogranicz palenie, jeśli to możliwe, wyklucz leki, staraj się unikać stresujących sytuacji i dużego wysiłku fizycznego.

Reszta przygotowania do zaliczenia analizy zależy od rodzaju biomateriału:

• przed pobraniem wymazu lub skrobania na infekcje układu moczowo-płciowego powstrzymaj się od stosunków płciowych przez 2-3 dni (kobiety powinny upewnić się, że dzień testu nie przypada na dni menstruacji);
• przed wykonaniem badania krwi do PCR powstrzymaj się od jedzenia rano (badanie wykonuje się na pusty żołądek) i wypij szklankę czystej niegazowanej wody;
• przed oddaniem moczu powstrzymaj się od pokarmów wpływających na kwasowość moczu (owoce, mięso, rośliny strączkowe, warzywa).

Ważny! Najważniejszym wymogiem w diagnostyce zakażeń metodą PCR jest czystość biomateriału. Dlatego postaraj się dołożyć wszelkich starań, aby wykluczyć zanieczyszczenie tkanek obcym DNA (zadbaj o sterylność opakowania transportowego, higienę osobistą, czyste ubrania).

Rozszyfrowanie analizy PCR

Wyniki jakościowej analizy PCR dla infekcji są podane w formie tabeli, w której każdy czynnik zakaźny ma odpowiedni znak:

• wynik negatywny (czynnik sprawczy tego gatunku jest nieobecny);
• wynik dodatni (wykryto czynnik sprawczy).

Brak objawów choroby może nie odpowiadać rzeczywistemu obrazowi, więc dla kogoś wyniki analizy będą nieoczekiwane. Nie powinieneś się denerwować: identyfikacja czynnika zakaźnego na wczesnym etapie jest kluczem do skutecznego i szybkiego wyleczenia.

Podczas przeprowadzania ilościowej analizy PCR można ocenić stopień obciążenia wirusem (sprawdź liczbę kopii wirusa na jednostkę objętości). Dzięki tego typu badaniom możliwe jest określenie intensywności przebiegu procesu zakaźnego, a także ocena skuteczności leczenia.

Analiza PCR: cena i warunki

Średni czas diagnostyki to 5-10 godzin. Wyniki w formie tabeli są wydawane już następnego dnia roboczego po pobraniu biomateriału.

Przy wyborze analizy PCR cena nie ma znaczenia. Średnio wysokość kosztów nie wykracza poza zakres konwencjonalnych testów biochemicznych i, w przeciwieństwie do większości badań genetycznych, jest dostępna dla wszystkich pacjentów.