Cik daudz tiek darīts pcr latentu infekciju ārstēšanai. Kā tiek veikta PCR analīze: procedūras apraksts. Ja iedod uztriepi, tad vajag

Dažādu veidu infekcijas slimību - gan vīrusu, gan baktēriju - diagnostika ir vērsta uz patogēnu identificēšanu agrīnā stadijā, kas ļauj noteikt savlaicīgu un īpaši efektīvu ārstēšanu. Vismodernākā infekciju noteikšanas metode ir PCR, kas apzīmē polimerāzes ķēdes reakciju. Kāda ir šīs metodes būtība un kāds ir tās mērķis?

Polimerāzes reakcijas būtība

Jebkura vīrusa un mikroorganisma struktūra satur RNS vai DNS molekulas. Raksturīgi, ka šie savienojumi ir unikāli katram, un tāpēc, izolējot nukleīnskābes pieaugušo vai bērnu asins analīzēs, diagnozi var veikt ar absolūtu precizitāti.

Diemžēl DNS koncentrācija gan asins paraugos, gan citos bioloģiskajos materiālos ir diezgan zema, tāpēc to nevar noteikt ar parastajām diagnostikas metodēm. Lai tiktu galā ar šo problēmu, savulaik tika izgudrota polimerāzes ķēdes reakcija.

Tātad šīs analīzes būtība ir specifiskā asins parauga apstrādē, kuras dēļ tajā palielinās DNS molekulu koncentrācija, un to veida noteikšana nākotnē ļauj identificēt arī patogēna veidu. lai noteiktu pareizo diagnozi.

Kā tiek veikta PCR asins analīze?

PCR metodi veic tikai laboratorijas apstākļos. Lai to veiktu, tiek izmantoti īpaši fermenti, kas vairākas reizes palielina pacienta RNS un DNS struktūru. Šajā gadījumā ir jāveido tāds to skaits, lai būtu iespējams veikt vizuālu pētījumu. Aptaujas laikā tiek veikta šādas vietnes kopija, kas visos aspektos atbilst nepieciešamajiem nosacījumiem. Kas ir PCR asins analīze RNS noteikšanai, daudziem ir interesants.

Laboratorijā ir pieejama nepieciešamā datu bāze, kurā norādīta precīza dažādu infekcijas izraisītāju struktūra. PCR metodes izmantošana ļauj ne tikai noteikt patogēna veidu, bet arī aprēķināt tā kvantitatīvo proporciju.

PCR diagnostika ietver arī dažus jauninājumus, starp kuriem izceļas:

Dažādu DNS fragmentu savienošana;

Mutācijas ieviešana;

Paternitātes noteikšana utt.

Kādas slimības tiek atklātas ar PCR?

Pateicoties PCR, ir iespējams identificēt gandrīz visas baktēriju un vīrusu patoloģijas. Pētījumiem var izmantot ne tikai asinis, bet arī citus bioloģiskos materiālus, piemēram, uztriepes no urīnizvadkanāla un no dzemdes kakla, siekalas, spermu. Analīze kļūst diezgan informatīva, kad noteiktas slimības izraisītājs nonāk cilvēka asinīs. Tāpēc PCR asins analīze tiek noteikta šādām patoloģijām:

A, B, C, D un TT tipa vīrusu hepatīts;

Herpetiska rakstura infekcija (tas ir, pirmā, otrā un ceturtā tipa vīrusi);

citomegalovīruss;

Enterovīrusa infekcija;

HIV infekcija;

Masaliņas;

Listerioze;

Jostas roze;

Infekciozā mononukleoze;

Toksoplazmoze.

Ja ņemam vērā PCR ieviešanu, izmantojot citus biomateriālus, tad to patoloģiju sarakstam, kuras var noteikt, izmantojot šo metodi, jāpievieno:

salmoneloze;

difterija;

Gardnereloze;

Mikoplazmoze;

Tuberkuloze;

Trichomoniāze;

- papilomas vīrusa infekcija (apmēram simts dažādu cilvēka papilomas vīrusa celmu).

Īpaši aktuāla tagad ir kļuvusi PCR asins analīze grūtniecības laikā TORCH infekcijām, kas ietver toksoplazmozi, citomegalovīrusu, herpesvīrusa infekciju un masaliņas. Tas ir saistīts ar faktu, ka iepriekš minētās slimības var izraisīt anomālijas augļa attīstībā.

PCR priekšrocības

Kādas ir šīs metodes priekšrocības?

• Simtprocentīga diagnozes precizitāte: ja asinīs ir vismaz vairāki patogēna DNS fragmenti, tos noteiks PCR reakcija, kas nozīmē, ka tiks noteikta pareizā diagnoze. Šī ir galvenā atšķirība starp šo metodi un citām diagnostikas metodēm - pilnu asins analīzi, ELISA un citām.
• Specifiskums. Piemēram, veicot PCR asins analīzi boreliozes noteikšanai, nav tādas lietas kā viltus negatīvs vai viltus pozitīvs rezultāts, kas to atšķirtu no ar enzīmu saistītā imūnsorbcijas testa jeb ELISA.
• Analīzes veikšana var tikt veikta, lai pēc viena biomateriāla parauga noteiktu vairākus patogēnus vienlaikus, padarot šo metodi ērtu pacientam, jo ​​viņam nav jāveic analīze vairākas reizes.
• Ātrums. Nav nepieciešams izolēt un audzēt patogēnu uz īpašām barotnēm, kas nepieciešamas bakterioloģiskās izmeklēšanas laikā. Jūs varat iegūt gatavo rezultātu analīzes dienā.

• Ar PCR asins analīzi hepatīta noteikšanai, piemēram, tiek noteikts slēptais slimības izraisītājs organismā, kad pacients darbojas kā infekcijas (HIV vai hepatīta) nesējs.
• Pieejama cena. PCR analīzes izmaksas, lai noteiktu vienu patogēnu, svārstās no divsimt piecdesmit līdz piecsimt rubļu. Puskvantitatīvā pārbaude uz vīrusiem maksā nedaudz vairāk - apmēram tūkstotis rubļu.

Metodes trūkumi

PCR ir augsto tehnoloģiju pētniecības metode, kas izvirza augstas prasības laboratorijas iekārtām. Analīzes telpā obligāti jābūt bioloģiskam filtram, jo ​​gaisā vienmēr ir siekalu un ādas daļiņas, kas satur DNS molekulas. Tehnisko prasību neievērošana darbam ar biomateriāliem var izraisīt nepareizu diagnozi.

Kam vajadzētu veikt asins analīzes PCR?

Aptauju var piedalīties ikviens. Indikācija tam ir aizdomas par seksuāli transmisīvām infekcijām (HIV infekcija, bakteriāla vaginoze, hlamīdijas). Ja nejauši noticis neaizsargāts dzimumkontakts, tikai PCR ļaus agrīnā stadijā noteikt pareizu diagnozi, ja cilvēks ir inficējies ar kādu konkrētu slimību.

Asinis TORCH-kompleksam ir obligātas grūtniecēm, kā arī tām, kuras tikai plāno ieņemt bērnu.

Lai gan PCR ir maksimālais efektīva metode diagnostiku, bet tajā nav jāiet ciklos. Jebkuras patoloģijas klātbūtnē ir nepieciešams visaptveroši pārbaudīt pacientu. Ja polimerāzes ķēdes reakcija ļauj noteikt patogēnu, tad, pateicoties seroloģiskajam pētījumam, ir iespējams novērtēt terapijas efektivitātes līmeni, cilvēka ķermeņa reakciju uz patogēnu un medikamentiem. PCR asins analīze HIV noteikšanai jāpasūta ārstam.

Procedūras un sagatavošanas iezīmes

Pacienti, kuri tiek pārbaudīti, izmantojot PCR metodi, saņem visdrošāko rezultātu. Jāsaka, ka šajā gadījumā kļūdu iespējamība ir gandrīz pilnībā novērsta. Arī šīs analīzes rezultāti tiek sagatavoti diezgan ātri, kas atvieglo diagnozes noteikšanu un ļauj laikus izrakstīt nepieciešamās medicīniskās procedūras.

Ar PCR metodi iegūtā rezultāta ticamību nosaka pareiza bioloģiskā materiāla piegāde pārbaudei. To nedrīkst ne ar ko piesārņot, pretējā gadījumā rezultāts nebūs objektīvs.

• dzimumakta aizliegums dienu pirms procedūras;
• asins analīzes, lai noteiktu infekcijas, jāveic no rīta un tikai tukšā dūšā;
• urīnu ievada arī no rīta sterilā traukā.

Pusotru vai divas dienas pēc procedūras PCR asins analīze tiks atšifrēta un rezultāts ir gatavs. Ir pat gadījumi, kad rezultātu var iegūt tajā pašā dienā.

Kā sagatavot materiālu analīzei?

Lai pētījumu veiktu pēc iespējas veiksmīgāk, ir pareizi jāņem materiāls no pacienta un jāveic tā kompetenta sagatavošana. Labi zināms fakts, ka laboratorijas pētījumos parauga sagatavošanas laikā rodas liels skaits kļūdu (līdz aptuveni septiņdesmit procentiem).

Pašlaik dažās laboratorijās asinis tiek ņemtas, izmantojot vakuuma sistēmas. No vienas puses, tie minimāli traumē pacientu, no otras – ļauj paņemt materiālu tā, lai tas nenonāktu saskarē ne ar vidi, ne personālu. Tas ļauj izvairīties no bioloģiskā materiāla piesārņojuma un palielina analīzes ticamību.

Rezultātu atšifrēšana

PCR asins analīzes rezultāts var būt pozitīvs vai negatīvs. Ja asins analīze ir negatīva, tas norāda uz infekcijas patogēnu neesamību pacienta nodotajā materiālā. Pozitīva analīze apstiprina, ka asinīs ir infekcijas izraisītāji, kas nozīmē, ka nepieciešama visefektīvākā un kvalitatīvākā pacienta ārstēšana.

Iegūtais rezultāts var būt pozitīvs pat tad, ja nav nekādu slimības simptomu. Tas norāda vai nu patoloģiskā procesa sākumu, vai arī to, ka persona ir nesējs. Ja tiek atklāts pēdējais, medicīniskās procedūras nav nepieciešamas. Šajā gadījumā pacientam ieteicams pastāvīgi būt ārsta uzraudzībā, kas nozīmē, piemēram, periodisku PCR asins analīzi herpes un citu infekciju noteikšanai.

Visbiežāk tie ir atrodami urīnizvadkanālā, no dzemdes kakla kanāla izgatavotos skrāpējumos, siekalās. Taču jāatceras, ka slims cilvēks spēj inficēt arī pilnīgi veselus cilvēkus, pat ja šī slimība viņam netraucē. Tas var kļūt hronisks. Jāsaka, ka ar pozitīvu rezultātu, kas iegūts, izmantojot PCR, ir nepieciešams nozīmēt atbilstošas ​​medicīniskās procedūras.

PCR kvantitatīvais raksturojums

Kvantitatīvi raksturo arī PCR asins analīzi infekcijām. Šādu rezultātu var novērtēt tikai speciālists, jo tas ir individuāls dažādām infekcijām. Tas ir kvantitatīvs raksturlielums, kas ļauj ārstam noteikt šāda patoloģiskā procesa aktivitātes pakāpi, noteikt precīzu konkrētas slimības attīstības stadiju.

Iegūto rezultātu izpēte palīdzēs speciālistam izvēlēties atbilstošās zāles, norādīt nepieciešamo devu.

Diagnostikas precizitāte

Ir trīs vissvarīgākās PCR īpašības, proti:

Jutīgums;

Specifiskums;

Precizitāte.

Infekciju diagnostiku, izmantojot PCR, raksturo liela varbūtība atklāt infekcijas izraisītājus organismā. Asins un citu šķidrumu analīze ir ļoti specifiska. Pateicoties viņam, jūs varat viegli noteikt konkrētu infekcijas procesu, nokārtojot, piemēram, PCR asins analīzi uz hepatītu vai HIV. Turklāt PCR diagnostika ir ļoti jutīga. Ja testa materiālā ir minimāls infekcijas izraisītāju skaits, PCR metode vienmēr būs pozitīva.

Ļoti retos gadījumos var iegūt viltus pozitīvu rezultātu. Ja nav infekcijas, tas attiecīgi būs negatīvs.

Slēpto slimību identificēšana

Ja cilvēkam ir aizdomas par STI, tiek nozīmēta asins analīze, lai noteiktu slēptās infekcijas. Jebkuras dzimumorgānu slimības var noteikt tikai pārbaudot pacientu.

Kursa latentais raksturs var būt šādām slimībām:

• ureaplazmoze;
• hlamīdijas;
• mikoplazmoze;
• herpes;
• gonoreja;
• gardnereloze.

Šīs infekcijas ir diezgan izplatītas un ļoti mānīgas. Slimības sākumā viņiem nav skaidri izteiktu simptomu, tāpēc pacienti nevēršas pie speciālista. Savlaicīgas PCR asins analīzes rezultāti par hlamīdiju, boreliozi un citām infekcijām palīdzēs ārstam izrakstīt efektīvu ārstēšanu.

STI negatīvi ietekmē reproduktīvo sistēmu. Tie var izraisīt neauglību vai augļa defektu parādīšanos. Tāpēc pirms grūtniecības plānošanas ir svarīgi veikt PCR testu.

Saturs

Tiem, kurus interesē jaunas diagnostikas metodes, vajadzētu noskaidrot, kas ir PCR metode. Mūsdienu tehniskās iespējas jomā laboratorijas pētījumi sniedz iespēju atklāt daudzas slimības sākuma stadijā. Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) pašlaik tiek uzskatīta par visprecīzāko un jaunāko metodi.

PCR analīze

PCR analīze - kas tas ir? Šī metode izmanto molekulārās bioloģijas principus. Materiāla izpētei tiek izmantoti speciāli fermenti, kas atkārtoti un ātri kopē patogēnu DNS, RNS fragmentus. Pastāv dažādi veidi PCR analīze atkarībā no pētāmā materiāla (asinis, urīns, izkārnījumi utt.). Pēc apstrādes laboratorijas darbinieki salīdzina rezultātu ar datu bāzi, nosaka koncentrāciju, patogēna veidu.

PCR analīze tiek ievietota īpašā pastiprinātājā (ierīcē), kas silda un atdzesē mēģenes ar biomateriālu. Fragmentu replikācijai ir nepieciešamas temperatūras izmaiņas. Rezultāta precizitāte būs atkarīga no temperatūras režīma precizitātes. Polimerāzes ķēdes reakcijas metode palīdz identificēt:

• Infekciozā mononukleoze;
• citomegalovīrusa infekcija;
• vīrusu hepatīts G, C, B, A;
• seksuāli transmisīvās infekcijas/slimības (STI/STS): gardnereloze, trichomoniāze, ureaplazmoze;
• herpetiska infekcija;
• onkogēni vīrusi;
• listerioze;
• helikobaktēriju infekcija;
• ērču encefalīts, borelioze;
• tuberkuloze;
• kandidoze.

Asinis

Šobrīd, pateicoties tehnoloģijas novitātei, PCR asins analīzei joprojām ir augsta cena. Biomateriāla sagatavošanai nav nepieciešams ievērot noteiktas prasības. Pat ko izraisa fiziskas aktivitātes, stress, izmaiņas uzturā, sastāva izmaiņas neietekmē pētījuma rezultātu. PCR asins analīze var tikai sabojāt antibakteriālo līdzekļu uzņemšanu, tāpēc pirms tā lietošanas ir nepieciešams pārtraukums starp ārstēšanu un testu.

PCR asins analīze ir visizplatītākā iespēja diagnosticēt hroniskas, akūtas infekcijas patoloģijas ar vīrusu vai netipisku izpausmi. Seroloģisko pētījumu metodēm ir zināmas grūtības veikt - patogēna klātbūtni nosaka antivielu klātbūtne cilvēka organismā. Rezultāts var būt kļūdaini negatīvs, ja pacienta stāvoklis nedeva laiku to attīstībai.

smērēt

Ginekoloģijas jomā PCR uztriepes analīzi izmanto, lai pētītu infekciozo mikroorganismu klātbūtni. Darbs ar materiālu tiek veikts pēc tāda paša principa kā ar asinīm: patogēna DNS fragmentu daudzkārtējs palielinājums, lai to viegli identificētu. Tas arī palīdz atklāt sievietes slēptās infekcijas. Analīzei var ņemt dažādus bioloģiskos šķidrumus: siekalas, krēpas, urīnu, asinis. Ginekoloģijā noteikšanas precizitātes labad biežāk tiek izmantota uztriepe no maksts gļotādas no dzemdes kakla kanāla.

Ir noteiktas PCR indikācijas. Bieži vien tas jādara, lai identificētu pret antibiotikām rezistentu patogēna veidu. Sievietēm galvenās indikācijas diagnozei ar šo metodi ir:

• grūta grūtniecība;
• STI akūtā fāze;
• ja ir aizdomas par STI pāreju uz hronisku stadiju;
• meklēt neauglības cēloņus.

Cala

Lai noteiktu infekciju, ārsts var noteikt fekāliju PCR testu. Lai pēc testa iegūtu ticamākos rezultātus, pirms biomateriāla ņemšanas ir jāievēro šādi noteikumi:

• uz dažām dienām pārtrauciet lietot caurejas līdzekļus: eļļas, svecītes;
• izslēdziet zāles, kas izkārnījumiem piešķir īpašu krāsu, piemēram, ar dzelzs saturu.

Paraugu ņemšanai izmantojiet sterilu kociņu un trauku. Kaut ko noslaucīt tos papildus, noskalot nav nepieciešams. Savācot materiālu, uzmanieties, lai ar roku nepieskartos konteinera iekšējām sienām. Pārliecinieties, ka izkārnījumos nav urīna piemaisījumu, jūs nevarat izmantot papildu palīglīdzekļus zarnu kustībai (klizmu). Materiāls jāsavāc piegādes dienā, pietiek ar 1/3 no konteinera tilpuma. Šai diagnostikas metodei ir šādas priekšrocības:

Urīns

Ja nepieciešams, ārsts var ņemt urīnu pārbaudei. Augsta precizitāte paver iespēju strādāt ar jebkuru bioloģisko šķidrumu, no kura iespējams iegūt vīrusa DNS. Lai izietu PCR urīna testu, pirms materiāla ņemšanas jāievēro šādi ierobežojumi:

• vismaz 1 dienu pirms procedūras pārtraukt dzimumaktu;
• 3 nedēļas pirms dzemdībām jāpabeidz jebkura antibakteriālā terapija, jo zāles izplūs attēlu;
• tests jāveic tukšā dūšā (arī šķidrums ir aizliegts);
• jums ir jāņem pirmā materiāla rīta daļa.

PCR testa rezultāti

No iepriekš minētā ir skaidrs, kas ir PCR analīze, un ir redzamas šīs pētniecības metodes skaidras priekšrocības. Vēl viens šīs diagnostikas procedūras pluss ir rezultātu atšifrēšanas vienkāršība. Ņemot vērā, cik daudz tiek veikta PCR analīze (pats process ilgst aptuveni 5 stundas, bet laboratorija datus izsniedz 1-2 dienu laikā), šī diagnostikas metode kļūst par labāko variantu daudzu infekciju noteikšanai. Pamatojoties uz rezultātiem, ārsts var pateikt, ka tests:

1. Negatīvs - pētītajā materiālā nebija vēlamā patogēna.
2. Pozitīvi - atrasta RNS, patogēna DNS.

Dažreiz tiek veikta mikroorganismu kvantitatīvā noteikšana. Tas ir nepieciešams slimībām, kas izraisa oportūnistiskus patogēnus. Šo vīrusu īpatnība ir tāda, ka tie parādās tikai pārmērīgi, un tos atrast ar tradicionālajiem pētījumiem ir ārkārtīgi problemātiski. Šis faktors ir svarīgs terapeitiskās taktikas izvēlei, lai efektīvi ārstētu vīrusu infekcijas, piemēram, hepatītu, HIV.

12 infekcijām

Lai pilnībā saprastu, kas ir PCR infekciju diagnosticēšanai un cik tā ir efektīva, jums jāzina, ka tas spēj izolēt līdz pat 12 patogēniem. Teksts tiek veikts tikai laboratorijas apstākļos. Pētījumiem tiek izmantoti speciāli fermenti, kas daudzkārt palielina vīrusa RNS, DNS fragmentu daudzumu. PCR analīze 12 infekcijām var atklāt:

• mikobaktērijas tuberkuloze;
• citomegalovīruss;
• hepatīts C, G, B, A;
• herpes 1, 2 veidi;
• Epšteina-Barra vīruss (infekciozā mononukleoze);
• seksuāli transmisīvas infekcijas, piemēram, hlamīdijas;
• listerioze;
• Candida infekcija;
• helicobacter pylori;
• borelioze, ērču encefalīts.

C hepatīta gadījumā

Šī diagnostikas metode palīdz noteikt vīrusa klātbūtni asinīs. Tas dod ārstiem iespēju runāt par tā esamību vai neesamību. C hepatīta noteikšanai ir divu veidu PCR analīzes: kvalitatīvā un kvantitatīvā. Pirmā opcija norāda tikai uz tā klātbūtni, un to var formulēt "atklāts" / "nav atklāts". Šāda veida testu jutība ir 10-500 SV/ml. Tas liecina, ka ar zemu patogēna saturu organismā analīze netiks “konstatēta”.

Kvantitatīvā analīze ir precīzāka un parādīs infekcijas koncentrāciju asinīs. Šis indikators ir apzīmēts kā "vīrusu slodze", ko mēra vīrusa RNS daudzumā uz noteiktu asins tilpumu. Atšifrēšana dažādās laboratorijās var atšķirties. Papildus mērīšanai SV / ml tiek izmantotas "kopijas" vienības. Varat pārrēķināt kopijas uz SV, izmantojot formulu: 1 IU = 4 kopijas. Ja transkriptā vīrusa klātbūtnes vērtība pārsniedz 800 000 SV / ml (vai 800 * 103), tas norāda uz augstu patogēna saturu.

Pret tuberkulozi

Pārbaude jāveic no rīta. Tas ir svarīgi, lai visas nakts laikā radušās krēpas neizkļūtu no kuņģa. PCR analīze tuberkulozei ir tikpat svarīga kā ELISA, Mantoux, tomogrāfija. Tests palīdz noteikt mikobaktēriju klātbūtni, urīna stāvokli, kopējo imūnglobulīnu, ESR un noteikt plaušu stāvokli šobrīd. Lai PCR analīzes rezultāti būtu precīzāki, tas jāveic saskaņā ar šādiem noteikumiem:

1. Sēšana tiek veikta 3 reizes, bet pilnīga kuņģa satura aspirācija jāveic tikai slimnīcā.
2. Atklāj mikobaktērijas, kultivējot esošās masas kuņģī mazāk nekā 50% gadījumu. Pat tad, ja tiek iegūti optimāli apstākļi, tā vietā ieteicams veikt ultraskaņu.
3. Pat ar negatīvu rezultātu nevar pilnībā izslēgt tuberkulozes attīstības iespējamību ar ESR, imūnglobulīna vai citu rādītāju izmaiņām.
4. PCR kultūra ir mazāk uzņēmīga pret patoloģiskiem stāvokļiem, ja to iegūst bronhoskopiskās izmeklēšanas ietvaros, kas izslēdz aizdomas par TB bērnam.

Par HIV

Daudziem cilvēkiem šī diagnoze tiek uzskatīta par nāvessodu. Šī iemesla dēļ pēc bieža dzimumakta cilvēks kļūst uzmanīgāks pret signāliem, ko viņa ķermenis dod (un dažreiz nāk ar tiem). Visuzticamākā iespēja iegūt šīs slimības apstiprinājumu vai atspēkošanu ir PCR tests HIV noteikšanai. Testu var izmantot, lai identificētu šādas iespējamās veselības problēmas:

1. HIV klātbūtnes noliegums/apstiprinājums seronegatīvā zirga periodā.
2. HIV-1, HIV-2 genotipa noteikšana.
3. Patoloģiskā procesa apraksta precizēšana ar apšaubāmu imūnblota rezultātu.
4. Infekcija pēc asins pārliešanas.
5. HIV statusa noteikšana bērniem, kas dzimuši mātēm, kas nēsājušas.
6. Palīdz izveidot ķermeņa vīrusu slodzes uzraudzību.

Pret HPV

Papilomas vīrusu var atklāt jebkurai personai, ilgu laiku tas var būt latentā stāvoklī. Attīstība provocē imūnsistēmas pavājināšanos, stresu vai emocionālus uzliesmojumus. HPV PCR analīze palīdz noteikt vīrusa koncentrāciju asinīs. Šī iemesla dēļ ir ieteicams veikt kvantitatīvu, nevis kvalitatīvu noteikšanu. Šie dati palīdzēs prognozēt infekcijas ļaundabīga rakstura attīstības iespējamību.

HPV klātbūtnes diagnostikas paņēmiens ir balstīts uz PCR galveno īpašību izolēt vīrusa DNS no materiāla. Pateicoties testa augstajai jutībai, tiks atklāts pat neliels baktēriju daudzums. Kvantitatīvā izpēte dod ārstiem iespēju noteikt slimības bīstamības pakāpi, veikt prognozi nākotnei. Šī diagnoze ir obligāta visiem vīriešiem un sievietēm, kuriem ir kārpas. Kvantitatīvā PCR analīze palīdzēs noteikt, kas izraisīja HPV attīstību: īslaicīga imunitātes samazināšanās vai hroniska slimība.

Pret herpes

Šāda veida diagnostika mikrobioloģijā palīdz ar augstu precizitāti veikt herpes PCR analīzi. Vīrusa DNS fragmentu kopēšana notiks tikai tad, ja materiālā būs vēlamais gēns. Šajā gadījumā pārbaude, kuras pamatā ir rīcības rezultāti, var norādīt uz patogēna klātbūtni vai neesamību. To būs iespējams noteikt pat ar zemu koncentrāciju asinīs.

Vēl viens PCR analīzes pluss ir tas, ka tā var atklāt herpes vīrusa infekciju tūlīt pēc inficēšanās, pirms klīnisko simptomu parādīšanās. Ir iespējams noteikt herpes veidu (1 vai 2), lai izturētu analīzi, īpaša sagatavošanās nav nepieciešama, taču ārsti iesaka pirms asins ņemšanas atteikties:

• cepts;
• akūts;
• alkohols;
• taukains.

Grūtniecības laikā

Pārnēsājot bērnu, ir ļoti svarīgi veikt šo pētījumu, lai ņemtu vērā sievietes stāvokli. PCR analīze grūtniecības laikā ir iekļauta visefektīvāko metožu sarakstā dažādu slimību klātbūtnes noteikšanai. Ir nepieciešams veikt pārbaudi ne tikai, lai identificētu patoloģijas, bet arī noteiktu bērna inficēšanās iespējamību dzemdē. Tikai pateicoties PCR diagnostikai, kļuva iespējams noteikt progresēšanas pakāpi, daudzu infekciju attīstību mātes dzemdē.

PCR analīžu piegāde

Ja jums rodas jautājums, kā tiek veikta PCR analīze, jāapsver katrs gadījums atsevišķi, ņemot vērā biomateriāla veidu. Piemēram, skrāpēšanai, uztriepei vai asins paraugu ņemšanai ir savas īpatnības.

Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir augstas precizitātes metode iedzimtu patoloģiju, infekciju, vīrusu slimību diagnosticēšanai jebkurā stadijā (akūtā vai hroniskā), kā arī - agrīnā stadijā - pirms acīmredzamām slimības izpausmēm, identificējot. patogēni, pamatojoties uz to DNS, RNS, kas ir ģenētiskais materiāls, paraugos, kas iegūti no pacienta. Un šodien mēs runāsim par polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metožu būtību, diagnostikas posmiem un principiem, kā arī par to izmaksām.

Kas ir polimerāzes ķēdes reakcija

Analīzes pamatā ir amplifikācija (dubultošana) - daudzu kopiju izveidošana no īsas DNS daļas (dezoksiribonukleīnskābes), kas pārstāv cilvēka ģenētisko kompleksu. Pētījumam nepieciešams ļoti mazs fizioloģisko vielu daudzums (krēpas, fekālijas, epitēlija skrāpējumi, prostatas sula, asinis, sperma, amnija šķidrums, gļotas, placentas audi, urīns, siekalas, pleiras šķidrums, cerebrospinālais šķidrums). Šādā gadījumā, piemēram, pacienta uroģenitālajā traktā var konstatēt pat vienu kaitīgu mikrobu.

PCR tehniku ​​(polimerāzes ķēdes reakciju) izstrādāja amerikāņu zinātnieks K. Mulliss, kurš 1993. gadā saņēma Nobela prēmiju.

Aktīvi lietots:

• infekciju agrīnā diagnostikā, ģenētiskā,;
• tiesu medicīnas ekspertīzē ārkārtīgi neliela DNS daudzuma klātbūtnē pētniecībai;
• veterinārmedicīnā, farmācijā, bioloģijā, molekulārajā ģenētikā;
• personas identificēšanai pēc DNS, paternitātes apstiprināšanai;
• paleontoloģijā, antropoloģijā, ekoloģijā (sekojot produktu kvalitātei, vides faktoriem).

Šis video pastāstīs, kas ir polimerāzes ķēdes reakcija:

Kam tas ir piešķirts

Polimerāzes ķēdes reakcija infekcijas slimību diagnostikā ir viena no uzticamākajām augstas precizitātes un uzticamības metodēm. Piemēram, PCR analīzes ticamība attiecībā uz hlamīdijām un daudziem citiem patogēniem tuvojas 100% (absolūtā). Visbiežāk polimerāzes ķēdes reakcijas procedūra tiek nozīmēta pacientiem, kuriem, veicot diagnozi, ir grūtības identificēt konkrētu patogēnu.

Laboratorijas PCR testu izmanto:

• atklāt patogēnus, kas izraisa urīnceļu un dzimumorgānu infekciju, kurus ir grūti identificēt ar kultūraugiem vai imunoloģiskām metodēm;
• HIV atkārtotai diagnosticēšanai sākotnējā stadijā pozitīva, bet apšaubāma sākotnējās analīzes rezultāta gadījumā (piemēram, jaundzimušajiem no vecākiem, kuri inficēti ar AIDS);
• onkoloģiskās slimības konstatēšana agrīnā stadijā (onkogēnu mutāciju izpēte) un individuāla ārstēšanas režīma korekcija konkrētam pacientam;
• iedzimtu patoloģiju agrīnai atklāšanai un iespējamai ārstēšanai.

Tātad topošie vecāki tiek pārbaudīti, lai noskaidrotu, vai viņi ir ģenētiskas patoloģijas nesēji; bērniem PCR nosaka iedzimtas slimības iedarbības iespējamību.

• lai atklātu augļa anomālijas agrīns termiņš grūtniecība (atsevišķas augoša embrija šūnas tiek pārbaudītas, lai noteiktu iespējamās mutācijas);
• pacientiem pirms orgānu transplantācijas - "audu tipizēšanai" (audu saderības noteikšanai);
• atklāt bīstamos patogēnos organismus ziedotajās asinīs;
• jaundzimušajiem - lai atklātu latentās infekcijas;
• novērtēt pretvīrusu un pretmikrobu ārstēšanas rezultātus.

Kāpēc iziet šo procedūru?

Tā kā PCR ir ļoti efektīva diagnostikas metode, kas dod gandrīz 100% rezultātu, tiek izmantota procedūra:

• apstiprināt vai izslēgt galīgo diagnozi;
• ātra terapijas efektivitātes novērtēšana.

Daudzos gadījumos PCR ir vienīgais iespējamais tests jaunattīstības slimības noteikšanai, ja citas bakterioloģiskās, imunoloģiskās un virusoloģiskās diagnostikas metodes ir bezjēdzīgas.

• Vīrusi tiek atklāti ar PCR tūlīt pēc inficēšanās un pirms slimības pazīmju parādīšanās. Agrīna vīrusa atklāšana ļauj ātri ārstēt.
• Tā saukto “vīrusu slodzi” (jeb vīrusu skaitu organismā) nosaka arī kvantitatīvā DNS analīze.
• Īpaši patogēni (piemēram, Koha tuberkulozes bacilis) ir sarežģīti, un to kultivēšana prasa pārāk ilgu laiku. PCR analīze ļauj ātri noteikt minimālo patogēnu skaitu (dzīvu un mirušu) paraugos, kas ir ērti pētījumiem.

Tiek izmantota detalizēta patogēna DNS analīze:

• noteikt tā jutību pret konkrētiem antibiotiku veidiem, kas ļauj nekavējoties sākt ārstēšanu;
• kontrolēt epidēmiju izplatību mājas, savvaļas dzīvnieku vidū;
• identificēt un uzraudzīt jaunas lipīgas mikrobu sugas un patogēnu apakštipus, kas izraisījuši iepriekšējās epidēmijas.

Diagnostikas veidi

Standarta metode

Polimerāzes ķēdes reakcijas analīze tiek veikta, pamatojoties uz specifiska DNS un RNS fragmenta daudzkārtēju pastiprināšanu (dubultošanu), izmantojot īpašus primer enzīmus. Kopēšanas ķēdes rezultātā tiek iegūts pētniecībai pietiekams materiāla daudzums.

Procedūras laikā tiek kopēts tikai vēlamais fragments (atbilstoši norādītajiem specifiskajiem nosacījumiem) pat tad, ja tas faktiski ir paraugā.

Šis detalizētais video ar noderīgām diagrammām parāda, kā darbojas PCR:

Citas metodes

• Reāllaika PCR. Šāda veida pētījumos noteikta DNS fragmenta noteikšanas process sākas pēc katra cikla, nevis pēc tam, kad ir pabeigta visa 30-40 ciklu ķēde. Šāda veida pētījumi ļauj iegūt informāciju par patogēna (vīrusa vai mikrobu) daudzumu organismā, tas ir, veikt kvantitatīvu analīzi.
• RT-PCR (reversās transkripcijas režīms). Šo testu izmanto, lai atrastu vienpavedienu RNS, lai noteiktu vīrusus, kuru ģenētiskā bāze ir RNS (piemēram, C hepatīta vīruss, imūndeficīta vīruss). Šādā pētījumā tiek izmantots īpašs enzīms - reversā transkriptāze un noteikts praimeris, un vienpavedienu DNS tiek veidota uz RNS bāzes. Pēc tam no šīs virknes tiek atjaunota otra DNS virkne un tiek veikta standarta procedūra.

Indikācijas turēšanai

PCR procedūru izmanto infekcijas slimību klīnikā, neonatoloģijā, dzemdniecībā, pediatrijā, uroloģijā, ginekoloģijā, veneroloģijā, neiroloģijā, nefroloģijā, oftalmoloģijā.

Indikācijas analīzes nolūkiem:

• ģenētisko anomāliju attīstības riska noskaidrošana bērnam ar iedzimtu patoloģiju iespējamību;
• abu vecāku diagnosticēšana, plānojot grūtniecību vai nopietnas mātes stāvokli grūtniecības laikā;
• grūtības ar ieņemšanu, neauglības cēloņu noteikšana;
• aizdomas par seksuālām infekcijām akūtā stadijā un ar simptomiem, kas saistīti ar to pāreju uz hronisku;
• neskaidras izcelsmes iekaisuma procesu cēloņu noteikšana;
• neaizsargāti gadījuma un pastāvīgi seksuāli kontakti;
• patogēna mikroorganisma jutības noteikšana pret specifiskām antibiotikām;
• pacienti ar aizdomām par latentu infekciju, lai atklātu patogēnus pirms atklātu simptomu rašanās (preklīniskā diagnoze);
• pacientiem, lai apstiprinātu atveseļošanos pēc slimības (retrospektīvā diagnoze);

Diagnostiku izmanto arī tad, ja nepieciešams precīzi identificēt šādus patogēnus:

• hepatīta vīrusi (A B C G), cilvēka imūndeficīts, citomegalovīruss;
• vibrio holēra;
• herpes simplex vīruss, herpetiformas sugas;
• retro - adeno - un rinovīrusi;
• masaliņu vīrusi, Epstein-Barr, vējbakas (Zoster - vīruss);
• parvo un pikornavīrusi;
• baktērija Helicobacter pylori;
• legionellas, Escherichia coli patogēnie veidi;
• Staphylococcus aureus;
• patogēns;
• Klostridijas, difterija un Haemophilus influenzae;

To izmanto arī infekciju noteikšanai:

• Infekciozā mononukleoze;
• borelioze, listerioze, ērču encefalīts;
• Candida sēnīšu izraisīta kandidoze;
• seksuālās infekcijas - trichomoniāze, ureaplazmoze, bāla treponēma, gardnereloze, gonoreja, mikoplazmoze, hlamīdijas;
• tuberkuloze.

Kontrindikācijas turēšanai

Tā kā procedūra netiek veikta kopā ar pacientu, bez ietekmes uz ķermeni, bet gan ar bioloģisko materiālu, kas ņemts pētniecībai, PCR nav kontrindikāciju, jo nav iespējamas briesmas.

Taču biomateriāla paraugu ņemšana no dzemdes kakla kanāla pēc kolposkopijas procedūras netiek veikta. Uztriepes, skrāpējumu piegāde analīzei ir atļauta tikai 4 līdz 6 dienas pēc menstruāciju beigām un pilnīgas izdalīšanās pārtraukšanas.

Vai metode ir droša

Nav iespējama negatīva ietekme uz pacientu izolētā viņa biomateriāla pētījumā laboratorijā.

Sagatavošanās procedūrai (bioloģisko vielu piegāde analīzei)

Kā paraugs PCR analīzei, kurā tiek noteikta sveša patogēna DNS, tiek izmantots jebkurš bioloģiskais šķidrums, audi, ķermeņa izdalījumi. Testējamās vielas paraugu ņemšana tiek veikta, ņemot asinis no vēnas, nokasot no balsenes, deguna dobuma, urīnizvadkanāla, pleiras dobuma, dzemdes kakla.

Pirms diagnostikas procedūras ārsts pacientam paskaidro, kāds materiāls tiks ņemts:

1. Pārbaudot dzimumorgānu infekcijas, tiek ņemti izdalījumi no dzimumorgāniem, urīns un urīnizvadkanāla uztriepe.
2. Analizējot herpetiskas infekcijas, citomegalovīrusu, mononukleozi - analīzei ņem urīnu, rīkles tamponu, hepatītu, toksoplazmozi - asinis no vēnas.
3. Lai diagnosticētu dažādus veidus, tiek ņemts cerebrospinālais šķidrums.
4. Pulmonoloģijā analīzei paraugi ir krēpas un pleiras šķidrums.
5. Veicot pētījumu par iespējamām intrauterīnām infekcijām grūtniecības laikā, analīzei tiek izmantots amnija šķidrums un placentas šūnas.

Analīzes ticamība un precizitāte ir atkarīga no materiāla ņemšanas apstākļu sterilitātes. Tā kā PCR tests ir ļoti jutīgs, jebkurš testējamās vielas piesārņojums var izkropļot rezultātu.

Kompetenta sagatavošana biomateriāla piegādei pacientiem nesagādā grūtības. Ir daži ieteikumi:

• analizējot seksuālās infekcijas:
  • izslēgt intīmus kontaktus 72 stundas pirms materiāla piegādes;
  • pārtrauciet lietot maksts produktus 3 dienas;
  • kopš iepriekšējās dienas vakara neveikt pētāmās teritorijas higiēnu;
  • 3-4 stundas izslēdziet urinēšanu, ņemot paraugu no urīnizvadkanāla;
• pārtraukt antibiotiku lietošanu mēnesi pirms infekciju pārbaudes;
• ziedot asinis no rīta pirms ēšanas un dzeršanas;
• pirmās rīta urīna porcijas savākšana tiek veikta sterilā traukā pēc rūpīgas intīmās tualetes.

Lasiet vairāk par to, kā tiek veikta diagnostika, izmantojot polimerāzes ķēdes reakcijas metodi.

Kā notiek procedūra

Atkārtoti veicot PCR pētījumu reaktorā (pastiprinātājā vai termiskajā ciklā), noteikti cikli tiek atkārtoti:

1. Pirmais solis ir denaturācija. Siekalas, asinis, biopsija, ginekoloģiskie paraugi, krēpas, kurās ir aizdomas par patogēna DNS (vai RNS) klātbūtni, tiek ievietotas pastiprinātājā, kur materiāls tiek uzkarsēts un DNS tiek sadalīta divās atsevišķās ķēdēs.
2. Otrais solis ir materiāla atkausēšana vai neliela atdzesēšana. un pievienojot tai primerus, kas var atpazīt vēlamās DNS molekulas sadaļas un ar tām saistīties.
3. Trešais solis ir pagarinājums- rodas pēc 2 praimeru pievienošanas katrai DNS virknei. Procesa laikā tiek pabeigts patogēna DNS fragments, un veidojas tā kopija.

Šie cikli atkārtojas kā "ķēdes reakcija", kas katru reizi noved pie konkrēta DNS fragmenta (piemēram, segmenta, kurā ir ieprogrammēts noteikts vīruss) kopiju dubultošanās. Dažu stundu laikā veidojas daudzas DNS fragmenta kopijas, un tiek konstatēta to klātbūtne paraugā. Pēc tam rezultāti tiek analizēti un salīdzināti ar dažāda veida patogēnu datubāzi, lai noteiktu infekcijas veidu.

Lasiet tālāk par rezultātu interpretāciju un secinājumiem, pamatojoties uz PCR reakciju.

Rezultātu atšifrēšana

Pētījuma gala rezultāts tiek izsniegts 1-2 dienas pēc bioloģiskā materiāla piegādes. Bieži - jau pirmajā dienā pēc analīzes.

Kvalitatīva analīze

• Negatīvs rezultāts nozīmē, ka pētniecībai iesniegtajā vielā nav konstatētas infekcijas izraisītāju pēdas.
• Pozitīvi rezultāts nozīmē patogēnu vīrusu vai baktēriju noteikšanu bioloģiskajā paraugā ar ļoti augstu precizitātes pakāpi iesniegšanas brīdī.

Ja rezultāts ir pozitīvs, bet nav infekcijas aktivizēšanās pazīmju, šo ķermeņa stāvokli sauc par asimptomātisku “veselīgu pārvadāšanu”. Visbiežāk novēro, ņemot biomateriālu no noteiktas vietas (dzemdes kakla kanāla, urīnizvadkanāla, mutes dobuma) vīrusu slimībām. Ārstēšana šajā gadījumā nav nepieciešama, taču ir nepieciešama pastāvīga medicīniskā uzraudzība, jo pastāv iespēja:

• vīrusa izplatīšanās no nesējiem un veselu cilvēku inficēšanās;
• procesa aktivizēšana un slimības pāreja uz hronisku formu.

Tomēr, ja asins analīzes rezultāts ir pozitīvs, tas norāda, ka infekcija ir skārusi ķermeni, un tas vairs nav nesējs, bet gan patoloģija, kurai nepieciešama tūlītēja specifiska terapija.

Kvantitatīvā analīze

Kvantitatīvo rezultātu nosaka speciālists tieši konkrētam infekcijas veidam. Pamatojoties uz to, ir iespējams novērtēt attīstības pakāpi, slimības stadiju, kas ļauj ātri noteikt pareizu ārstēšanu.

vidējās izmaksas

Polimerāzes ķēdes reakcijas veikšanas cenas nosaka: pētījuma veids, patogēna noteikšanas sarežģītība, bioloģiskā materiāla savākšanas grūtības, analīzes veids (kvalitatīvā vai kvantitatīvā), cenu līmenis laboratorijā.

No otras puses, PCR izpētē, ņemot viena veida materiālu analīzei, vienlaikus var atklāt vairākus patogēnus. Tas ietaupa citus laboratorijas testus.

Aptuvenās PCR analīzes izmaksas rubļos:

• gonokoki, gardnerella, trichomonas vaginalis - no 180
• Chlamydia trachomatis - no 190
• papilomas vīruss - no 380 līdz 500
• uroģenitālā trakta biocenoze sievietēm (mikrofloras kvantitatīvais un kvalitatīvais novērtējums) - no 800.

Pat vairāk noderīga informācija par PCR pētījumu skatiet tālāk redzamo video:

Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir augstas precizitātes molekulārās ģenētiskās diagnostikas metode, kas ļauj atklāt dažādas cilvēku infekcijas un iedzimtas slimības gan akūtā, gan hroniskā stadijā un ilgi pirms slimības izpaušanās.

Polimerāzes ķēdes reakciju (PCR) 1983. gadā izstrādāja Kerijs Mulliss (ASV), par ko viņam 1993. gadā tika piešķirta Nobela prēmija ķīmijā.

PCR analīze ir kļuvusi par sava veida “zelta standartu” lielākajai daļai infekciju. Lielākā daļa speciālistu ar to saskaras gandrīz katru dienu un nevar iedomāties galīgo diagnozi bez tā. PCR bieži kļūst par vienīgo reakciju, lai atklātu slimības aktīvās stadijas tajos brīžos, kad citas bakterioloģiskās, virusoloģiskās, imunoloģiskās diagnostikas metodes nedarbojas.

PCR diagnostikas priekšrocības mūsdienu medicīnā:

Tieša patogēna (proti, konkrēta patogēna DNS vai RNS reģiona) klātbūtnes noteikšana testa paraugā.
Augsta specifika ļauj noteikt unikālu DNS vai RNS sekciju, kas raksturīga konkrētam patogēnam, kas novērš viltus reakciju iespējamību.
PCR metodes augstā jutība ļauj noteikt pat atsevišķas patogēnu (vīrusu, baktēriju) šūnas. PCR analīzes jutīgums ir 10-1000 šūnas testa paraugā (piemēram, imunoloģisko un mikroskopisko testu jutīgums ir tikai 103-105 šūnas).
Universālas PCR tehnikas izstrāde dažādu patogēnu noteikšanai. PCR izpētes objekts ir patogēna ģenētiskais materiāls (DNS, RNS). Tehnika ļauj no viena bioloģiskā parauga atklāt vairākus patogēnus.
Salīdzinoši ātri analīzes rezultāti. Pilns pētījums tiek veikts 4-4,5 stundās, retāk - nedaudz ilgāk.
Iespēja noteikt patogēnus pirms slimības simptomu parādīšanās (preklīniskā diagnoze) un pēc pagātnes slimības (retrospektīvā diagnoze). Preklīniskās diagnostikas piemērs varētu būt izmeklēšana inkubācijas periodā (no inficēšanās brīža līdz pacienta sūdzību parādīšanās brīdim), kā arī latenta infekcija (kad simptomu nav vispār, bet ir tikai laboratorijas dati - PCR). , piemēram). Viens no svarīgiem PCR diagnostikas punktiem ir PCR arhīva materiālos vai bioloģiskajās atliekās, kas ir svarīgas personas vai paternitātes identificēšanai.

Pašlaik PCR diagnostika piedzīvo ievērojamu attīstību. Pati metode tiek pilnveidota, atkal un atkal parādās jauni PCR veidi, medicīnas tirgū ienāk jaunas šīs reakcijas testēšanas sistēmas. Pateicoties tam, PCR pētījumu izmaksas ar katru gadu kļūst pieejamākas plašam pacientu lokam.

Kas ir PCR metodes pamatā

Polimerāzes ķēdes reakcijas pamatā ir noteikta DNS vai RNS sekcijas atkārtota dubultošana (pastiprināšana), izmantojot fermentus laboratorijā. Tā rezultātā veidojas DNS vai RNS daudzums, kas ir pietiekams vizuālai analīzei. Pētījuma laikā tiek kopēts tikai tas apgabals, kas atbilst norādītajiem nosacījumiem, un tikai tā klātbūtnes gadījumā testa paraugā.

Piemēram, speciālā reaktorā (pastiprinātājā) ievieto pētījumu materiālu, kurā paredzama patogēna DNS vai RNS fragmentu klātbūtne (siekalas, asinis, urīns, izdalījumi no dzimumorgāniem). Tālāk tam tiek pievienoti specifiski enzīmi, kas saistās ar patogēna DNS vai RNS, un tiek sintezēta tā kopija. Šī kopēšana notiek vairākos posmos, piemēram, "ķēdes reakcija", un galu galā no vienas kopijas ģenētiskais materiāls var izveidoties simtiem un tūkstošiem eksemplāru. Pēc tam seko rezultātu analīze un salīdzināšana ar esošo datubāzi par dažādu patogēnu struktūru. Izmantojot PCR, jūs varat ne tikai identificēt patogēna veidu, bet arī sniegt kvantitatīvu analīzes rezultātu, tas ir, cik daudz patogēnu ir cilvēka organismā.

PCR metode šobrīd paplašina iesākto pētījumu iespēju loku: mutāciju ieviešanai, DNS fragmentu splicēšanai un plaši tiek izmantota medicīnā, piemēram, paternitātes noteikšanai, jaunu gēnu rašanās u.c.

Kādas infekcijas var noteikt, izmantojot PCR diagnostiku

1) HIV infekcija (var noteikt cilvēka imūndeficīta vīrusu HIV-1)
2) Vīrusu hepatīts A, B, C, G (RNA-HAV, DNS-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Infekciozā mononukleoze (Epšteina-Barra vīrusa DNS — EBV)
4) Citomegalovīrusa infekcija (DNS-CMV)
5) Herpetiska infekcija (DNS – herpes simplex vīrusa HSV 1. un 2. tips)
6) STI (seksuāli transmisīvās infekcijas) - ureaplazmoze, gardnereloze, hlamīdijas, mikoplazmoze, trichomoniāze,
7) Tuberkuloze (mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogēnie vīrusi - papilomas vīrusa infekcija (cilvēka papilomas vīruss (ieskaitot tā onkogēnās sugas 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 un 59)
9) Borelioze, ērču encefalīts
10) Listerioze
11) Candidiasis (Candida ģints sēnītes)
12) Helicobacter pylori infekcija
un citi

Ņemot vērā patogēnu spektru, PCR diagnostika tiek aktīvi izmantota ginekoloģiskajā, uroloģiskajā, infekcijas slimību praksē, pulmonoloģijā, ftizioloģijā, gastroenteroloģijā, hematoloģijā, onkoloģijā u.c.

Materiāls izpētei un tā vākšanas noteikumi

PCR izpētes materiāls, kurā var konstatēt baktērijas svešu DNS vai vīrusa DNS vai RNS, var būt dažādas bioloģiskās vides un cilvēka šķidrumi: gļotas, urīns, asinis, krēpas, epitēlija šūnu nokasīšana, placentas audi, asinis. , prostatas sula, amnija šķidrums, pleiras šķidrums.

Veicot seksuāli transmisīvo infekciju (STI) skrīningu, vīrieši un sievietes ņem sekrēciju no dzimumorgāniem, uztriepi vai skrāpējumu no dzemdes kakla, tamponu vai skrāpējumu no urīnizvadkanāla (urethra), urīnu.

Pārbaudot infekcijas (herpetiskas infekcijas, CMVI, mononukleozi, toksoplazmozi, B, C hepatītu, HIV infekciju), ņem asinis PCR.

Infekciozās mononukleozes, CMVI, herpetiskas infekcijas diagnostikai tiek ņemts uztriepes no rīkles, CMVI izmeklēšanai - urīns. Bieži vien cerebrospinālais šķidrums tiek ņemts, lai pārbaudītu nervu sistēmas bojājumus vairākos pētījumos.

Pulmonoloģijā materiāls ir krēpas, pleiras šķidrums.

Pārbaudot intrauterīnās infekcijas - amnija šķidrumu, placentas audus.

Sagatavošanās materiāla piegādei un PCR diagnostika

Gandrīz visiem pacientiem, kuriem tiek veikta PCR diagnostika, ir tiesības paļauties uz uzticamu, precīzu un ātru rezultātu, kas lielā mērā ir atkarīgs no laboratorijas iespējām un laboranta profesionalitātes. Tajā pašā laikā daudzi nedomā, ka šī uzticamība lielā mērā ir atkarīga no mums pašiem, proti, no ārstējošā ārsta ieteikumiem, dzīvesveida un materiāla paraugu ņemšanas pareizības. Veicot materiāla paraugu ņemšanu, ir nepieciešami apstākļi, kas izslēdz materiāla piesārņojumu (piesārņojumu) un attiecīgi rada šaubas par analīzes objektivitāti.

Pareiza sagatavošanās materiāla piegādei nav īpaši sarežģīta. Ir šādi ārstu ieteikumi pacientiem:

1) nedzīvot seksuāli dienu pirms materiāla piegādes;
2) asinis pētniecībai dod no rīta tukšā dūšā (neēst, nedzert);
3) urinējot, pirmo rīta porciju savāc tīrā sterilā traukā.

PCR analīzes termiņi

Gala rezultāts ir gatavs 1,5-2 dienu laikā pēc materiāla piegādes. Dažos gadījumos rezultāts ir gatavs jau pirmajā dienā.

PCR rezultātu interpretācija

Negatīvs PCR rezultāts liecina, ka testa materiālā tā piegādes brīdī netika konstatētas infekcijas izraisītāju pēdas. Vairums gadījumu liecina, ka nav infekcijas, ko mēģināts atrast testa paraugā.

Pozitīvi PCR rezultāts norāda uz infekcijas pēdu noteikšanu pētāmajā bioloģiskajā paraugā. Ar lielu precizitāti pozitīvs rezultāts norāda uz infekcijas klātbūtni noteiktā laikā.

Ir situācijas, kad PCR ir pozitīvs, bet par aktīvu infekciju runāt nevar – tas ir tā sauktais "veselīgais kariets" bez slimības klīniskajiem simptomiem, kam ārstēšana nav nepieciešama, bet nepieciešama dinamiska ārsta novērošana. To biežāk novēro vairākās vīrusu infekcijās (HPV, CMVI, EBV infekcija, herpes infekcija un citas) tādos materiālos kā siekalas, dzemdes kakla kanāla nokasīšana, urīnizvadkanāls, tas ir, no lokāla fokusa. Tomēr mēs nedrīkstam aizmirst, ka infekcijas pārnešana no nesējiem uz veseliem cilvēkiem ir iespējama, tāpat kā pāreja uz hronisku slimības formu, aktivizējoties procesam. Ja PCR asinīs ir pozitīvs, tas vairs nav nesējstāvoklis un prasa īpašu ārstēšanu.

PCR kvantitatīvo rezultātu novērtē tikai ārsts individuāli konkrētai infekcijai atsevišķi, un tam nav vispārīgu gradāciju. Pamatojoties uz kvantitatīvo PCR rezultātu, ārsts var noteikt infekcijas aktivitātes pakāpi un noteikt slimības stadiju, kas noteikti ietekmēs izrakstīto zāļu gaitu un devas.

Viens no pēdējiem aizraujošajiem jautājumiem: cik precīza ir PCR diagnostika?

Ir 3 PCR analīzes definīcijas:

1. Precizitāte (ar lielu varbūtības pakāpi ir iespējama infekcijas noteikšana vai neesamība).
2. Specifiskums (precizitāte konkrētas infekcijas noteikšanā).
3. Jutīgums (pat ar zemu patogēnu ģenētiskā materiāla saturu testa paraugā infekcija tiks atklāta).

Polimerāzes ķēdes reakcija praktiski nesniedz viltus pozitīvus rezultātus (tas ir, nav pozitīvu paraugu, kur nav infekcijas). Viltus negatīvi rezultāti ir reti (biežāk tas ir saistīts ar to, ka personai šobrīd nav aktīvas infekcijas). Piemēram, latenta infekcija, hroniska infekcija, kas nav aktīva.

Infekcijas slimību speciāliste Bykova N.I.

Video par to, kāpēc un kā veikt PCR testu infekcijām

PCR diagnostikas metodes būtība

Polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metode ir balstīta uz molekulārās bioloģijas principiem un pieder pie ģenētiskās izpētes jomas.

Jebkurš dzīvs organisms savā struktūrā satur nukleīnskābju molekulas - DNS un RNS. Šī ir sava veida ģenētiskā pase, kas palīdz noteikt, kurai sugai pieder tas vai cits “nesējs”. Taču, lai noskenētu šo "pasi", vēl nesen bija nepieciešams noteikts minimālais bioloģiskā materiāla daudzums. Ja DNS koncentrācija bija zemāka nekā nepieciešams, diagnostiskā analīze nebija iespējama.

Veicot diagnostiku ar PCR, bioloģiskā materiāla paraugu apstrādā ar īpašiem enzīmiem (polimerāzēm), kas ļauj uzsākt esošās DNS (RNS) vairākkārtējas kopēšanas procesu. Izmantojot ķēdes reakcijas kaskādi, pēc ģeometriskās progresijas principa, tikai dažu stundu laikā no vienas nukleīnskābes molekulas var iegūt vairākus desmitus triljonus kopiju. Šis apjoms ir vairāk nekā pietiekams jebkuram salīdzinošam pētījumam.

Analīzei tiek izmantots pastiprinātājs, kurā stingros temperatūras apstākļos notiek vairāku DNS replikācijas process. Parasti pietiek ar 20-30 replikācijas cikliem. Katrs no tiem ietver 3 secīgus posmus:

• denaturācija - DNS matricas uzsildīšana līdz 96°C ar ūdeņraža saišu iznīcināšanu starp blakus esošajām ķēdēm;
• atkausēšana - temperatūras pazemināšana par 4°C, lai izveidotu replikācijas dakšiņu;
• pagarinājums - DNS polimerāžu palaišana jaunu nukleotīdu ķēžu sintēzei, pamatojoties uz vecāku.

Katrs trīs posmu cikls ilgst vidēji 15-20 minūtes.

PCR diagnostikas priekšrocības

PCR analīze ir augsto tehnoloģiju un prasa no laboratorijas personāla profesionalitāti, taču mūsdienu medicīnai tā ir kļuvusi par vēl nebijušu iespēju avotu precīzas diagnostikas jomā.

PCR priekšrocības:

• universālums (var pārbaudīt jebkuru bioloģisko materiālu - no asins šūnām, siekalām un matiem līdz aizdomīgiem plankumiem nozieguma vietā);
• augsts jutības slieksnis (metode spēj dot rezultātu atsevišķu šūnu vai atsevišķu DNS molekulu klātbūtnē paraugā);
• daudzuzdevumu veikšana - vienā pieejā vienlaikus var noteikt vairākus dažādus informācijas nesēju veidus (bakterioloģiskās metodes to nespēj, jo katram mikroorganisma veidam ir nepieciešamas dažādas barības vielas);
• spēja veikt precīzu kvantitatīvo analīzi;
• apstrādes ātrums (atšķirībā no citiem ģenētisko pētījumu veidiem, PCR diagnostika aizņem tikai 5-7 stundas);
• rezultāta precizitāte (ja tiek ievērota tehnoloģija, kļūda ir praktiski izslēgta);
• salīdzinoši zemas izmaksas (PCR analīze nepārsniedz standarta testu vidējo cenu).

Visas šīs priekšrocības ļauj izmantot polimerāzes ķēdes reakciju regulārai apstrādes procesa uzraudzībai.

PCR diagnostikas metodes izstrādātājs kāda iemesla dēļ saņēma Nobela prēmiju par savu “prāta bērnu”. Polimerāzes ķēdes reakcijas metode ļauj:

• nosaka infekcijas izraisītāja celmu ar minimālu saturu biomateriālā (līdz atsevišķām vīrusu struktūrām);
• aprēķināt precīzu patogēna koncentrāciju visā organismā (lai noteiktu optimālo zāļu devu);
• novērtēt patoloģiskās ietekmes pakāpi uz pacientu un identificēt celmus ar augstu farmakoloģisko rezistenci;
• noteikt secīgus infekcijas posmus un veikt turpmāku prognozi.

Tas ir interesanti! PCR analīzes iespējas ir daudz plašākas nekā cilvēka ķermeņa infekciozā fona kvantitatīvais un kvalitatīvais novērtējums. Papildus infekciju noteikšanai to izmanto, lai noteiktu radniecību, noteiktu personību, identificētu ģenētiskās patoloģijas un salīdzinātu biomateriālu tiesu zinātnē.

Kādas infekcijas var noteikt ar PCR diagnostiku

PCR analīze spēj ar augstu precizitāti aprēķināt jebkuru infekcijas nesēju, kas iekļauts mūsdienu medicīnas slimību katalogā:

• visu veidu hepatīta izraisītāji (PCR ļauj identificēt infekcijas avotu inkubācijas perioda stadijā un sākt ārstēšanu ilgi pirms slimības simptomu parādīšanās);
• HIV un STS patogēni (ureaplazmas, mikoplazmas, hlamīdijas, trichomonas);
• TORCH infekciju grupa (attiecas, izmeklējot grūtnieces, lai agrīni atklātu augļa patoloģijas);
• tuberkuloze (slimības latentā forma);
• kandidoze (latenta forma);
• enterovīrusa infekcija;
• mononukleoze;
• listerioze;
• salmoneloze (konkrēta celma definīcija);
• papilomas vīruss;
• gardnereloze;
• ērču encefalīta vīruss.

Īpaši populāra ir intracelulāro infekciju (piemēram, hlamīdiju) analīze, kuras noteikšana parastajā veidā ir sarežģīta pat ar augstu šo mikroorganismu koncentrāciju pacienta audos.

Ņemot vērā metodes daudzuzdevumu izpildi, ir iespējams veikt vienlaicīgu PCR analīzi 12 pamata infekcijām. Integrēta pieeja ir ērta izvēle ikdienas ķermeņa skrīningam attiecībā uz seksuāli transmisīvām infekcijām ar minimālu nepareizas diagnozes risku.

Uz piezīmi! Ar PCR diagnostikas palīdzību tiek sastādīta prognoze tā sauktajām "guļošajām" infekciju formām, kas atrodas organismā bez slimības simptomiem (īpaši svarīgi ginekoloģisko un uroloģisko slimību, tuberkulozes, ērču pārnēsāto slimību ārstēšanā). encefalīts, papilomas vīruss).

Kādi bioloģiskie materiāli tiek pētīti

Nav noteiktu noteikumu vai robežu. Metodes daudzpusība ļauj analīzei izmantot jebkuru bioloģisko materiālu:

• maksts uztriepe, kasīšana no urīnizvadkanāla un dzemdes kakla kanāla (STS diagnostikai);
• urīns (tuberkuloze, daži STS, citomegalovīruss);
• asinis (HIV, hepatīts, TORCH infekcijas);
• rīkles uztriepe (mononukleoze, citomegalovīruss);
• alkohols (neiroinfekcija)
• amnija šķidrums un placentas audi (TORCH infekcijas analīze, lai novērstu augļa attīstības patoloģijas);
• pleiras šķidrums (plaušu infekcijas).

Cita veida PCR diagnostikai (radniecības nodibināšanai, biomateriāla salīdzināšanai) tiek izmantotas siekalas, mati, nagi, epitēlija šūnas un citi ģenētiskās informācijas avoti.

Uz piezīmi! PCR diagnostikas metode atklāj patogēnus ne tikai dzīvo audu sastāvā, bet arī augsnes, ūdens, augu substrātu paraugos; novērtē mikroorganismu patogēno aktivitāti gan cilvēka organismā, gan tā vidē (konstatēta slimības avota klātbūtne ļaus veikt atbilstošus pasākumus, lai to novērstu nākotnē).

Kā sagatavoties analīzei

Mūsu klīnikas pacientiem nav jādomā, kur veikt PCR testu. Nodrošinām visus nosacījumus materiāla sterilai paraugu ņemšanai un nosūtīšanai uz laboratoriju.

Īpaša apmācība nav nepieciešama, taču ieteicams ievērot vispārīgu ieteikumu sarakstu. Uz dažām dienām atsakieties no alkohola, ierobežojiet smēķēšanu, ja iespējams, izslēdziet medikamentus, mēģiniet izvairīties no stresa situācijām un smagas fiziskas slodzes.

Pārējā sagatavošanās analīzes nokārtošanai ir atkarīga no biomateriāla veida:

• pirms uztriepes vai skrāpēšanas uroģenitālās infekcijas gadījumā atturēties no dzimumakta 2-3 dienas (sievietēm jāpārliecinās, ka pārbaudes diena neietilpst menstruāciju dienās);
• pirms PCR asins analīzes veikšanas atturieties no ēšanas no rīta (pārbaudi veic tukšā dūšā) un izdzeriet glāzi tīra negāzēta ūdens;
• pirms urinēšanas atturieties no pārtikas produktiem, kas ietekmē urīna skābumu (augļi, gaļa, pākšaugi, zaļumi).

Svarīgs! Būtiskākā prasība infekciju PCR diagnostikā ir biomateriāla tīrība. Tāpēc mēģiniet pielikt visas pūles, lai izslēgtu audu inficēšanos ar svešu DNS (rūpējieties par transportēšanas konteinera sterilitāti, personīgo higiēnu, tīrām drēbēm).

PCR analīzes atšifrēšana

Infekciju kvalitatīvās PCR analīzes rezultāti ir doti tabulas veidā, kur katram infekcijas izraisītājam ir atbilstoša atzīme:

• negatīvs rezultāts (šīs sugas izraisītāja nav);
• pozitīvs rezultāts (konstatēts izraisītājs).

Slimības simptomu neesamība var neatbilst reālajam attēlam, tāpēc kādam analīzes rezultāti būs negaidīti. Jums nevajadzētu satraukties: infekcijas izraisītāja identificēšana agrīnā stadijā ir veiksmīgas un ātras ārstēšanas atslēga.

Veicot kvantitatīvo PCR analīzi, ir iespējams novērtēt vīrusa slodzes pakāpi (noskaidrojiet vīrusa kopiju skaitu tilpuma vienībā). Pateicoties šāda veida pētījumiem, ir iespējams noteikt infekcijas procesa gaitas intensitāti, kā arī novērtēt ārstēšanas efektivitāti.

PCR analīze: cena un nosacījumi

Vidējais diagnostikas laiks ir 5-10 stundas. Rezultātus tabulas veidā izsniedz jau nākamajā darba dienā pēc biomateriāla paraugu ņemšanas.

Izvēloties PCR analīzi, cenai nav nozīmes. Vidēji izmaksu apjoms nepārsniedz parasto bioķīmisko testu apjomu un atšķirībā no lielākās daļas ģenētisko pētījumu ir pieejams visiem pacientiem.