Mennyibe kerül a pcr a látens fertőzések ellen. Hogyan történik a PCR-elemzés: az eljárás leírása. Ha kenetet adnak, akkor szükséges

A különböző típusú - vírusos és bakteriális - fertőző betegségek diagnosztizálása a kórokozók korai szakaszban történő azonosítására irányul, ami lehetővé teszi az időben történő és különösen hatékony kezelés előírását. A fertőzések kimutatásának legmodernebb módszere a PCR, ami a polimeráz láncreakció rövidítése. Mi ennek a módszernek a lényege és mi a célja?

A polimeráz reakció lényege

Bármely vírus és mikroorganizmus szerkezete tartalmaz RNS- vagy DNS-molekulákat. Jellemző, hogy ezek a vegyületek mindegyikre egyediek, ezért a nukleinsavak felnőtteknél vagy gyermekeknél végzett vérvizsgálatban történő izolálásával abszolút pontossággal lehet diagnózist felállítani.

Sajnos a DNS koncentrációja mind a vérmintákban, mind más biológiai anyagokban meglehetősen alacsony, így szokásos diagnosztikai módszerekkel nem határozható meg. Ennek a problémának a megoldására egy időben találták fel a polimeráz láncreakciót.

Tehát ennek az elemzésnek a lényege a vérminta specifikus feldolgozásában rejlik, aminek következtében a DNS-molekulák koncentrációja nő benne, és típusuk jövőbeni megállapítása lehetővé teszi a kórokozó típusának azonosítását is. a helyes diagnózis felállításához.

Hogyan történik a PCR vérvizsgálat?

A PCR-módszert csak laboratóriumi körülmények között végezzük. Ennek végrehajtásához speciális enzimeket használnak, amelyek többszörösen növelik a páciens RNS-ének és DNS-ének szerkezetét. Ebben az esetben ilyen számút kell kialakítani, hogy vizuális vizsgálatot lehessen végezni. A felmérés során egy olyan oldal másolatát készítjük el, amely minden tekintetben megfelel az előírt feltételeknek. Sokak számára érdekes, hogy mi az a PCR vérvizsgálat az RNS-re.

A laboratóriumban rendelkezésre áll a szükséges adatbázis, amely a különböző fertőző ágensek pontos szerkezetét jelzi. A PCR módszer alkalmazása nemcsak a kórokozó típusának meghatározását teszi lehetővé, hanem mennyiségi arányának kiszámítását is.

A PCR-diagnosztika néhány újítást is tartalmaz, amelyek közül kiemelkedik a következők:

Különféle DNS-fragmensek összekapcsolása;

Mutáció bevezetése;

Az apaság megállapítása stb.

Milyen betegségeket mutat ki PCR?

A PCR-nek köszönhetően szinte minden bakteriális és vírusos patológiát azonosítani lehet. A kutatáshoz nemcsak vér, hanem egyéb biológiai anyagok is felhasználhatók, például a húgycsőből és a méhnyakból származó kenet, nyál, sperma. Az elemzés meglehetősen informatívvá válik, amikor egy bizonyos betegség kórokozója belép az emberi vérbe. Ezért a PCR vérvizsgálatát a következő patológiák esetén írják elő:

A, B, C, D és TT típusú vírusos hepatitis;

Herpetikus jellegű fertőzések (vagyis az első, második és negyedik típusú vírusok);

citomegalovírus;

Enterovírus fertőzés;

HIV fertőzés;

Rubeola;

Listeriosis;

Övsömör;

Fertőző mononukleózis;

Toxoplazmózis.

Ha figyelembe vesszük a PCR más bioanyagok felhasználásával történő végrehajtását, akkor a következőkkel kell kiegészíteni az ezzel a módszerrel kimutatható patológiák listáját:

szalmonellózis;

diftéria;

Gardnerellosis;

Mycoplasmosis;

Tuberkulózis;

Trichomoniasis;

- papillomavírus fertőzés (a humán papillomavírus mintegy száz különböző törzse).

A TORCH-fertőzések, köztük a toxoplazmózis, a citomegalovírus, a herpeszvírus-fertőzés és a rubeola, terhesség alatti PCR-vizsgálata mára különösen fontossá vált. Ennek oka az a tény, hogy a fenti betegségek a magzat fejlődésében rendellenességeket okozhatnak.

A PCR előnyei

Mik ennek a módszernek az előnyei?

• A diagnózis százszázalékos pontossága: ha a kórokozónak legalább több DNS-fragmentuma van a vérben, akkor azokat a PCR-reakció határozza meg, ami azt jelenti, hogy a helyes diagnózis felállításra kerül. Ez a fő különbség e módszer és más diagnosztikai módszerek között - teljes vérkép, ELISA és mások.
• Specificitás. A borreliózis kimutatására végzett PCR-vérvizsgálat során például nincs olyan, hogy álnegatív vagy álpozitív eredmény, ami megkülönbözteti az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattól vagy ELISA-tól.
• Az elemzés elvégezhető úgy, hogy egyetlen bioanyag mintából egyszerre több kórokozót is meghatározhatunk, így ez a módszer kényelmes a páciens számára, mert nem kell többször elvégeznie az elemzést.
• Gyorsaság. Nincs szükség a kórokozó izolálására és speciális táptalajokon történő szaporítására, ami a bakteriológiai vizsgálat során szükséges. A kész eredményt az elemzés napján kaphatja meg.

• A hepatitis kimutatására irányuló PCR vérvizsgálattal például meghatározzák a betegség rejtett kórokozóját a szervezetben, amikor a beteg a fertőzés (HIV vagy hepatitis) hordozójaként működik.
• Megfizethető áron. A PCR-elemzés költsége egy kórokozó meghatározására kétszázötven és ötszáz rubel között mozog. A vírusok félkvantitatív vizsgálata egy kicsit többe kerül - körülbelül ezer rubel.

A módszer hátrányai

A PCR egy csúcstechnológiás kutatási módszer, amely magas követelményeket támaszt a laboratóriumi berendezésekkel szemben. Az elemzési helyiségnek feltétlenül biológiai szűrővel kell rendelkeznie, mivel a levegőben mindig vannak nyál- és bőrrészecskék, amelyek DNS-molekulákat tartalmaznak. A bioanyagokkal végzett munka műszaki követelményeinek be nem tartása téves diagnózishoz vezethet.

Kinek kell vérvizsgálatot végeznie a PCR-hez?

A felmérést bárki kitöltheti. Javallata szexuális úton terjedő fertőzések (HIV-fertőzés, bakteriális vaginosis, chlamydia) gyanúja. Ha véletlenül védekezés nélküli szexuális érintkezés történt, csak a PCR teszi lehetővé a helyes diagnózis korai szakaszban történő felállítását, ha egy személy megfertőződött egy adott betegséggel.

A TORCH-komplex vére kötelező terhes nők számára, valamint azoknak, akik csak tervezik a gyermekvállalást.

Bár a PCR a maximum hatékony módszer diagnosztika, de nem kell benne ciklusokban menni. Minden patológia jelenlétében átfogóan meg kell vizsgálni a beteget. Ha a polimeráz láncreakció lehetővé teszi a kórokozó meghatározását, akkor egy szerológiai vizsgálatnak köszönhetően felmérhető a terápia hatékonysága, az emberi szervezet reakciója a kórokozóra és a gyógyszerekre. Az orvosnak el kell rendelnie a HIV PCR vérvizsgálatát.

Az eljárás és az előkészítés jellemzői

A PCR technikával vizsgált betegek kapják a legmegbízhatóbb eredményt. Azt kell mondani, hogy ebben az esetben a hibák valószínűsége szinte teljesen kiküszöbölhető. Ennek az elemzésnek az eredményeit is meglehetősen gyorsan elkészítik, ami megkönnyíti a diagnózis felállítását, és lehetővé teszi a szükséges orvosi eljárások időben történő előírását.

A PCR-módszerrel kapott eredmény megbízhatóságát a vizsgálatra szánt biológiai anyag helyes szállítása határozza meg. Nem szabad semmivel szennyezni, különben az eredmény nem lesz objektív.

• a szexuális kapcsolat tilalma egy nappal az eljárás előtt;
• a fertőzések kimutatására vérvizsgálatot kell végezni reggel és csak éhgyomorra;
• vizeletet is adunk reggel steril edényben.

Másfél-két nappal a beavatkozás után a PCR vérvizsgálat dekódolásra kerül, és kész az eredmény. Vannak olyan esetek is, amikor az eredményt még aznap megkapja.

Hogyan készítsünk anyagot elemzéshez?

A vizsgálat lehető legsikeresebb elvégzése érdekében helyesen kell elvenni az anyagot a pácienstől, és el kell végezni annak megfelelő előkészítését. Közismert tény, hogy egy laboratóriumi vizsgálat során nagyszámú (akár hetven százalékos) hiba fordul elő a minta-előkészítés során.

Jelenleg néhány laboratóriumban vákuumrendszerrel vesznek vért. Egyrészt minimálisan sértik meg a beteget, másrészt lehetővé teszik az anyag felvételét úgy, hogy az ne érintkezzen sem a környezettel, sem a személyzettel. Ez elkerüli a biológiai anyag szennyeződését, és maximalizálja az elemzés megbízhatóságát.

Az eredmények megfejtése

A PCR vérvizsgálat eredménye pozitív vagy negatív lehet. Ha a vérvizsgálat negatív, akkor ez azt jelzi, hogy a beteg által átadott anyagban nincsenek fertőző kórokozók. A pozitív elemzés megerősíti, hogy a vérben fertőző ágensek vannak, ami azt jelenti, hogy a beteg leghatékonyabb és legminőségibb kezelésére van szükség.

A kapott eredmény a betegség tüneteinek hiányában is pozitív lehet. Ez vagy a kóros folyamat kezdetét jelzi, vagy azt, hogy a személy hordozó. Ha ez utóbbit észlelik, nincs szükség orvosi eljárásokra. Ebben az esetben ajánlott a pácienst állandóan orvosi megfigyelés alatt tartani, ami például időszakos PCR-vérvizsgálatot jelent a herpesz és más fertőzések kimutatására.

Leggyakrabban a húgycsőben, a nyaki csatornából készült kaparékban, a nyálban találhatók. Emlékeztetni kell azonban arra, hogy egy beteg ember képes teljesen egészséges embereket megfertőzni, még akkor is, ha ez a betegség nem zavarja. Krónikussá válhat. Azt kell mondani, hogy a PCR-rel kapott pozitív eredmény esetén megfelelő orvosi eljárásokat kell előírni.

A PCR kvantitatív jellemzése

A fertőzések kimutatására szolgáló PCR vérvizsgálatot kvantitatívan is jellemzik. Ezt az eredményt csak szakember tudja felmérni, mivel a különböző fertőzések esetében egyéni. Ez a mennyiségi jellemző, amely lehetővé teszi az orvos számára, hogy meghatározza egy ilyen kóros folyamat aktivitásának mértékét, meghatározza egy adott betegség pontos fejlődési szakaszát.

A kapott eredmények tanulmányozása segít a szakembernek kiválasztani a megfelelő gyógyszert, meghatározni a szükséges adagot.

Diagnosztikai pontosság

A PCR-nek három legfontosabb jellemzője van, nevezetesen:

Érzékenység;

Specifikusság;

Pontosság.

A fertőzések PCR segítségével történő diagnosztizálását a fertőző ágensek kimutatásának nagy valószínűsége jellemzi a szervezetben. A vér és más folyadékok elemzése nagyon specifikus. Hála neki, könnyen meghatározhat egy adott fertőző folyamatot például a hepatitis vagy HIV PCR vérvizsgálatával. Ezenkívül a PCR-diagnosztika nagyon érzékeny. Ha a vizsgált anyagban minimális számú fertőző ágens van, a PCR-módszer mindig pozitív lesz.

Nagyon ritka esetekben hamis pozitív eredmény érhető el. Fertőzés hiányában ennek megfelelően negatív lesz.

A rejtett betegségek azonosítása

Ha egy személynél fennáll az STI gyanúja, vérvizsgálatot írnak elő a rejtett fertőzések meghatározására. A nemi szervek bármely betegsége csak a beteg vizsgálatával állapítható meg.

A következő betegségek látens természetűek lehetnek a tanfolyamon:

• ureaplasmosis;
• chlamydia;
• mikoplazmózis;
• herpesz;
• gonorrea;
• gardnerellózis.

Ezek a fertőzések meglehetősen gyakoriak és nagyon alattomosak. A betegség kezdetén nincsenek jól körülhatárolható tüneteik, ezért a betegek nem fordulnak szakorvoshoz. A chlamydia, borreliosis és más fertőzések időben történő PCR vérvizsgálatának eredményei segítenek az orvosnak hatékony kezelést előírni.

Az STI-k hátrányosan befolyásolják a reproduktív rendszert. Meddőséget vagy rendellenességek megjelenését okozhatják a magzatban. Éppen ezért fontos a PCR teszt elvégzése a terhesség megtervezése előtt.

Tartalom

Akit érdekelnek az új diagnosztikai módszerek, annak érdemes tájékozódnia, mi is az a PCR módszer. Modern technikai lehetőségek a területen laboratóriumi kutatás lehetőséget biztosítanak számos betegség kimutatására a kezdeti szakaszban. A polimeráz láncreakció (PCR) jelenleg a legpontosabb és legújabb módszer.

PCR elemzés

PCR elemzés - mi ez? Ez a módszer a molekuláris biológia alapelveit használja. Az anyag tanulmányozásához speciális enzimeket használnak, amelyek ismételten és gyorsan másolják a kórokozók DNS-ét, RNS-fragmenseit. Létezik különböző típusok PCR elemzés a vizsgált anyagtól függően (vér, vizelet, széklet stb.). A feldolgozás után a laboratórium munkatársai összehasonlítják az eredményt az adatbázissal, azonosítják a koncentrációt, a kórokozó típusát.

A PCR analízist egy speciális erősítőbe (eszközbe) helyezzük, amely a bioanyaggal melegíti és hűti a kémcsöveket. A fragmens replikációjához hőmérséklet-változásra van szükség. Az eredmény pontossága a hőmérsékleti rendszer pontosságától függ. A polimeráz láncreakciós módszer segít azonosítani:

• Fertőző mononukleózis;
• citomegalovírus fertőzés;
• vírusos hepatitis G, C, B, A;
• szexuális úton terjedő fertőzések / betegségek (STI-k / STD-k): gardnerellosis, trichomoniasis, ureaplasmosis;
• herpetikus fertőzés;
• onkogén vírusok;
• listeriosis;
• helicobacter fertőzés;
• kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás, borreliosis;
• tuberkulózis;
• candidiasis.

Vér

Jelenleg a technológia újszerűsége miatt a PCR vérvizsgálatnak még mindig magas ára van. A bioanyag elkészítéséhez nem szükséges bizonyos követelményeknek megfelelni. Még a fizikai aktivitás, a stressz, az étrend változása, az összetétel változása sem befolyásolja a vizsgálat eredményét. A PCR vérvizsgálat csak az antibakteriális szerek bevitelét ronthatja el, ezért szedése előtt szünetet kell tartani a kezelés és a vizsgálat között.

A PCR vérvizsgálat a leggyakoribb lehetőség a vírusos vagy atipikus megnyilvánulású krónikus, akut fertőző patológiák diagnosztizálására. A szerológiai kutatási módszerek végrehajtása bizonyos nehézségekkel jár - a kórokozó jelenlétét az emberi szervezetben lévő antitestek jelenléte határozza meg. Az eredmény fals negatív lehet, ha a beteg állapota nem ad időt a fejlődésére.

kenet

A nőgyógyászat területén PCR kenetelemzést alkalmaznak a fertőző mikroorganizmusok jelenlétének vizsgálatára. Az anyaggal végzett munka ugyanazon elv szerint történik, mint a vérrel: a kórokozó DNS-fragmenseinek többszörös növelése a könnyű azonosítás érdekében. Segít a rejtett fertőzések kimutatásában is egy nőben. Különféle biológiai folyadékok vehetők fel elemzésre: nyál, köpet, vizelet, vér. A nőgyógyászatban a meghatározás pontossága érdekében gyakrabban használnak kenetet a méhnyakcsatornából a hüvely nyálkahártyájáról.

Vannak bizonyos indikációk a PCR-re. Gyakran meg kell tenni egy antibiotikum-rezisztens kórokozó azonosítását. Nőknél az ezzel a módszerrel történő diagnózis fő jelzései a következők:

• nehéz terhesség;
• az STI-k akut fázisa;
• ha fennáll a STI-k krónikus stádiumba való átmenetének gyanúja;
• a meddőség okainak keresése.

Cala

A fertőzés kimutatására az orvos széklet PCR-vizsgálatot írhat elő. Annak érdekében, hogy a vizsgálat után a legmegbízhatóbb eredményeket kapjuk, a bioanyag felvétele előtt be kell tartani a következő szabályokat:

• hagyja abba a hashajtók szedését néhány napig: olajok, kúpok;
• kizárni azokat a gyógyszereket, amelyek speciális színt adnak a székletnek, például vastartalmúak.

A mintavételhez használjon steril botot és edényt. Valami, hogy törölje őket továbbá, öblíteni nem szükséges. Anyaggyűjtéskor ügyeljen arra, hogy ne érintse meg kézzel a tartály belső falait. Győződjön meg arról, hogy a székletben nincs vizelet szennyeződés, nem használhat további segédeszközöket a székletürítéshez (beöntés). Az anyagot a szállítás napján kell összegyűjteni, a tartály térfogatának 1/3-a elegendő. Ennek a diagnosztikai módszernek a következő előnyei vannak:

Vizelet

Szükség esetén az orvos vizeletet vehet fel vizsgálat céljából. A nagy pontosság lehetővé teszi, hogy bármilyen biológiai folyadékkal dolgozzunk, amelyből vírus DNS-t lehet kinyerni. A PCR vizeletvizsgálat átadásához az anyag felvétele előtt be kell tartania a következő korlátozásokat:

• legalább 1 nappal az eljárás előtt hagyja abba a szexuális kapcsolatot;
• 3 héttel a szülés előtt minden antibakteriális kezelést el kell végezni, mert a gyógyszerek elhomályosítják a képet;
• a tesztet éhgyomorra kell elvégeznie (folyadék is tilos);
• be kell vennie az anyag első reggeli részét.

PCR teszt eredményei

A fentiekből jól látható, hogy mi a PCR-elemzés, és láthatóak ennek a kutatási módszernek az előnyei. A diagnosztikai eljárás másik előnye az eredmények egyszerű megfejtése. Figyelembe véve, hogy mennyi PCR-elemzést végeznek (maga a folyamat körülbelül 5 órát vesz igénybe, de a laboratórium 1-2 napon belül kiadja az adatokat), ez a diagnosztikai módszer a legjobb megoldás sok fertőzés meghatározására. Az eredmények alapján orvosa azt mondhatja Önnek, hogy a vizsgálat:

1. Negatív - a vizsgált anyag nem tartalmazta a kívánt kórokozót.
2. Pozitív - RNS-t, a kórokozó DNS-ét találták.

Néha a mikroorganizmusok mennyiségi meghatározására kerül sor. Ez olyan betegségek esetén szükséges, amelyek opportunista kórokozókat okoznak. E vírusok sajátossága, hogy csak feleslegben jelennek meg, és a hagyományos vizsgálatokkal rendkívül problematikus megtalálni őket. Ez a tényező fontos a terápiás taktika megválasztásához a vírusfertőzések, például a hepatitis, a HIV hatékony kezelése érdekében.

12 fertőzésre

Ahhoz, hogy teljes mértékben megértsük, mi a PCR a fertőzések diagnosztizálására és mennyire hatékony, tudnia kell, hogy akár 12 kórokozó izolálására is alkalmas. A szöveg csak laboratóriumi körülmények között készült. A kutatáshoz speciális enzimeket használnak, amelyek sokszorosára növelik a vírus RNS-ének, DNS-fragmenseinek mennyiségét. A 12 fertőzés PCR-elemzése feltárhatja:

• Mycobacterium tuberculosis;
• citomegalovírus;
• hepatitis C, G, B, A;
• herpesz 1, 2 típusú;
• Epstein-Barr vírus (fertőző mononukleózis);
• szexuális úton terjedő fertőzések, például chlamydia;
• listeriosis;
• Candida fertőzés;
• Helicobacter pylori;
• borreliosis, kullancs-encephalitis.

Hepatitis C esetén

Ez a diagnosztikai módszer segít meghatározni a vírus jelenlétét a vérben. Ez lehetőséget ad az orvosoknak, hogy beszéljenek a jelenlétéről vagy hiányáról. A hepatitis C esetében kétféle PCR-elemzés létezik: kvalitatív és kvantitatív. Az első opció csak a jelenlétét jelzi, és a "detektált" / "nem észlelhető" szavakkal szerepelhet. Az ilyen típusú tesztek érzékenysége 10-500 NE/ml. Ez arra utal, hogy alacsony kórokozó-tartalom esetén a szervezetben az elemzés „nem észlelhető”.

A kvantitatív elemzés pontosabb, és megmutatja a fertőzés koncentrációját a vérben. Ezt a mutatót "vírusterhelésnek" nevezik, amelyet a vírus RNS mennyiségében mérnek specifikus vértérfogatra vonatkoztatva. A dekódolás a különböző laboratóriumokban eltérő lehet. A NE / ml-ben történő mérés mellett "másolat" egységeket is használnak. A másolatok NE-enkénti újraszámítását a következő képlet segítségével végezheti el: 1 NE = 4 példány. Ha az átiratban a vírus jelenlétének értéke meghaladja a 800 000 NE / ml-t (vagy 800 * 103), ez a kórokozó magas tartalmát jelzi.

Tuberkulózisra

A vizsgálatot reggel kell elvégezni. Ez azért fontos, hogy megakadályozzuk, hogy az éjszaka folyamán keletkező összes köpet elhagyja a gyomrot. A tuberkulózis PCR-elemzése ugyanolyan fontos, mint az ELISA, a Mantoux, a tomográfia. A teszt segít azonosítani a mikobaktériumok jelenlétét, a vizelet állapotát, az összes immunglobulin szintjét, az ESR-t, és meghatározni a tüdő aktuális állapotát. A PCR-elemzés eredményeinek pontos megszerzése érdekében azt a következő szabályok betartásával kell elvégezni:

1. A vetést háromszor végezzük, de a gyomor tartalmának teljes felszívását csak kórházban szabad elvégezni.
2. A diagnózisok kevesebb mint 50%-ában kimutatja a mikobaktériumokat a gyomorban meglévő tömegek tenyésztésével. Még az optimális feltételek elérése esetén is javasolt az ultrahang.
3. Még negatív eredmény esetén sem zárható ki teljesen a tuberkulózis kialakulásának valószínűsége az ESR, az immunglobulin vagy más mutatók változásával.
4. A PCR tenyészet kevésbé fogékony a patológiás állapotokra, ha bronchoszkópos vizsgálat részeként nyerik, ami kizárja a tbc gyanúját egy gyermekben.

HIV-re

Sok ember számára ez a diagnózis halálos ítéletnek számít. Emiatt a gyakori szexuális együttlét után az ember figyelmesebbé válik a teste által adott jelzésekre (és néha előjön velük). A betegség megerősítésének vagy cáfolatának legmegbízhatóbb módja a HIV-vírus PCR-tesztje. A teszt a következő lehetséges egészségügyi problémák azonosítására használható:

1. A HIV jelenlétének tagadása/megerősítése a szeronegatív ló időszakában.
2. A HIV-1, HIV-2 genotípusának meghatározása.
3. A kóros folyamat leírásának tisztázása az immunoblot kétséges eredményével.
4. Fertőzés vérátömlesztés után.
5. A HIV-státusz meghatározása hordozó anyától született gyermekeknél.
6. Segít a szervezet vírusterhelésének monitorozásában.

HPV esetén

A papillomavírus bárkinél kimutatható, hosszú ideig lappangó állapotban is lehet. A fejlődés az immunrendszer gyengülését, stresszt vagy érzelmi kitöréseket vált ki. A HPV PCR-elemzése segít meghatározni a vírus koncentrációját a vérben. Emiatt ajánlatos mennyiségi meghatározást végezni minőségi helyett. Ezek az adatok segítenek megjósolni a fertőzés rosszindulatú természetének kialakulásának valószínűségét.

A HPV jelenlétének diagnosztizálására szolgáló technika a PCR azon fő tulajdonságán alapul, hogy izolálja a vírus DNS-ét az anyagból. A teszt nagy érzékenysége miatt kis mennyiségű baktérium is kimutatható. A kvantitatív kutatás lehetőséget ad az orvosoknak a betegség veszélyességi fokának meghatározására, a jövőre vonatkozó prognózis elkészítésére. Ez a diagnózis kötelező minden olyan férfi és nő számára, akinél szemölcsök vannak. A kvantitatív PCR elemzés segít meghatározni, hogy mi okozta a HPV kialakulását: az immunitás átmeneti csökkenése vagy krónikus betegség.

Herpeszre

Ez a fajta mikrobiológiai diagnosztika nagy pontossággal segíti a herpesz PCR elemzését. A vírus DNS-fragmenseinek másolása csak akkor történik meg, ha a kívánt gén jelen van az anyagban. Ebben az esetben a magatartás eredménye alapján végzett vizsgálat jelezheti a kórokozó jelenlétét vagy hiányát. Még alacsony koncentrációban is kimutatható lesz a vérben.

A PCR elemzés további előnye, hogy a herpeszvírus fertőzést közvetlenül a fertőzés után, még a klinikai tünetek megjelenése előtt képes kimutatni. Meghatározható a herpesz típusa (1 vagy 2), az elemzés átadásához nincs szükség speciális előkészítésre, de az orvosok azt javasolják, hogy a vérvétel előtt megtagadja:

• sült;
• akut;
• alkohol;
• zsíros.

Terhesség alatt

Gyermek hordozásakor nagyon fontos ezt a vizsgálatot elvégezni, hogy figyelembe vegyék a nő állapotát. A terhesség alatti PCR-elemzés szerepel a leghatékonyabb módszerek listáján a különféle betegségek jelenlétének meghatározására. Nemcsak a patológiák azonosítására, hanem a gyermek méhen belüli fertőzésének valószínűségének meghatározására is vizsgálatot kell végezni. Csak a PCR diagnosztikának köszönhetően vált lehetővé a progresszió mértékének, az anyaméhen belüli fertőzések kialakulásának azonosítása.

PCR elemzések átadása

Ha kíváncsi arra, hogyan történik a PCR elemzés, akkor minden egyes esetet mérlegelni kell, figyelembe véve a bioanyag típusát. Például a kaparásnak, kenetnek vagy vérvételnek megvannak a maga sajátosságai.

A polimeráz láncreakció (PCR) egy nagy pontosságú módszer az örökletes patológiák, fertőzések, vírusos betegségek diagnosztizálásának területén bármely szakaszban (akut vagy krónikus), valamint - korai stádiumban - a betegség nyilvánvaló megnyilvánulása előtt, azonosítással. kórokozók DNS-ük, RNS-ük alapján, amelyek genetikai anyag, a pácienstől vett mintákban. És ma beszélünk a polimeráz láncreakció (PCR) módszereinek lényegéről, diagnosztikai szakaszairól és elveiről, valamint annak költségeiről.

Mi a polimeráz láncreakció

Az elemzés alapja az amplifikáció (duplázás) - sok másolat létrehozása a DNS egy rövid szakaszából (dezoxiribonukleinsav), amely az emberi genetikai komplexumot képviseli. A vizsgálathoz nagyon kis mennyiségű fiziológiás anyagra van szükség (köpet, széklet, hámkaparék, prosztatalé, vér, sperma, magzatvíz, nyálka, méhlepényszövet, vizelet, nyál, mellhártyafolyadék, agy-gerincvelői folyadék). Ilyenkor például akár egyetlen káros mikroba is kimutatható a beteg urogenitális traktusában.

A PCR technikát (polimeráz láncreakció) K. Mullis amerikai tudós fejlesztette ki, aki 1993-ban Nobel-díjat kapott.

Aktívan használt:

• fertőzések korai diagnosztizálásában, genetikai,;
• igazságügyi orvosszakértői vizsgálat során rendkívül kis mennyiségű DNS jelenlétében kutatás céljából;
• állatgyógyászatban, gyógyszerészetben, biológiában, molekuláris genetikában;
• személy DNS-sel történő azonosítása, apaság igazolása;
• paleontológiában, antropológiában, ökológiában (a termékek minőségének, környezeti tényezők nyomon követésekor).

Ez a videó megmutatja, mi a polimeráz láncreakció:

Kinek van hozzárendelve

A polimeráz láncreakció a fertőző betegségek diagnosztizálásában az egyik legmegbízhatóbb módszer a nagy pontossággal és megbízhatósággal. Például a chlamydia és sok más kórokozó PCR-analízisének megbízhatósága megközelíti a 100%-ot (abszolút). Leggyakrabban a polimeráz láncreakciós eljárást olyan betegek számára írják fel, akiknek a diagnózis során nehézségeik vannak egy adott kórokozó azonosításában.

Laboratóriumi PCR tesztet használnak:

• a húgyúti és a nemi szervek fertőzését okozó kórokozók kimutatására, amelyeket terméssel vagy immunológiai módszerekkel nehéz azonosítani;
• a HIV újbóli diagnosztizálására a kezdeti stádiumban, ha a kezdeti elemzés pozitív, de megkérdőjelezhető eredménye (például AIDS-szel fertőzött szülőktől származó újszülötteknél);
• onkológiai betegség korai szakaszában történő megállapítása (onkogén mutációk vizsgálata) és a kezelési rend egyéni korrekciója egy adott beteg számára;
• örökletes patológiák korai felismerése és lehetséges kezelése céljából.

Tehát a jövőbeli szülőket tesztelik, hogy kiderüljön, genetikai patológia hordozói-e; gyermekeknél a PCR meghatározza az örökletes betegségnek való kitettség valószínűségét.

• magzati rendellenességek kimutatására korai term terhesség (a növekvő embrió egyes sejtjeit megvizsgálják a lehetséges mutációk szempontjából);
• betegeknél szervátültetés előtt - "szövettipizáláshoz" (szöveti kompatibilitás meghatározása);
• veszélyes patogén organizmusok kimutatására az adományozott vérben;
• újszülötteknél - látens fertőzések kimutatására;
• az antivirális és antimikrobiális kezelés eredményeinek értékelésére.

Miért kell végigmenni ezen az eljáráson?

Mivel a PCR egy rendkívül hatékony diagnosztikai módszer, amely közel 100%-os eredményt ad, az eljárást alkalmazzák:

• a végső diagnózis megerősítésére vagy kizárására;
• a terápia hatékonyságának gyors felmérése.

Sok esetben a PCR az egyetlen lehetséges vizsgálat egy kialakuló betegség kimutatására, ha más bakteriológiai, immunológiai és virológiai diagnosztikai módszerek haszontalanok.

• A vírusokat PCR-rel kimutatják közvetlenül a fertőzés után, még mielőtt a betegség jelei megjelennének. A vírus korai felismerése lehetővé teszi a gyors kezelést.
• Az úgynevezett „vírusterhelést” (vagy a vírusok számát a szervezetben) szintén kvantitatív DNS-elemzés határozza meg.
• A specifikus kórokozók (például a Koch-tubercle bacillus) nehézkesek, és túl sokáig tart a tenyésztés. A PCR elemzés lehetővé teszi, hogy gyorsan azonosítsa a kórokozók minimális számát (élő és elhalt) a mintákban, amelyek alkalmasak a kutatáshoz.

Részletes patogén DNS-elemzést alkalmaznak:

• meghatározott típusú antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározása, amely lehetővé teszi a kezelés azonnali megkezdését;
• a járványok terjedésének visszaszorítása a házi-, vadon élő állatok körében;
• új fertőző mikrobiális fajok és kórokozó-altípusok azonosítása és monitorozása, amelyek a korábbi járványokat táplálták.

A diagnosztika típusai

Szabványos módszer

A polimeráz láncreakció elemzését egy specifikus DNS- és RNS-fragmens többszöri amplifikációja (duplázása) alapján végezzük speciális primer enzimek segítségével. A másolási lánc eredményeként a kutatáshoz elegendő mennyiségű anyagot kapunk.

Az eljárás során csak a kívánt fragmentum másolása történik meg (a meghatározott specifikus feltételeknek megfelelően), még akkor is, ha az ténylegesen jelen van a mintában.

Ez a részletes videó hasznos diagramokkal bemutatja a PCR működését:

Egyéb módszerek

• Valós idejű PCR. Az ilyen típusú vizsgálatokban egy adott DNS-fragmens azonosításának folyamata minden ciklus után kezdődik, és nem a teljes 30-40 ciklusból álló lánc befejezése után. Ez a fajta vizsgálat lehetővé teszi, hogy információt szerezzen a kórokozó (vírus vagy mikroba) mennyiségéről a szervezetben, azaz mennyiségi elemzést végezzen.
• RT-PCR (fordított transzkripciós mód). Ezt a vizsgálatot az egyszálú RNS megtalálására használják olyan vírusok kimutatására, amelyek genetikai alapja RNS (például hepatitis C vírus, immunhiányos vírus). Egy ilyen vizsgálat során egy speciális enzimet használnak - reverz transzkriptázt és egy bizonyos primert, valamint az egyszálú DNS-t RNS alapján építik fel. Ezután ebből a szálból egy második DNS-szálat állítunk vissza, és végrehajtjuk a standard eljárást.

A tartás jelzései

A PCR eljárást a fertőző betegségek, neonatológia, szülészet, gyermekgyógyászat, urológia, nőgyógyászat, venerológia, neurológia, nefrológia, szemészet klinikáján alkalmazzák.

Jelzések az elemzés céljára:

• a genetikai rendellenességek kialakulásának kockázatának tisztázása az örökletes patológiák valószínűségével rendelkező gyermekeknél;
• mindkét szülő diagnosztizálása terhesség tervezésekor vagy az anya súlyos állapota folyamatban lévő terhesség alatt;
• a fogamzás nehézségei, a meddőség okainak azonosítása;
• szexuális fertőzések gyanúja akut stádiumban és krónikussá válásuk tüneteivel;
• tisztázatlan eredetű gyulladásos folyamatok okainak feltárása;
• védekezés nélküli alkalmi és állandó szexuális kapcsolatok;
• a patogén mikroorganizmus specifikus antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározása;
• lappangó fertőzés gyanúja esetén a kórokozók kimutatása a nyilvánvaló tünetek kialakulása előtt (preklinikai diagnózis);
• betegek a betegség utáni felépülés megerősítésére (retrospektív diagnózis);

A diagnosztikát akkor is alkalmazzák, ha szükséges a következő kórokozók pontos azonosítása:

• hepatitis vírusok (A B C G), humán immunhiány, citomegalovírus;
• vibrio kolera;
• herpes simplex vírus, herpetiform fajok;
• retro - adeno - és rhinovírusok;
• rubeola vírusok, Epstein-Barr, varicella (Zoster - vírus);
• parvo és picornavírusok;
• Helicobacter pylori baktérium;
• legionella, az Escherichia coli patogén típusai;
• staphylococcus aureus;
• kórokozó;
• Clostridia, diftéria és Haemophilus influenzae;

A fertőzések meghatározására is használják:

• Fertőző mononukleózis;
• borreliosis, listeriosis, kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás;
• Candida gombák által okozott candidiasis;
• szexuális fertőzések - trichomoniasis, ureaplasmosis, sápadt treponema, gardnerellosis, gonorrhoea, mycoplasmosis, chlamydia;
• tuberkulózis.

A tartás ellenjavallatai

Mivel a beavatkozást nem a pácienssel, testre gyakorolt ​​hatás nélkül, hanem kutatásra vett biológiai anyaggal végzik, a potenciális veszély hiánya miatt a PCR-re nincs ellenjavallat.

A méh nyaki csatornájából azonban bioanyag-mintavételre a kolposzkópia után nem kerül sor. A kenetek, kaparók elemzésre történő szállítása csak a menstruáció vége és a váladékozás teljes megszűnése után 4-6 nappal megengedett.

Biztonságos-e a módszer

A bioanyagának laboratóriumi izolált vizsgálata során nincs negatív hatás a páciensre.

Felkészülés az eljárásra (biológiai anyagok elemzésre történő szállítása)

PCR-elemzés mintájaként, amelyben idegen kórokozó DNS-ét mutatják ki, bármilyen biológiai folyadékot, szövetet, testváladékot használnak. A vizsgált anyag mintavételét vénából, a gégeből, az orrüregből, a húgycsőből, a mellhártya üregéből, a méhnyakból történő kaparással végzik.

A diagnosztikai eljárás előtt az orvos elmagyarázza a páciensnek, hogy milyen anyagot kell venni:

1. A nemi fertőzések vizsgálatakor a nemi szervek váladékát, vizeletet és a húgycsőből kenetet vesznek.
2. Herpetikus fertőzések, citomegalovírus, mononukleózis elemzésekor - vizeletet, torokkenetet vesznek az elemzéshez, hepatitis, toxoplazmózis - vért vesznek a vénából.
3. A különböző típusok diagnosztizálására liquort vesznek.
4. A pulmonológiában az elemzésre szolgáló minták a köpet és a pleurális folyadék.
5. A terhesség alatti lehetséges méhen belüli fertőzések vizsgálatakor magzatvíz és placenta sejteket használnak az elemzéshez.

Az elemzés megbízhatósága és pontossága az anyagfelvétel körülményeinek sterilitásától függ. Mivel a PCR-teszt nagyon érzékeny, a vizsgált anyag bármilyen szennyeződése torzíthatja az eredményt.

A bioanyag bejuttatásának szakszerű előkészítése nem jelent nehézséget a betegek számára. Vannak bizonyos ajánlások:

• a szexuális fertőzések elemzésekor:
  • zárja ki az intim érintkezést 72 órával az anyag átadása előtt;
  • hagyja abba a hüvelyi termékek használatát 3 napig;
  • az előző nap este óta ne végezzen higiéniát a vizsgált területen;
  • kizárja a vizelést 3-4 órán keresztül, amikor mintát vesz a húgycsőből;
• hagyja abba az antibiotikumok szedését egy hónappal a fertőzések vizsgálata előtt;
• vért adni reggel étkezés és ivás előtt;
• az első reggeli vizeletadag összegyűjtése steril edényben történik alapos intim WC után.

Tudjon meg többet arról, hogyan történik a diagnosztika a polimeráz láncreakciós módszerrel.

Hogyan zajlik az eljárás

Amikor újra és újra PCR-vizsgálatot végeznek a reaktorban (erősítőben vagy hőciklusban), bizonyos ciklusok megismétlődnek:

1. Az első lépés a denaturáció. A nyálat, vért, biopsziát, nőgyógyászati ​​mintákat, köpetet, amelyben a kórokozó DNS-ének (vagy RNS-ének) jelenlétét gyanítják, erősítőbe helyezik, ahol az anyagot felmelegítik és a DNS-t két különálló láncra hasítják.
2. A második lépés az anyag lágyítása vagy enyhe hűtése.és olyan primereket adunk hozzá, amelyek képesek felismerni a kívánt szakaszokat a DNS-molekulában és kötődni hozzájuk.
3. A harmadik lépés a nyúlás- minden DNS-szálhoz 2 primer hozzáadása után következik be. A folyamat során elkészül a kórokozó DNS-fragmentuma, ennek másolata keletkezik.

Ezek a ciklusok „láncreakcióként” ismétlődnek, és minden alkalommal egy adott DNS-fragmens kópiáinak megkétszereződéséhez vezetnek (például egy olyan szegmenshez, amelybe egy bizonyos vírus be van programozva). Néhány óra alatt sok kópia keletkezik a DNS-fragmensből, és kimutatható a jelenlétük a mintában. Ezt követően az eredményeket elemzik és összehasonlítják a különböző típusú kórokozók adatbázisával, hogy meghatározzák a fertőzés típusát.

Az eredmények értelmezéséről és a PCR reakció alapján levont következtetésről az alábbiakban olvashat.

Az eredmények megfejtése

A vizsgálat végeredményét a biológiai anyag leadása után 1-2 nappal adják ki. Gyakran - már az elemzést követő első napon.

Kvalitatív elemzés

• Negatív az eredmény azt jelenti, hogy a kutatásra benyújtott anyagban nem találtak fertőző ágensek nyomait.
• Pozitív az eredmény a kórokozó vírusok vagy baktériumok biológiai mintában a benyújtás időpontjában történő nagyon nagy pontosságú kimutatását jelenti.

Ha az eredmény pozitív, de nincs jele a fertőzés aktiválódásának, akkor ezt a testállapotot tünetmentes „egészséges hordozásnak” nevezik. Leggyakrabban a bioanyag egy bizonyos helyről (nyaki csatornából, húgycsőből, szájüregből) történő felvételekor figyelhető meg vírusos betegségekben. Kezelés ebben az esetben nem szükséges, de állandó orvosi felügyelet szükséges, mivel lehetőség van:

• a vírus terjedése a hordozóktól és az egészséges emberek fertőzése;
• a folyamat aktiválása és a betegség krónikus formába való átmenete.

Ha azonban a vérvizsgálat pozitív, az azt jelzi, hogy a fertőzés érintette a szervezetet, és ez már nem hordozó állapot, hanem azonnali specifikus terápiát igénylő patológia.

Mennyiségi elemzés

A mennyiségi eredményt a szakember határozza meg kifejezetten egy adott fertőzéstípusra. Ennek alapján felmérhető a fejlettség foka, a betegség stádiuma, ami lehetővé teszi a megfelelő kezelés azonnali előírását.

átlagköltség

A polimeráz láncreakció lebonyolításának árait a következők határozzák meg: a vizsgálat típusa, a kórokozó azonosításának összetettsége, a biológiai anyag gyűjtésének nehézsége, az elemzés típusa (kvalitatív vagy kvantitatív), a laboratóriumi árszint.

Másrészt a PCR vizsgálata során egy-egy anyag elemzésre vételével egyszerre több kórokozó is kimutatható. Ez megtakarítja a többi laboratóriumi vizsgálatot.

Hozzávetőlegesen a PCR-elemzés költsége rubelben:

• gonococcus, gardnerella, trichomonas vaginalis - 180-tól
• chlamydia trachomatis - 190-től
• papillomavírus - 380-500
• az urogenitális traktus biocenózisa nőknél (a mikroflóra mennyiségi és minőségi értékelése) - 800-tól.

Még több hasznos információ a PCR vizsgálattal kapcsolatban lásd az alábbi videót:

A polimeráz láncreakció (PCR) a molekuláris genetikai diagnosztika nagy pontosságú módszere, amely lehetővé teszi a különféle fertőző és örökletes betegségek kimutatását emberben, mind akut, mind krónikus stádiumban, jóval azelőtt, hogy a betegség megnyilvánulhatna.

A polimeráz láncreakciót (PCR) 1983-ban fejlesztette ki Cary Mullis (USA), amiért 1993-ban kémiai Nobel-díjat kapott.

A PCR-elemzés a legtöbb fertőzés egyfajta „arany standardjává” vált. A legtöbb szakember szinte naponta szembesül vele, és el sem tudja képzelni nélküle a végső diagnózis felállítását. A PCR gyakran az egyetlen reakció a betegség aktív szakaszainak kimutatására azokban a pillanatokban, amikor más bakteriológiai, virológiai, immunológiai diagnosztikai módszerek nem működnek.

A PCR-diagnosztika előnyei a modern orvostudományban:

Egy kórokozó (nevezetesen a kórokozó DNS-ének vagy RNS-ének egy meghatározott régiója) jelenlétének közvetlen kimutatása a vizsgált mintában.
A magas specifitás lehetővé teszi egy adott kórokozóra jellemző DNS vagy RNS egyedi szakaszának meghatározását, ami kiküszöböli a hamis reakciók lehetőségét.
A PCR módszer nagy érzékenysége lehetővé teszi a kórokozók (vírusok, baktériumok) egyetlen sejtjének kimutatását is. A PCR analízis érzékenysége 10-1000 sejt a vizsgált mintában (például az immunológiai és mikroszkópos tesztek érzékenysége csak 103-105 sejt).
Univerzális PCR technika kidolgozása különféle kórokozók kimutatására. A PCR kutatás tárgya a kórokozó genetikai anyaga (DNS, RNS). A technika lehetővé teszi több kórokozó kimutatását egy biológiai mintából.
Viszonylag gyors elemzési eredmények. A teljes vizsgálatot 4-4,5 órán belül végezzük, ritkábban - egy kicsit tovább.
A kórokozók kimutatásának képessége a betegség tüneteinek megjelenése előtt (preklinikai diagnózis) és a múltbeli betegség után (retrospektív diagnózis). A preklinikai diagnózisra példa lehet az inkubációs periódusban (a fertőzés pillanatától a beteg panaszainak megjelenéséig) végzett vizsgálat, valamint a látens fertőzés (amikor egyáltalán nincsenek tünetek, de csak laboratóriumi adatok vannak - PCR). , például). A PCR diagnosztika egyik fontos pontja az archív anyagokban vagy biológiai maradványokban található PCR, amely a személy vagy az apaság azonosítása szempontjából fontos.

Jelenleg a PCR diagnosztika jelentős fejlődésen megy keresztül. Maga a módszer fejlesztés alatt áll, újra és újra megjelennek a PCR új típusai, új tesztrendszerek jelennek meg az orvosi piacon. Ennek köszönhetően a PCR-vizsgálatok költsége évről évre a betegek széles köre számára megfizethetőbbé válik.

Mi a PCR módszer alapja

A polimeráz láncreakció alapja a DNS vagy RNS egy bizonyos szakaszának ismételt megkettőzése (amplifikációja) enzimek segítségével a laboratóriumban. Ennek eredményeként a vizuális elemzéshez elegendő mennyiségű DNS vagy RNS képződik. A vizsgálat során csak azt a területet másoljuk le, amelyik megfelel a meghatározott feltételeknek, és csak abban az esetben, ha jelen van a vizsgálati mintában.

Például egy olyan kutatási anyagot, amelyben a kórokozó DNS- vagy RNS-fragmenseinek (nyál, vér, vizelet, nemi szervek váladéka) jelenléte várható, speciális reaktorba (erősítőbe) helyezik. Továbbá specifikus enzimeket adnak hozzá, amelyek a kórokozó DNS-éhez vagy RNS-éhez kötődnek, és ennek másolata szintetizálódik. Ez a másolás több szakaszban történik, mint egy "láncreakció", és végül egy másolatból genetikai anyag több száz és több ezer példány képződhet. Ezután következik az eredmény elemzése és összehasonlítása a meglévő adatbázissal a különböző kórokozók szerkezetéről. A PCR segítségével nemcsak a kórokozó típusát tudja azonosítani, hanem az elemzés kvantitatív eredményét is megadhatja, vagyis azt, hogy hány kórokozó van az emberi szervezetben.

A PCR módszer jelenleg a folyamatban lévő kutatások lehetőségeinek körét bővíti: mutációk bevezetése, DNS-fragmensek splicingje, és széles körben alkalmazzák az orvostudományban például apaság megállapítására, új gének megjelenésére stb.

Milyen fertőzések mutathatók ki PCR diagnosztikával

1) HIV fertőzés (a HIV-1 humán immunhiány vírus kimutatható)
2) Vírusos hepatitis A, B, C, G (RNS-HAV, DNS-HBV, RNS-HCV, RNS-HGV)
3) Fertőző mononukleózis (az Epstein-Barr vírus DNS-e – EBV)
4) Citomegalovírus fertőzés (DNS-CMV)
5) Herpetikus fertőzés (DNS – herpes simplex vírus HSV 1. és 2. típus)
6) STI-k (szexuális úton terjedő fertőzések) - ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis,
7) Tuberkulózis (mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogén vírusok – papillomavírus fertőzés (humán papillomavírus (beleértve annak onkogén fajai 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 és 59)
9) Borreliosis, kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás
10) Listeriosis
11) Candidiasis (a Candida nemzetségbe tartozó gombák)
12) Helicobacter pylori fertőzés
és mások

Tekintettel a kórokozók spektrumára, a PCR-diagnosztikát aktívan használják a nőgyógyászati, urológiai, fertőző betegségek gyakorlatában, pulmonológiában, phthisiologyban, gasztroenterológiában, hematológiában, onkológiában és másokban.

A kutatás anyaga és gyűjtésének szabályai

A PCR-kutatás anyaga, amelyben egy baktérium idegen DNS-e vagy egy vírus DNS-e vagy RNS-e kimutatható, különböző biológiai közegek és emberi folyadékok lehetnek: nyálka, vizelet, vér, köpet, hámsejtek kaparása, méhlepény szövetek, vér , prosztatalé, magzatvíz, pleurális folyadék.

A szexuális úton terjedő fertőzések (STI-k) szűrésekor a férfiak és a nők a nemi szervekből váladékot, kenetet vagy kaparást vesznek a méhnyakból, tampont vagy kaparást a húgycsőből (urethra), vizeletet.

A fertőzések (herpetikus fertőzések, CMVI, mononukleózis, toxoplazmózis, hepatitis B, C, HIV fertőzés) vizsgálatakor vért vesznek PCR-re.

A fertőző mononucleosis, CMVI, herpetikus fertőzés diagnosztizálásához tampont vesznek a torokból, CMVI-vizelet vizsgálathoz. Gyakran cerebrospinális folyadékot vesznek fel, hogy megvizsgálják az idegrendszer károsodását számos tanulmányban.

A pulmonológiában az anyag köpet, pleurális folyadék.

A méhen belüli fertőzések vizsgálatakor - magzatvíz, placenta szövet.

Anyagszállítás előkészítése és PCR diagnosztika

Szinte minden PCR-diagnosztikán átesett betegnek joga van megbízható, pontos és gyors eredményre számítani, ami nagymértékben függ a laboratórium képességeitől és a laboráns professzionalizmusától. Ugyanakkor sokan nem gondolják, hogy éppen ez a megbízhatóság nagymértékben rajtunk múlik, mégpedig a kezelőorvos ajánlásaitól, életmódjától és az anyagmintavétel helyességétől. Az anyagmintavétel során olyan feltételek szükségesek, amelyek kizárják az anyag szennyeződését (szennyeződését), és ennek megfelelően kétségbe vonják az elemzés objektivitását.

Az anyag szállításának megfelelő előkészítése nem különösebben nehéz. Az orvosok a következő ajánlásokat írják elő a betegek számára:

1) ne éljen szexuális életet egy nappal az anyag átadása előtt;
2) a kutatáshoz szükséges vért reggel éhgyomorra adják (ne egyen, ne igyon);
3) vizeletürítéskor az első reggeli adagot tiszta, steril edénybe kell gyűjteni.

A PCR elemzés határideje

A végeredmény az anyag kiszállítása után 1,5-2 napon belül készen van. Egyes esetekben az eredmény már az első napon készen áll.

A PCR eredmények értelmezése

Negatív a PCR eredmény azt jelzi, hogy a vizsgálati anyagban annak leadásakor nem találtak fertőző ágensek nyomait. Az esetek többsége a vizsgált mintában kimutatni próbált fertőzés hiányát mutatja.

Pozitív a PCR eredménye fertőzésnyomok kimutatását jelzi a vizsgált biológiai mintában. A pozitív eredmény nagy pontossággal jelzi a fertőzés jelenlétét egy adott időpontban.

Vannak helyzetek, amikor a PCR pozitív, de nem lehet aktív fertőzésről beszélni - ez az úgynevezett "egészséges szállítás" a betegség klinikai tünetei nélkül, amely nem igényel kezelést, de az orvos dinamikus megfigyelését igényli. Gyakrabban figyelhető meg számos vírusfertőzésben (HPV, CMVI, EBV-fertőzés, herpeszfertőzés és mások) olyan anyagokban, mint a nyál, a nyaki csatorna kaparása, a húgycső, azaz helyi fókuszból. Nem szabad azonban megfeledkezni arról, hogy lehetséges a fertőzés átvitele a hordozókról az egészséges emberekre, csakúgy, mint a betegség krónikus formájába való átmenet a folyamat aktiválásával. Ha a PCR pozitív a vérben, akkor ez már nem hordozó állapot, és speciális kezelést igényel.

A PCR kvantitatív eredményét csak az orvos értékeli egyedileg egy adott fertőzésre külön-külön, és nincs általános fokozata. A kvantitatív PCR-eredmény alapján az orvos meghatározhatja a fertőzési aktivitás mértékét és beállíthatja a betegség stádiumát, amely minden bizonnyal befolyásolja az előírt gyógyszerek lefolyását és dózisait.

Az egyik utolsó izgalmas kérdés: mennyire pontos a PCR diagnosztika?

A PCR-analízis három definíciója létezik:

1. Pontosság (nagy valószínűséggel fertőzés kimutatása vagy hiánya lehetséges).
2. Specificitás (pontosság egy adott fertőzés kimutatásában).
3. Érzékenység (még a vizsgált mintában lévő kórokozók genetikai anyagának alacsony tartalommal is kimutatható a fertőzés).

A polimeráz láncreakció gyakorlatilag nem ad hamis pozitív eredményt (vagyis nincs pozitív minta ott, ahol nincs fertőzés). A hamis negatív eredmények ritkák (gyakrabban ez annak köszönhető, hogy jelenleg nincs aktív fertőzés egy személyben). Például látens fertőzés, krónikus fertőzés, amely nem aktív.

Fertőző betegségek specialistája Bykova N.I.

Videó arról, miért és hogyan kell PCR-tesztet végezni fertőzésekre

A PCR diagnosztikai módszer lényege

A polimeráz láncreakció (PCR) módszer a molekuláris biológia elvein alapul, és a genetikai kutatások területéhez tartozik.

Bármely élő szervezet szerkezetében nukleinsavmolekulákat tartalmaz - DNS és RNS. Ez egyfajta genetikai útlevél, amely segít meghatározni, hogy ez vagy az a „hordozó” melyik fajhoz tartozik. Ennek az „útlevélnek” az átvizsgálásához azonban egészen a közelmúltig bizonyos minimális mennyiségű biológiai anyagra volt szükség. Ha a DNS-koncentráció alacsonyabb volt a szükségesnél, a diagnosztikai elemzés nem volt lehetséges.

A PCR-rel végzett diagnózis során a biológiai anyag mintáját speciális enzimekkel (polimerázokkal) kezelik, amelyek lehetővé teszik a meglévő DNS (RNS) többszöri másolásának folyamatát. Láncreakciós kaszkád segítségével, a geometriai progresszió elve szerint, mindössze néhány óra alatt több tíz billió kópia nyerhető egy nukleinsavmolekuláról. Ez a kötet bőven elegendő bármilyen összehasonlító tanulmányhoz.

Az elemzéshez erősítőt használnak, amelyben szigorú hőmérsékleti feltételek mellett a többszörös DNS-replikáció folyamata megy végbe. Általában 20-30 replikációs ciklus elegendő. Mindegyik 3 egymást követő szakaszból áll:

• denaturáció - a DNS-mátrix melegítése 96 °C-ra a szomszédos láncok közötti hidrogénkötések megsemmisítésével;
• lágyítás - a hőmérséklet 4 °C-os csökkentése replikációs villa létrehozásához;
• elongáció - DNS polimerázok elindítása új nukleotid láncok szintéziséhez a szülő alapján.

Minden három szakaszból álló ciklus átlagosan 15-20 percig tart.

A PCR diagnosztika előnyei

A PCR-elemzés csúcstechnológiás és professzionalizmust igényel a laboratóriumi személyzettől, de a modern orvostudomány számára példátlan lehetőségek forrásává vált a pontos diagnosztika területén.

A PCR előnyei:

• egyetemesség (bármilyen biológiai anyag megvizsgálható - a vérsejtektől, a nyáltól és a hajtól a gyanús foltokig a bűncselekmény helyszínén);
• magas érzékenységi küszöb (a módszer egyetlen sejt vagy egyedi DNS-molekulák jelenlétében is képes eredményt adni a mintában);
• multitasking - egy megközelítésben egyszerre több különböző típusú információhordozó detektálható (erre a bakteriológiai módszerek nem képesek, mivel mikroorganizmusonként más tápközeget igényelnek);
• pontos mennyiségi elemzés elvégzésének képessége;
• feldolgozási sebesség (más típusú genetikai vizsgálatokkal ellentétben a PCR diagnosztika csak 5-7 órát vesz igénybe);
• az eredmény pontossága (ha a technológiát betartják, a hiba gyakorlatilag kizárt);
• viszonylag alacsony költség (a PCR elemzés nem haladja meg a standard tesztek átlagárát).

Mindezek az előnyök lehetővé teszik a polimeráz láncreakció alkalmazását a kezelési folyamat rendszeres ellenőrzésére.

A PCR diagnosztikai módszer kidolgozója okkal kapott Nobel-díjat „agygyermekéért”. A polimeráz láncreakciós módszer lehetővé teszi:

• meghatározza a fertőző ágens törzsét, minimális tartalommal a bioanyagban (maximum egyetlen vírusszerkezetig);
• kiszámítja a kórokozó pontos koncentrációját az egész szervezetben (a gyógyszerek optimális dózisának meghatározásához);
• felméri a betegre gyakorolt ​​kóros hatások mértékét, és azonosítja a magas farmakológiai rezisztenciával rendelkező törzseket;
• állapítsa meg a fertőzés egymást követő szakaszait, és készítsen további prognózist.

Ez érdekes! A PCR elemzés lehetőségei jóval szélesebbek, mint az emberi szervezet fertőző hátterének mennyiségi és minőségi felmérése. A fertőzések kimutatása mellett a rokonság megállapítására, a személyiség meghatározására, a genetikai patológiák azonosítására és a bioanyag összehasonlítására használják a törvényszéki tudományban.

Milyen fertőzések mutathatók ki PCR diagnosztikával

A PCR-elemzés nagy pontossággal képes kiszámítani a modern orvosi betegségek katalógusában szereplő bármely fertőző hordozót:

• minden típusú hepatitis kórokozója (a PCR lehetővé teszi a fertőzés forrásának azonosítását az inkubációs időszak szakaszában, és a kezelés megkezdését jóval a betegség tüneteinek megjelenése előtt);
• HIV és STD-k kórokozói (ureaplasmák, mikoplazmák, chlamydia, trichomonas);
• a TORCH fertőzések csoportja (releváns a terhes nők vizsgálatakor a magzati patológiák korai felismerése érdekében);
• tuberkulózis (a betegség látens formája);
• candidiasis (látens forma);
• enterovírus fertőzés;
• mononukleózis;
• listeriosis;
• szalmonellózis (egy specifikus törzs meghatározása);
• papillomavírus;
• gardnerellosis;
• kullancs-encephalitis vírus.

Különösen népszerű az intracelluláris fertőzések (például chlamydia) elemzése, amelynek meghatározása a szokásos módon még akkor is nehéz, ha ezek a mikroorganizmusok nagy koncentrációban vannak a páciens szöveteiben.

A módszer többfeladatosságából adódóan 12 alapfertőzés egyidejű PCR elemzése is elvégezhető. Az integrált megközelítés kényelmes választás a szexuális úton terjedő fertőzések rutinszerű szűrésére, minimális téves diagnózis kockázatával.

Egy megjegyzésben! A PCR diagnosztika segítségével előrejelzés készül a szervezetben lévő fertőzések úgynevezett "alvó" formáira, amelyek a betegség tünetei nélkül vannak (különösen fontos nőgyógyászati ​​és urológiai betegségek, tuberkulózis, kullancs által terjesztett betegségek kezelésében). agyvelőgyulladás, papillomavírus).

Milyen biológiai anyagokat vizsgálnak

Nincsenek meghatározott szabályok vagy határok. A módszer sokoldalúsága lehetővé teszi bármilyen biológiai anyag felhasználását az elemzéshez:

• hüvelyi tampon, a húgycsőből és a nyaki csatornából való kaparás (az STD-k diagnosztizálására);
• vizelet (tuberkulózis, egyes STD-k, citomegalovírus);
• vér (HIV, hepatitis, TORCH fertőzések);
• toroktampon (mononukleózis, citomegalovírus);
• alkohol (idegfertőzés)
• magzatvíz és a placenta szövetei (a TORCH-fertőzés elemzése a magzati fejlődés patológiáinak megelőzésére);
• pleurális folyadék (tüdőfertőzések).

Más típusú PCR diagnosztikához (rokonság megállapítása, bioanyag összehasonlítása) nyálat, hajat, körmöket, hámsejteket és egyéb genetikai információforrásokat használnak.

Egy megjegyzésben! A PCR diagnosztika módszere nemcsak az élő szövetek összetételében, hanem talaj-, víz-, növényi szubsztrátummintákban is feltárja a kórokozókat; értékelje a mikroorganizmusok patogén aktivitását mind az emberi szervezetben, mind a környezetében (a betegség megállapított forrásának jelenléte lehetővé teszi a megfelelő intézkedések megtételét a jövőbeni megelőzésére).

Hogyan készüljünk fel az elemzésre

Klinikánk pácienseinek nem kell azon töprengeni, hol végezzenek PCR-tesztet. Minden feltételt biztosítunk a steril anyagmintavételhez és a laboratóriumba küldéshez.

Speciális képzés nem szükséges, de tanácsos követni az általános ajánlások listáját. Néhány napra hagyjon fel az alkohollal, korlátozza a dohányzást, ha lehetséges, zárja ki a gyógyszereket, próbálja meg elkerülni a stresszes helyzeteket és a nehéz fizikai megterhelést.

Az elemzés átadására való felkészülés többi része a bioanyag típusától függ:

• mielőtt kenetet venne vagy kaparna az urogenitális fertőzések miatt, 2-3 napig tartózkodjon a nemi érintkezéstől (a nőknek meg kell győződniük arról, hogy a vizsgálat napja nem esik a menstruáció napjaira);
• a PCR vérvizsgálata előtt tartózkodjon a reggeli étkezéstől (a tesztet éhgyomorra veszik), és igyon egy pohár tiszta, szénsavmentes vizet;
• vizeletürítés előtt tartózkodjon azoktól az ételektől, amelyek befolyásolják a vizelet savasságát (gyümölcsök, húsok, hüvelyesek, zöldek).

Fontos! A fertőzések PCR diagnosztikájában a legfontosabb követelmény a bioanyag tisztasága. Ezért próbáljon meg mindent megtenni, hogy kizárja a szövetek idegen DNS-sel való szennyeződését (ügyeljen a szállítótartály sterilitására, személyes higiéniára, tiszta ruhákra).

A PCR elemzés megfejtése

A fertőzésekre vonatkozó kvalitatív PCR-elemzés eredményeit táblázat formájában adjuk meg, ahol minden fertőző ágensnek megfelelő jelölése van:

• negatív eredmény (e faj kórokozója hiányzik);
• pozitív eredmény (a kórokozót észlelték).

A betegség tüneteinek hiánya nem feltétlenül felel meg a valós képnek, így valaki számára az elemzés eredményei váratlanok lesznek. Nem szabad elkeseredni: a fertőző ágens azonosítása a korai szakaszban a sikeres és gyors gyógyulás kulcsa.

A kvantitatív PCR-elemzés során felmérhető a vírusterhelés mértéke (tudja meg a vírus kópiák számát térfogategységenként). Az ilyen típusú vizsgálatnak köszönhetően lehetővé válik a fertőző folyamat lefolyásának intenzitásának meghatározása, valamint a kezelés hatékonyságának értékelése.

PCR elemzés: ár és feltételek

Az átlagos diagnosztikai idő 5-10 óra. Az eredményeket táblázat formájában a bioanyag mintavételét követő munkanapon adják ki.

A PCR elemzés kiválasztásakor az ár nem számít. Átlagosan a költségek összege nem lépi túl a hagyományos biokémiai vizsgálatok kereteit, és a genetikai vizsgálatok nagy részétől eltérően minden beteg számára elérhető.