अव्यक्त संक्रमणों के लिए पीसीआर कितना किया जाता है। पीसीआर विश्लेषण कैसे किया जाता है: प्रक्रिया का विवरण। अगर एक धब्बा दिया जाता है, तो यह आवश्यक है

विभिन्न प्रकार के संक्रामक रोगों का निदान - वायरल और बैक्टीरियल दोनों - का उद्देश्य प्रारंभिक चरण में रोगजनकों की पहचान करना है, जिससे समय पर और विशेष रूप से प्रभावी उपचार निर्धारित करना संभव हो जाता है। संक्रमण का पता लगाने का सबसे आधुनिक तरीका पीसीआर है, जो पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन के लिए है। इस पद्धति का सार क्या है और इसका उद्देश्य क्या है?

पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया का सार

किसी भी वायरस और सूक्ष्मजीव की संरचना में आरएनए या डीएनए अणु होते हैं। यह विशेषता है कि ये यौगिक प्रत्येक के लिए अद्वितीय हैं, और इसलिए, वयस्कों या बच्चों में रक्त परीक्षण में न्यूक्लिक एसिड को अलग करके, पूर्ण सटीकता के साथ निदान किया जा सकता है।

दुर्भाग्य से, रक्त के नमूनों और अन्य जैविक सामग्री दोनों में डीएनए की सांद्रता काफी कम है, इसलिए इसे सामान्य निदान विधियों द्वारा निर्धारित नहीं किया जा सकता है। इस समस्या से निपटने के लिए एक समय में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का आविष्कार किया गया था।

तो, इस विश्लेषण का सार रक्त के नमूने के विशिष्ट प्रसंस्करण में निहित है, जिसके कारण इसमें डीएनए अणुओं की एकाग्रता बढ़ जाती है, और भविष्य में उनके प्रकार की स्थापना से रोगज़नक़ के प्रकार की पहचान करना संभव हो जाता है, साथ ही ताकि सही निदान किया जा सके।

पीसीआर रक्त परीक्षण कैसे किया जाता है?

पीसीआर विधि केवल प्रयोगशाला स्थितियों में ही की जाती है। इसे करने के लिए विशेष एंजाइमों का उपयोग किया जाता है जो रोगी के आरएनए और डीएनए की संरचना को कई गुना बढ़ा देते हैं। इस मामले में, दृश्य अध्ययन करना संभव बनाने के लिए उनमें से कई का गठन किया जाना चाहिए। सर्वेक्षण के दौरान, ऐसी साइट की एक प्रति तैयार की जाती है, जो सभी प्रकार से आवश्यक शर्तों को पूरा करती है। आरएनए के लिए पीसीआर रक्त परीक्षण क्या है यह कई लोगों के लिए दिलचस्प है।

प्रयोगशाला में आवश्यक डेटाबेस उपलब्ध है, जो विभिन्न संक्रामक एजेंटों की सटीक संरचना को इंगित करता है। पीसीआर पद्धति का उपयोग न केवल रोगज़नक़ के प्रकार को स्थापित करने की अनुमति देता है, बल्कि इसके मात्रात्मक अनुपात की गणना भी करता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स में कुछ नवाचार भी शामिल हैं, जिनमें से निम्नलिखित हैं:

डीएनए के विभिन्न टुकड़ों का कनेक्शन;

उत्परिवर्तन का परिचय;

पितृत्व की स्थापना, आदि।

पीसीआर द्वारा किन बीमारियों का पता लगाया जाता है?

पीसीआर के लिए धन्यवाद, लगभग सभी जीवाणु और वायरल विकृति की पहचान करना संभव है। अनुसंधान के लिए, न केवल रक्त का उपयोग किया जा सकता है, बल्कि अन्य जैविक सामग्री, जैसे मूत्रमार्ग से और गर्भाशय ग्रीवा, लार और वीर्य से स्मीयर भी किया जा सकता है। विश्लेषण काफी जानकारीपूर्ण हो जाता है जब एक निश्चित बीमारी का प्रेरक एजेंट मानव रक्त में प्रवेश करता है। इसीलिए निम्नलिखित विकृति के लिए पीसीआर के लिए एक रक्त परीक्षण निर्धारित है:

वायरल हेपेटाइटिस प्रकार ए, बी, सी, डी और टीटी;

हर्पेटिक प्रकृति का संक्रमण (यानी, पहले, दूसरे और चौथे प्रकार के वायरस);

साइटोमेगालो वायरस;

एंटरोवायरल संक्रमण;

एचआईवी संक्रमण;

रूबेला;

लिस्टरियोसिस;

दाद;

संक्रामक मोनोन्यूक्लियोसिस;

टोक्सोप्लाज्मोसिस।

यदि हम अन्य बायोमैटिरियल्स का उपयोग करके पीसीआर के कार्यान्वयन को ध्यान में रखते हैं, तो निम्नलिखित को उन विकृति की सूची में जोड़ा जाना चाहिए जिन्हें इस पद्धति का उपयोग करके पता लगाया जा सकता है:

साल्मोनेलोसिस;

डिप्थीरिया;

गार्डनरेलोसिस;

माइकोप्लाज्मोसिस;

क्षय रोग;

ट्राइकोमोनिएसिस;

- पेपिलोमावायरस संक्रमण (मानव पेपिलोमावायरस के लगभग सौ अलग-अलग उपभेद)।

विशेष रूप से प्रासंगिकता अब TORCH संक्रमणों के लिए गर्भावस्था के दौरान एक पीसीआर रक्त परीक्षण बन गई है, जिसमें टोक्सोप्लाज़मोसिज़, साइटोमेगालोवायरस, दाद संक्रमण और रूबेला शामिल हैं। यह इस तथ्य के कारण है कि उपरोक्त रोग भ्रूण के विकास में असामान्यताएं पैदा कर सकते हैं।

पीसीआर के लाभ

इस पद्धति के क्या फायदे हैं?

• निदान की एक सौ प्रतिशत सटीकता: यदि रक्त में रोगज़नक़ के कम से कम कई डीएनए टुकड़े हैं, तो उन्हें पीसीआर प्रतिक्रिया द्वारा निर्धारित किया जाएगा, जिसका अर्थ है कि सही निदान किया जाएगा। यह इस पद्धति और अन्य नैदानिक ​​विधियों के बीच मुख्य अंतर है - एक पूर्ण रक्त गणना, एलिसा और अन्य।
• विशिष्टता। उदाहरण के लिए, बोरेलियोसिस के लिए पीसीआर रक्त परीक्षण के दौरान, गलत नकारात्मक या गलत सकारात्मक परिणाम जैसी कोई चीज नहीं होती है, जो इसे एंजाइम इम्यूनोएसे या एलिसा से अलग करती है।
• विश्लेषण एक ही बायोमटेरियल नमूने के आधार पर एक साथ कई रोगजनकों को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है, जिससे यह विधि रोगी के लिए सुविधाजनक हो जाती है, क्योंकि उसे कई बार विश्लेषण करने की आवश्यकता नहीं होती है।
• तेजी। विशेष पोषक माध्यम पर रोगज़नक़ को अलग करने और विकसित करने की कोई आवश्यकता नहीं है, जो कि बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के दौरान आवश्यक है। आप विश्लेषण के दिन तैयार परिणाम प्राप्त कर सकते हैं।

• हेपेटाइटिस के लिए पीसीआर रक्त परीक्षण के माध्यम से, उदाहरण के लिए, शरीर में रोग का एक छिपा हुआ प्रेरक एजेंट निर्धारित किया जाता है जब रोगी संक्रमण (एचआईवी या हेपेटाइटिस) के वाहक के रूप में कार्य करता है।
• सस्ती कीमत। एक रोगज़नक़ को निर्धारित करने के लिए पीसीआर विश्लेषण की लागत ढाई सौ से पांच सौ रूबल तक होती है। वायरस के लिए एक अर्ध-मात्रात्मक परीक्षा की लागत थोड़ी अधिक है - लगभग एक हजार रूबल।

विधि के नुकसान

पीसीआर एक उच्च तकनीक अनुसंधान पद्धति है जो प्रयोगशाला उपकरणों पर उच्च मांग रखती है। विश्लेषण के लिए आवश्यक रूप से एक जैविक फिल्टर होना चाहिए, क्योंकि हवा में हमेशा लार और त्वचा के कण होते हैं, जिनमें डीएनए अणु होते हैं। बायोमैटिरियल्स के साथ काम करने के लिए तकनीकी आवश्यकताओं का पालन करने में विफलता के कारण गलत निदान हो सकता है।

पीसीआर के लिए रक्त परीक्षण किसे कराना चाहिए?

सर्वे कोई भी ले सकता है। इसके लिए संकेत यौन संचारित संक्रमण (एचआईवी संक्रमण, बैक्टीरियल वेजिनोसिस, क्लैमाइडिया) का संदेह है। यदि असुरक्षित यौन संपर्क गलती से हुआ है, तो केवल पीसीआर ही प्रारंभिक अवस्था में एक सही निदान करना संभव बनाएगी, यदि कोई व्यक्ति किसी विशेष बीमारी से संक्रमित हो गया है।

टॉर्च-कॉम्प्लेक्स के लिए रक्त गर्भवती महिलाओं के साथ-साथ उन लोगों के लिए भी अनिवार्य है जो अभी एक बच्चे को गर्भ धारण करने की योजना बना रहे हैं।

हालांकि पीसीआर अधिकतम है प्रभावी तरीकाडायग्नोस्टिक्स, लेकिन आपको इसमें साइकिल चलाने की जरूरत नहीं है। किसी भी विकृति की उपस्थिति में व्यापक रूप से रोगी की जांच करना आवश्यक है। यदि पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन रोगज़नक़ को निर्धारित करना संभव बनाता है, तो एक सीरोलॉजिकल अध्ययन के लिए धन्यवाद, चिकित्सा की प्रभावशीलता के स्तर, रोगज़नक़ और दवाओं के लिए मानव शरीर की प्रतिक्रिया का आकलन करना संभव है। एक डॉक्टर द्वारा एचआईवी के लिए पीसीआर रक्त परीक्षण का आदेश दिया जाना चाहिए।

प्रक्रिया और तैयारी की विशेषताएं

जिन रोगियों की पीसीआर तकनीक का उपयोग करके जांच की जाती है, उन्हें सबसे विश्वसनीय परिणाम प्राप्त होता है। यह कहा जाना चाहिए कि इस मामले में त्रुटियों की संभावना लगभग पूरी तरह से समाप्त हो गई है। इस विश्लेषण के परिणाम भी काफी जल्दी तैयार किए जाते हैं, जिससे निदान का निर्धारण करना आसान हो जाता है और आवश्यक चिकित्सा प्रक्रियाओं को समय पर निर्धारित करना संभव हो जाता है।

पीसीआर पद्धति द्वारा प्राप्त परिणाम की विश्वसनीयता जांच के लिए जैविक सामग्री के सही वितरण द्वारा निर्धारित की जाती है। यह किसी भी चीज से दूषित नहीं होना चाहिए, अन्यथा परिणाम वस्तुनिष्ठ नहीं होगा।

• प्रक्रिया से एक दिन पहले संभोग पर प्रतिबंध;
• संक्रमण का पता लगाने के लिए रक्त परीक्षण सुबह और केवल खाली पेट किया जाना चाहिए;
• मूत्र भी एक बाँझ कंटेनर में सुबह में दिया जाता है।

प्रक्रिया के डेढ़ या दो दिन बाद, पीसीआर रक्त परीक्षण को डिकोड किया जाएगा और परिणाम तैयार है। ऐसे मामले भी हैं जब आप उसी दिन परिणाम प्राप्त कर सकते हैं।

विश्लेषण के लिए सामग्री कैसे तैयार करें?

अध्ययन को यथासंभव सफलतापूर्वक संचालित करने के लिए, रोगी से सामग्री को सही ढंग से लेना और इसकी सक्षम तैयारी करना आवश्यक है। यह एक सर्वविदित तथ्य है कि एक प्रयोगशाला अध्ययन में नमूना तैयार करने के दौरान बड़ी संख्या में त्रुटियां (लगभग सत्तर प्रतिशत तक) होती हैं।

वर्तमान में, कुछ प्रयोगशालाओं में, वैक्यूम सिस्टम का उपयोग करके रक्त लिया जाता है। एक ओर, वे रोगी को कम से कम घायल करते हैं, दूसरी ओर, वे सामग्री को लेना संभव बनाते हैं ताकि यह पर्यावरण या कर्मियों के संपर्क में न आए। यह जैविक सामग्री के संदूषण से बचाता है और विश्लेषण की विश्वसनीयता को अधिकतम करता है।

परिणामों को समझना

पीसीआर के लिए रक्त परीक्षण का परिणाम सकारात्मक या नकारात्मक हो सकता है। यदि रक्त परीक्षण नकारात्मक है, तो यह रोगी द्वारा सौंपी गई सामग्री में संक्रामक रोगजनकों की अनुपस्थिति को इंगित करता है। एक सकारात्मक विश्लेषण पुष्टि करता है कि रक्त में संक्रामक एजेंट हैं, जिसका अर्थ है कि रोगी के सबसे प्रभावी और उच्च गुणवत्ता वाले उपचार की आवश्यकता है।

प्राप्त परिणाम रोग के किसी भी लक्षण की अनुपस्थिति में भी सकारात्मक हो सकता है। यह या तो रोग प्रक्रिया की शुरुआत को इंगित करता है, या यह कि व्यक्ति एक वाहक है। यदि बाद का पता चला है, तो किसी चिकित्सा प्रक्रिया की आवश्यकता नहीं है। इस मामले में, रोगी को एक डॉक्टर द्वारा लगातार निगरानी रखने की सिफारिश की जाती है, जिसका अर्थ है, उदाहरण के लिए, दाद और अन्य संक्रमणों के लिए एक आवधिक पीसीआर रक्त परीक्षण।

ज्यादातर वे मूत्रमार्ग में, ग्रीवा नहर से बने स्क्रैपिंग में, लार में पाए जाते हैं। हालांकि, यह याद रखना चाहिए कि एक बीमार व्यक्ति पूरी तरह से स्वस्थ लोगों को संक्रमित करने में सक्षम है, भले ही वह इस बीमारी से परेशान न हो। यह जीर्ण हो सकता है। यह कहा जाना चाहिए कि पीसीआर का उपयोग करके सकारात्मक परिणाम प्राप्त करने के साथ, उचित चिकित्सा प्रक्रियाओं को निर्धारित करना आवश्यक है।

पीसीआर का मात्रात्मक लक्षण वर्णन

संक्रमण के लिए एक पीसीआर रक्त परीक्षण भी मात्रात्मक रूप से विशेषता है। इस तरह के परिणाम का मूल्यांकन केवल एक विशेषज्ञ द्वारा किया जा सकता है, क्योंकि यह विभिन्न संक्रमणों के लिए व्यक्तिगत है। यह मात्रात्मक विशेषता है जो डॉक्टर को इस तरह की रोग प्रक्रिया की गतिविधि की डिग्री निर्धारित करने, किसी विशेष बीमारी के विकास के सटीक चरण को निर्धारित करने की अनुमति देती है।

प्राप्त परिणामों के अध्ययन से विशेषज्ञ को उपयुक्त दवा चुनने में मदद मिलेगी, आवश्यक खुराक निर्दिष्ट करें।

नैदानिक ​​सटीकता

पीसीआर की तीन सबसे महत्वपूर्ण विशेषताएं हैं, अर्थात्:

संवेदनशीलता;

विशिष्टता;

शुद्धता।

पीसीआर का उपयोग करके संक्रमण का निदान शरीर में संक्रामक एजेंटों का पता लगाने की एक उच्च संभावना की विशेषता है। रक्त और अन्य तरल पदार्थों का विश्लेषण अत्यधिक विशिष्ट है। उसके लिए धन्यवाद, आप आसानी से एक विशिष्ट संक्रामक प्रक्रिया का निर्धारण कर सकते हैं, उदाहरण के लिए, हेपेटाइटिस या एचआईवी के लिए एक पीसीआर रक्त परीक्षण। साथ ही, पीसीआर डायग्नोस्टिक्स अत्यधिक संवेदनशील है। यदि परीक्षण सामग्री में कम से कम संक्रामक एजेंट हैं, तो पीसीआर पद्धति हमेशा सकारात्मक होगी।

बहुत ही दुर्लभ मामलों में, एक गलत सकारात्मक परिणाम प्राप्त किया जा सकता है। संक्रमण के अभाव में, तदनुसार, यह नकारात्मक होगा।

गुप्त रोगों की पहचान

यदि किसी व्यक्ति को एसटीआई होने का संदेह है, तो छिपे हुए संक्रमणों को निर्धारित करने के लिए एक रक्त परीक्षण निर्धारित किया जाता है। जननांग क्षेत्र के किसी भी रोग का निर्धारण केवल रोगी की जांच करके ही किया जा सकता है।

निम्नलिखित बीमारियों में पाठ्यक्रम की एक गुप्त प्रकृति हो सकती है:

• यूरियाप्लाज्मोसिस;
• क्लैमाइडिया;
• माइकोप्लाज्मोसिस;
• दाद;
• सूजाक;
• गार्डनरेलोसिस।

ये संक्रमण काफी सामान्य और बहुत कपटी हैं। रोग की शुरुआत में, उनके पास अच्छी तरह से परिभाषित लक्षण नहीं होते हैं, इसलिए रोगी किसी विशेषज्ञ के पास नहीं जाते हैं। क्लैमाइडिया, बोरेलिओसिस और अन्य संक्रमणों के लिए समय पर पीसीआर रक्त परीक्षण के परिणाम डॉक्टर को एक प्रभावी उपचार निर्धारित करने में मदद करेंगे।

एसटीआई प्रजनन प्रणाली पर प्रतिकूल प्रभाव डालते हैं। वे बांझपन या भ्रूण में दोषों की उपस्थिति का कारण बन सकते हैं। इसलिए प्रेग्नेंसी प्लान करने से पहले पीसीआर टेस्ट करवाना जरूरी है।

विषय

जो लोग नए निदान विधियों में रुचि रखते हैं, उन्हें यह पता लगाना चाहिए कि पीसीआर पद्धति क्या है। क्षेत्र में आधुनिक तकनीकी क्षमताएं प्रयोगशाला अनुसंधानप्रारंभिक अवस्था में कई बीमारियों का पता लगाने का अवसर प्रदान करते हैं। पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) को वर्तमान में सबसे सटीक और नई विधि माना जाता है।

पीसीआर विश्लेषण

पीसीआर विश्लेषण - यह क्या है? यह विधि आणविक जीव विज्ञान के सिद्धांतों का उपयोग करती है। सामग्री का अध्ययन करने के लिए, विशेष एंजाइमों का उपयोग किया जाता है जो बार-बार और जल्दी से डीएनए, रोगजनकों के आरएनए टुकड़े की नकल करते हैं। मौजूद अलग - अलग प्रकारअध्ययन की जा रही सामग्री (रक्त, मूत्र, मल, आदि) के आधार पर पीसीआर विश्लेषण। प्रसंस्करण के बाद, प्रयोगशाला कर्मचारी डेटाबेस के साथ परिणाम की तुलना करते हैं, एकाग्रता, रोगज़नक़ के प्रकार की पहचान करते हैं।

पीसीआर विश्लेषण को एक विशेष एम्पलीफायर (डिवाइस) में रखा जाता है जो बायोमैटेरियल के साथ टेस्ट ट्यूब को गर्म और ठंडा करता है। टुकड़े प्रतिकृति के लिए तापमान परिवर्तन की आवश्यकता है। परिणाम की सटीकता तापमान शासन की सटीकता पर निर्भर करेगी। पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन विधि पहचानने में मदद करती है:

• संक्रामक मोनोन्यूक्लियोसिस;
• साइटोमेगालोवायरस संक्रमण;
• वायरल हेपेटाइटिस जी, सी, बी, ए;
• यौन संचारित संक्रमण / रोग (एसटीआई / एसटीडी): गार्डनरेलोसिस, ट्राइकोमोनिएसिस, यूरियाप्लाज्मोसिस;
• हर्पेटिक संक्रमण;
• ऑन्कोजेनिक वायरस;
• लिस्टरियोसिस;
• हेलिकोबैक्टर संक्रमण;
• टिक-जनित एन्सेफलाइटिस, बोरेलिओसिस;
• तपेदिक;
• कैंडिडिआसिस

खून

फिलहाल, तकनीक की नवीनता के कारण, पीसीआर रक्त परीक्षण की कीमत अभी भी अधिक है। जैव सामग्री की तैयारी के लिए कुछ आवश्यकताओं का पालन करना आवश्यक नहीं है। यहां तक ​​कि शारीरिक गतिविधि, तनाव, आहार में परिवर्तन, संरचना में परिवर्तन के कारण भी अध्ययन के परिणाम को प्रभावित नहीं करते हैं। एक पीसीआर रक्त परीक्षण केवल जीवाणुरोधी एजेंटों के सेवन को खराब कर सकता है, इसलिए इसे लेने से पहले, उपचार और परीक्षण के बीच रुकना आवश्यक है।

एक वायरल या असामान्य अभिव्यक्ति के साथ पुरानी, ​​​​तीव्र संक्रामक विकृति के निदान के लिए पीसीआर रक्त परीक्षण सबसे आम विकल्प है। सीरोलॉजिकल अनुसंधान विधियों को करने में एक निश्चित कठिनाई होती है - एक रोगज़नक़ की उपस्थिति मानव शरीर में एंटीबॉडी की उपस्थिति से निर्धारित होती है। परिणाम गलत नकारात्मक हो सकता है यदि रोगी की स्थिति ने उनके विकास के लिए समय नहीं दिया।

धब्बा

स्त्री रोग के क्षेत्र में, संक्रामक सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति का अध्ययन करने के लिए पीसीआर स्मीयर विश्लेषण का उपयोग किया जाता है। सामग्री के साथ काम करना रक्त के समान सिद्धांत के अनुसार किया जाता है: इसे आसानी से पहचानने के लिए रोगज़नक़ के डीएनए अंशों में कई वृद्धि। यह एक महिला में छिपे संक्रमण का पता लगाने में भी मदद करता है। विश्लेषण के लिए विभिन्न जैविक तरल पदार्थ लिए जा सकते हैं: लार, थूक, मूत्र, रक्त। स्त्री रोग में, निर्धारण की सटीकता के लिए, ग्रीवा नहर से योनि म्यूकोसा से एक स्मीयर का अधिक बार उपयोग किया जाता है।

पीसीआर के लिए कुछ संकेत हैं। अक्सर एंटीबायोटिक-प्रतिरोधी प्रकार के रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए इसे करने की आवश्यकता होती है। महिलाओं में, इस पद्धति द्वारा निदान के लिए मुख्य संकेत हैं:

• एक गर्भावस्था जो मुश्किल है;
• एसटीआई का तीव्र चरण;
• यदि एसटीआई के पुराने चरण में संक्रमण का संदेह है;
• बांझपन के कारणों की खोज।

कला

संक्रमण का पता लगाने के लिए, डॉक्टर द्वारा एक फेकल पीसीआर परीक्षण निर्धारित किया जा सकता है। परीक्षण के बाद सबसे विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए, जैव सामग्री लेने से पहले निम्नलिखित नियमों का पालन करना आवश्यक है:

• कुछ दिनों के लिए जुलाब लेना बंद कर दें: तेल, सपोसिटरी;
• उन दवाओं को बाहर करें जो मल को एक विशिष्ट रंग देती हैं, उदाहरण के लिए, लोहे की सामग्री के साथ।

नमूना लेने के लिए, एक बाँझ छड़ी और कंटेनर का उपयोग करें। उन्हें अतिरिक्त रूप से पोंछने के लिए कुछ, कुल्ला आवश्यक नहीं है। सामग्री एकत्र करते समय, सावधान रहें कि कंटेनर की भीतरी दीवारों को अपने हाथ से न छुएं। सुनिश्चित करें कि मल में मूत्र की कोई अशुद्धियाँ नहीं हैं, आप मल त्याग (एनिमा) के लिए अतिरिक्त सहायता का उपयोग नहीं कर सकते हैं। आपको डिलीवरी के दिन सामग्री एकत्र करने की आवश्यकता है, कंटेनर की मात्रा का 1/3 पर्याप्त है। इस निदान पद्धति के निम्नलिखित फायदे हैं:

मूत्र

यदि आवश्यक हो, तो डॉक्टर परीक्षण के लिए मूत्र ले सकते हैं। उच्च सटीकता किसी भी जैविक तरल पदार्थ के साथ काम करने की संभावना को खोलती है जिससे वायरस डीएनए निकालना संभव है। पीसीआर मूत्र परीक्षण पास करने के लिए, आपको सामग्री लेने से पहले निम्नलिखित प्रतिबंधों का पालन करना होगा:

• प्रक्रिया से कम से कम 1 दिन पहले, संभोग बंद कर दें;
• प्रसव से 3 सप्ताह पहले, कोई भी जीवाणुरोधी उपचार पूरा किया जाना चाहिए, क्योंकि दवाएं तस्वीर को धुंधला कर देंगी;
• आपको खाली पेट परीक्षण करने की आवश्यकता है (तरल भी निषिद्ध है);
• आपको सामग्री का पहला सुबह का हिस्सा लेने की जरूरत है।

पीसीआर परीक्षण के परिणाम

ऊपर से यह स्पष्ट है कि पीसीआर विश्लेषण क्या है और इस शोध पद्धति के स्पष्ट लाभ दिखाई दे रहे हैं। इस नैदानिक ​​​​प्रक्रिया का एक और प्लस परिणामों को समझने में आसानी है। यह देखते हुए कि कितना पीसीआर विश्लेषण किया जाता है (प्रक्रिया में लगभग 5 घंटे लगते हैं, लेकिन प्रयोगशाला 1-2 दिनों में डेटा जारी करती है), यह निदान पद्धति कई संक्रमणों को निर्धारित करने के लिए सबसे अच्छा विकल्प बन जाती है। परिणामों के आधार पर, आपका डॉक्टर आपको बता सकता है कि परीक्षण:

1. नकारात्मक - अध्ययन की गई सामग्री में वांछित रोगज़नक़ नहीं था।
2. सकारात्मक - रोगजनक के आरएनए, डीएनए पाए गए।

कभी-कभी सूक्ष्मजीवों का मात्रात्मक निर्धारण किया जाता है। यह उन रोगों के लिए आवश्यक है जो अवसरवादी रोगजनकों का कारण बनते हैं। इन विषाणुओं की ख़ासियत यह है कि वे केवल अधिक मात्रा में दिखाई देते हैं और पारंपरिक अध्ययनों से इनका पता लगाना बेहद मुश्किल है। वायरल संक्रमण, उदाहरण के लिए, हेपेटाइटिस, एचआईवी का प्रभावी ढंग से इलाज करने के लिए चिकित्सीय रणनीति के चुनाव के लिए यह कारक महत्वपूर्ण है।

12 संक्रमणों के लिए

संक्रमण के निदान के लिए पीसीआर क्या है और यह कितना प्रभावी है, इसे पूरी तरह से समझने के लिए, आपको यह जानना होगा कि यह 12 रोगजनकों को अलग करने में सक्षम है। पाठ केवल प्रयोगशाला स्थितियों में किया जाता है। शोध के लिए विशेष एंजाइमों का उपयोग किया जाता है, जो वायरस के आरएनए, डीएनए अंशों की मात्रा को कई गुना बढ़ा देते हैं। 12 संक्रमणों के लिए पीसीआर विश्लेषण से पता चल सकता है:

• माइकोबैक्टेरियम ट्यूबरक्यूलोसिस;
• साइटोमेगालो वायरस;
• हेपेटाइटिस सी, जी, बी, ए;
• हरपीज 1, 2 प्रकार;
• एपस्टीन-बार वायरस (संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस);
• संक्रमण जो यौन संचारित होते हैं, उदाहरण के लिए, क्लैमाइडिया;
• लिस्टरियोसिस;
• कैंडिडा संक्रमण;
• हैलीकॉप्टर पायलॉरी;
• बोरेलियोसिस, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस।

हेपेटाइटिस सी के लिए

यह निदान पद्धति रक्त में वायरस की उपस्थिति को निर्धारित करने में मदद करती है। इससे डॉक्टरों को इसकी मौजूदगी या अनुपस्थिति के बारे में बात करने का मौका मिलता है। हेपेटाइटिस सी के लिए दो प्रकार के पीसीआर विश्लेषण हैं: गुणात्मक और मात्रात्मक। पहला विकल्प केवल इसकी उपस्थिति को इंगित करता है और इसे "पता लगाया गया" / "पता नहीं लगाया गया" कहा जा सकता है। इस प्रकार के परीक्षण में 10-500 IU/ml की संवेदनशीलता होती है। इससे पता चलता है कि शरीर में रोगज़नक़ की कम सामग्री के साथ, विश्लेषण "पता नहीं" होगा।

मात्रात्मक विश्लेषण अधिक सटीक है और रक्त में संक्रमण की एकाग्रता दिखाएगा। इस सूचक को "वायरल लोड" के रूप में नामित किया गया है, जिसे प्रति विशिष्ट रक्त मात्रा में वायरल आरएनए की मात्रा में मापा जाता है। विभिन्न प्रयोगशालाओं में डिक्रिप्शन भिन्न हो सकते हैं। IU / ml में मापने के अलावा, "कॉपी" इकाइयों का उपयोग किया जाता है। आप सूत्र का उपयोग करके प्रति IU प्रतियों की पुनर्गणना कर सकते हैं: 1 IU = 4 प्रतियाँ। यदि प्रतिलेख में वायरस की उपस्थिति का मान 800,000 IU / ml (या 800 * 103) से अधिक है, तो यह रोगज़नक़ की उच्च सामग्री को इंगित करता है।

तपेदिक के लिए

परीक्षण सुबह किया जाना चाहिए। रात के दौरान बनने वाले सभी थूक को पेट से बाहर निकलने से रोकने के लिए यह महत्वपूर्ण है। तपेदिक के लिए पीसीआर विश्लेषण एलिसा, मंटौक्स, टोमोग्राफी जितना ही महत्वपूर्ण है। परीक्षण माइकोबैक्टीरिया, मूत्र की स्थिति, कुल इम्युनोग्लोबुलिन, ईएसआर की उपस्थिति की पहचान करने और इस समय फेफड़ों की स्थिति निर्धारित करने में मदद करता है। पीसीआर विश्लेषण में परिणाम प्राप्त करने की सटीकता के लिए, इसे निम्नलिखित नियमों के अनुपालन में करना आवश्यक है:

1. बुवाई 3 बार की जाती है, लेकिन पेट की सामग्री की पूरी आकांक्षा केवल एक अस्पताल में की जानी चाहिए।
2. निदान के 50% से कम में पेट में मौजूदा द्रव्यमान की संस्कृति द्वारा माइकोबैक्टीरिया का पता लगाता है। इष्टतम स्थिति प्राप्त होने पर भी, इसके बजाय अल्ट्रासाउंड की सिफारिश की जाती है।
3. यहां तक ​​​​कि एक नकारात्मक परिणाम के साथ, ईएसआर, इम्युनोग्लोबुलिन या अन्य संकेतकों में बदलाव के साथ तपेदिक विकसित होने की संभावना को पूरी तरह से बाहर नहीं किया जा सकता है।
4. पीसीआर संस्कृति रोग संबंधी स्थितियों के प्रति कम संवेदनशील होती है यदि इसे ब्रोंकोस्कोपिक परीक्षा के भाग के रूप में प्राप्त किया जाता है, जो एक बच्चे में टीबी के संदेह को बाहर करता है।

एचआईवी के लिए

कई लोगों के लिए, इस निदान को मौत की सजा माना जाता है। इस कारण से, लगातार संभोग के बाद, एक व्यक्ति उन संकेतों के प्रति अधिक चौकस हो जाता है जो उसका शरीर देता है (और कभी-कभी उनके साथ आता है)। इस बीमारी की पुष्टि या खंडन प्राप्त करने का सबसे विश्वसनीय विकल्प एचआईवी के लिए एक पीसीआर परीक्षण है। परीक्षण का उपयोग निम्नलिखित संभावित स्वास्थ्य समस्याओं की पहचान करने के लिए किया जा सकता है:

1. सेरोनिगेटिव हॉर्स की अवधि के दौरान एचआईवी की उपस्थिति का खंडन/पुष्टि।
2. HIV-1, HIV-2 के जीनोटाइप का निर्धारण।
3. इम्युनोब्लॉट के संदिग्ध परिणाम के साथ रोग प्रक्रिया के विवरण का स्पष्टीकरण।
4. रक्त आधान के बाद संक्रमण।
5. वाहक माताओं से पैदा हुए बच्चों में एचआईवी की स्थिति का निर्धारण।
6. शरीर के वायरल लोड की निगरानी स्थापित करने में मदद करता है।

एचपीवी के लिए

पैपिलोमा वायरस का पता किसी भी व्यक्ति में लगाया जा सकता है, लंबे समय तक यह अव्यक्त अवस्था में हो सकता है। विकास प्रतिरक्षा प्रणाली के कमजोर होने, तनाव या भावनात्मक विस्फोट को भड़काता है। एचपीवी के लिए पीसीआर विश्लेषण रक्त में वायरस की एकाग्रता को निर्धारित करने में मदद करता है। इस कारण से, गुणात्मक के बजाय मात्रात्मक निर्धारण करने की सिफारिश की जाती है। ये डेटा संक्रमण की घातक प्रकृति के विकास की संभावना का अनुमान लगाने में मदद करेंगे।

एचपीवी की उपस्थिति के निदान की तकनीक सामग्री से वायरस डीएनए को अलग करने के लिए पीसीआर की मुख्य संपत्ति पर आधारित है। परीक्षण की उच्च संवेदनशीलता के कारण, बैक्टीरिया की एक छोटी मात्रा का भी पता लगाया जाएगा। मात्रात्मक अनुसंधान डॉक्टरों को भविष्य के लिए रोग का निदान करने के लिए, रोग के खतरे की डिग्री निर्धारित करने का अवसर देता है। यह निदान उन सभी पुरुषों और महिलाओं के लिए अनिवार्य है, जिन्होंने खुद को मौसा के साथ पाया है। मात्रात्मक पीसीआर विश्लेषण यह निर्धारित करने में मदद करेगा कि एचपीवी के विकास का कारण क्या है: प्रतिरक्षा में अस्थायी कमी या पुरानी बीमारी।

दाद के लिए

सूक्ष्म जीव विज्ञान में इस प्रकार का निदान उच्च सटीकता के साथ दाद के लिए पीसीआर विश्लेषण करने में मदद करता है। वायरस के डीएनए अंशों की नकल तभी होगी जब सामग्री में वांछित जीन मौजूद हो। इस मामले में, आचरण के परिणामों के आधार पर परीक्षण रोगज़नक़ की उपस्थिति या अनुपस्थिति का संकेत दे सकता है। रक्त में कम सांद्रता पर भी इसका पता लगाना संभव होगा।

पीसीआर विश्लेषण का एक और प्लस यह है कि यह संक्रमण के तुरंत बाद, नैदानिक ​​लक्षणों की शुरुआत से पहले दाद वायरस के संक्रमण का पता लगा सकता है। दाद के प्रकार (1 या 2) को निर्धारित करना संभव है, विश्लेषण पास करने के लिए किसी विशेष तैयारी की आवश्यकता नहीं है, लेकिन डॉक्टर सलाह देते हैं कि आप रक्त लेने से पहले मना कर दें:

• तला हुआ;
• तीव्र;
• शराब;
• मोटे।

गर्भावस्था के दौरान

बच्चे को जन्म देते समय, महिला की स्थिति को ध्यान में रखने के लिए इस अध्ययन का संचालन करना बहुत महत्वपूर्ण है। गर्भावस्था के दौरान पीसीआर विश्लेषण विभिन्न प्रकार की बीमारियों की उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए सबसे प्रभावी तरीकों की सूची में शामिल है। न केवल विकृति की पहचान करने के लिए, बल्कि गर्भाशय में बच्चे के संक्रमण की संभावना को निर्धारित करने के लिए भी एक परीक्षण करना आवश्यक है। केवल पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के लिए धन्यवाद, प्रगति की डिग्री, मां के गर्भ के अंदर कई संक्रमणों के विकास की पहचान करना संभव हो गया।

पीसीआर विश्लेषण की डिलीवरी

यदि आप सोच रहे हैं कि पीसीआर विश्लेषण कैसे लिया जाता है, तो प्रत्येक व्यक्तिगत मामले पर बायोमैटेरियल के प्रकार को ध्यान में रखते हुए विचार किया जाना चाहिए। उदाहरण के लिए, स्क्रैपिंग, स्मीयर या रक्त के नमूने की अपनी विशेषताएं हैं।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) किसी भी स्तर (तीव्र या पुरानी) में वंशानुगत विकृति, संक्रमण, वायरल रोगों के निदान के क्षेत्र में एक उच्च-सटीक विधि है, साथ ही - प्रारंभिक चरण में - रोग की स्पष्ट अभिव्यक्तियों से पहले पहचान करके रोगी से प्राप्त नमूनों में उनके डीएनए, आरएनए, जो आनुवंशिक सामग्री हैं, पर आधारित रोगजनक हैं। और आज हम पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) विधियों के सार, नैदानिक ​​चरणों और सिद्धांतों के साथ-साथ इसकी लागत के बारे में बात करेंगे।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन क्या है

विश्लेषण का आधार प्रवर्धन (दोगुना) है - डीएनए (डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड) के एक छोटे खंड से कई प्रतियों का निर्माण, जो मानव आनुवंशिक परिसर का प्रतिनिधित्व करता है। अध्ययन के लिए बहुत कम मात्रा में शारीरिक पदार्थों (थूक, मल, उपकला के स्क्रैपिंग, प्रोस्टेट रस, रक्त, वीर्य, ​​एमनियोटिक द्रव, बलगम, अपरा ऊतक, मूत्र, लार, फुफ्फुस द्रव, मस्तिष्कमेरु द्रव) की आवश्यकता होती है। इस मामले में, उदाहरण के लिए, एक रोगी के मूत्रजननांगी पथ में एक भी हानिकारक सूक्ष्म जीव का पता लगाया जा सकता है।

पीसीआर तकनीक (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) अमेरिकी वैज्ञानिक के. मुलिस द्वारा विकसित की गई थी, जिन्हें 1993 में नोबेल पुरस्कार मिला था।

सक्रिय रूप से उपयोग किया जाता है:

• संक्रमण के प्रारंभिक निदान में, आनुवंशिक ;;
• अनुसंधान के लिए डीएनए की बहुत कम मात्रा की उपस्थिति में फोरेंसिक चिकित्सा परीक्षा में;
• पशु चिकित्सा, फार्मास्यूटिकल्स, जीव विज्ञान, आणविक आनुवंशिकी में;
• डीएनए द्वारा किसी व्यक्ति की पहचान के लिए, पितृत्व की पुष्टि;
• जीवाश्म विज्ञान, नृविज्ञान, पारिस्थितिकी (उत्पादों की गुणवत्ता, पर्यावरणीय कारकों पर नज़र रखने) में।

यह वीडियो आपको बताएगा कि पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन क्या है:

यह किसे सौंपा गया है

संक्रामक रोगों के निदान में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन उच्च सटीकता और विश्वसनीयता के सबसे विश्वसनीय तरीकों में से एक है। उदाहरण के लिए, क्लैमाइडिया और कई अन्य रोगजनकों के लिए पीसीआर विश्लेषण की विश्वसनीयता 100% (पूर्ण) तक पहुंचती है। सबसे अधिक बार, पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन प्रक्रिया उन रोगियों के लिए निर्धारित की जाती है, जिन्हें निदान करते समय, एक विशिष्ट रोगज़नक़ की पहचान करने में कठिनाई होती है।

प्रयोगशाला पीसीआर परीक्षण का उपयोग किया जाता है:

• रोगजनकों का पता लगाने के लिए जो मूत्र और जननांग अंगों के संक्रमण का कारण बनते हैं, जिन्हें फसलों या प्रतिरक्षात्मक तरीकों से पहचानना मुश्किल होता है;
• प्रारंभिक विश्लेषण के सकारात्मक, लेकिन संदिग्ध परिणाम के मामले में प्रारंभिक चरण में एचआईवी के पुन: निदान के लिए (उदाहरण के लिए, एड्स से संक्रमित माता-पिता से नवजात शिशुओं में);
• एक प्रारंभिक चरण में एक ऑन्कोलॉजिकल रोग स्थापित करने के लिए (ऑन्कोजीन म्यूटेशन का अध्ययन) और एक विशेष रोगी के लिए उपचार के व्यक्तिगत सुधार के लिए;
• वंशानुगत विकृति का शीघ्र पता लगाने और संभावित उपचार के उद्देश्य से।

इसलिए, भविष्य के माता-पिता का यह पता लगाने के लिए परीक्षण किया जाता है कि क्या वे आनुवंशिक विकृति के वाहक हैं; बच्चों में, पीसीआर एक वंशानुगत बीमारी के संपर्क की संभावना को निर्धारित करता है।

• भ्रूण की असामान्यताओं का पता लगाने के लिए प्रारंभिक अवधिगर्भ (संभावित उत्परिवर्तन के लिए बढ़ते भ्रूण की व्यक्तिगत कोशिकाओं की जांच की जाती है);
• अंग प्रत्यारोपण से पहले रोगियों में - "ऊतक टाइपिंग" (ऊतक संगतता का निर्धारण) के लिए;
• दान किए गए रक्त में खतरनाक रोगजनक जीवों का पता लगाने के लिए;
• नवजात शिशुओं में - अव्यक्त संक्रमणों का पता लगाने के लिए;
• एंटीवायरल और रोगाणुरोधी उपचार के परिणामों का मूल्यांकन करने के लिए।

इस प्रक्रिया से क्यों गुजरते हैं?

चूंकि पीसीआर एक अत्यधिक प्रभावी निदान पद्धति है जो लगभग 100% परिणाम देती है, इस प्रक्रिया का उपयोग किया जाता है:

• अंतिम निदान की पुष्टि या बहिष्करण करने के लिए;
• चिकित्सा की प्रभावशीलता का त्वरित मूल्यांकन।

कई मामलों में, पीसीआर एक विकासशील बीमारी का पता लगाने के लिए एकमात्र संभावित परीक्षण है यदि अन्य बैक्टीरियोलॉजिकल, इम्यूनोलॉजिकल और वायरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक तरीके बेकार हैं।

• संक्रमण के तुरंत बाद और बीमारी के लक्षण दिखने से पहले पीसीआर द्वारा वायरस का पता लगाया जाता है। वायरस का शीघ्र पता लगाने से शीघ्र उपचार की अनुमति मिलती है।
• तथाकथित "वायरल लोड" (या शरीर में वायरस की संख्या) भी मात्रात्मक डीएनए विश्लेषण द्वारा निर्धारित किया जाता है।
• विशिष्ट रोगजनक (जैसे कोच के ट्यूबरकल बेसिलस) कठिन होते हैं और संस्कृति में बहुत अधिक समय लेते हैं। पीसीआर विश्लेषण आपको उन नमूनों में रोगजनकों (जीवित और मृत) की न्यूनतम संख्या को जल्दी से पहचानने की अनुमति देता है जो अनुसंधान के लिए सुविधाजनक हैं।

विस्तृत रोगज़नक़ डीएनए विश्लेषण का उपयोग किया जाता है:

• विशिष्ट प्रकार के एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति इसकी संवेदनशीलता निर्धारित करने के लिए, जो आपको तुरंत उपचार शुरू करने की अनुमति देता है;
• घरेलू, जंगली जानवरों में महामारी के प्रसार को नियंत्रित करने के लिए;
• नई संक्रामक माइक्रोबियल प्रजातियों और रोगजनक उपप्रकारों की पहचान और निगरानी करने के लिए जिन्होंने पिछली महामारियों को बढ़ावा दिया है।

निदान के प्रकार

मानक विधि

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का विश्लेषण विशेष प्राइमर एंजाइमों का उपयोग करके एक विशिष्ट डीएनए और आरएनए टुकड़े के कई प्रवर्धन (दोगुने) के आधार पर किया जाता है। नकल की श्रृंखला के परिणामस्वरूप अनुसंधान के लिए पर्याप्त मात्रा में सामग्री प्राप्त होती है।

प्रक्रिया के दौरान, केवल वांछित टुकड़ा कॉपी किया जाता है (निर्दिष्ट विशिष्ट शर्तों के अनुरूप) भले ही वह वास्तव में नमूने में मौजूद हो।

उपयोगी आरेखों वाला यह विस्तृत वीडियो बताता है कि पीसीआर कैसे काम करता है:

अन्य तरीके

• रीयल-टाइम पीसीआर. इस प्रकार के अध्ययन में किसी दिए गए डीएनए टुकड़े की पहचान की प्रक्रिया प्रत्येक चक्र के बाद शुरू होती है, न कि 30-40 चक्रों की पूरी श्रृंखला के पूरा होने के बाद। इस प्रकार का अध्ययन आपको शरीर में एक रोगज़नक़ (वायरस या सूक्ष्म जीव) की मात्रा के बारे में जानकारी प्राप्त करने की अनुमति देता है, अर्थात मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए।
• आरटी-पीसीआर (रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन मोड). इस परख का उपयोग वायरस का पता लगाने के लिए सिंगल स्ट्रैंड आरएनए को खोजने के लिए किया जाता है जिसका आनुवंशिक आधार आरएनए है (उदाहरण के लिए, हेपेटाइटिस सी वायरस, इम्यूनोडेफिशियेंसी वायरस)। इस तरह के एक अध्ययन में, एक विशेष एंजाइम का उपयोग किया जाता है - रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और एक निश्चित प्राइमर, और आरएनए के आधार पर एकल-फंसे डीएनए का निर्माण किया जाता है। फिर इस स्ट्रैंड से दूसरा डीएनए स्ट्रैंड बहाल किया जाता है और मानक प्रक्रिया की जाती है।

धारण के लिए संकेत

पीसीआर प्रक्रिया का उपयोग संक्रामक रोगों, नवजात विज्ञान, प्रसूति, बाल रोग, मूत्रविज्ञान, स्त्री रोग, वेनेरोलॉजी, न्यूरोलॉजी, नेफ्रोलॉजी, नेत्र विज्ञान के क्लिनिक में किया जाता है।

विश्लेषण के उद्देश्य के लिए संकेत:

• वंशानुगत विकृति की संभावना वाले बच्चे में आनुवंशिक असामान्यताओं के विकास के जोखिम का स्पष्टीकरण;
• गर्भावस्था की योजना बनाते समय माता-पिता दोनों का निदान करना या चल रही गर्भावस्था के दौरान मां की गंभीर स्थिति का निदान करना;
• गर्भाधान में कठिनाइयाँ, बांझपन के कारणों की पहचान;
• तीव्र चरण में यौन संक्रमण का संदेह और पुराने में उनके संक्रमण के लक्षणों के साथ;
• अस्पष्ट उत्पत्ति की भड़काऊ प्रक्रियाओं के कारणों का पता लगाना;
• असुरक्षित आकस्मिक और लगातार यौन संपर्क;
• विशिष्ट एंटीबायोटिक दवाओं के लिए एक रोगजनक सूक्ष्मजीव की संवेदनशीलता का निर्धारण;
• संदिग्ध अव्यक्त संक्रमण वाले रोगियों को प्रकट लक्षणों (प्रीक्लिनिकल डायग्नोसिस) के विकास से पहले रोगजनकों का पता लगाने के लिए;
• रोगियों को बीमारी के बाद ठीक होने की पुष्टि करने के लिए (पूर्वव्यापी निदान);

निदान का उपयोग तब भी किया जाता है जब निम्नलिखित रोगजनकों की सही पहचान करना आवश्यक हो:

• हेपेटाइटिस वायरस (ए बी सी जी), मानव इम्युनोडेफिशिएंसी, साइटोमेगालोवायरस;
• विब्रियो हैजा;
• हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस, हर्पेटिफॉर्म प्रजातियां;
• रेट्रो - एडेनो - और राइनोवायरस;
• रूबेला वायरस, एपस्टीन-बार, वैरिसेला (ज़ोस्टर - वायरस);
• परवो और पिकोर्नवायरस;
• जीवाणु हेलिकोबैक्टर पाइलोरी;
• लेगियोनेला, एस्चेरिचिया कोलाई के रोगजनक प्रकार;
• स्टेफिलोकोकस ऑरियस;
• रोगज़नक़;
• क्लोस्ट्रीडिया, डिप्थीरिया और हीमोफिलस इन्फ्लुएंजा;

इसका उपयोग संक्रमणों को निर्धारित करने के लिए भी किया जाता है:

• संक्रामक मोनोन्यूक्लियोसिस;
• बोरेलिओसिस, लिस्टरियोसिस, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस;
• कैंडिडा कवक के कारण कैंडिडिआसिस;
• यौन संक्रमण - ट्राइकोमोनिएसिस, यूरियाप्लाज्मोसिस, पेल ट्रेपोनिमा, गार्डनरेलोसिस, गोनोरिया, मायकोप्लास्मोसिस, क्लैमाइडिया;
• तपेदिक।

धारण करने के लिए मतभेद

चूंकि प्रक्रिया रोगी के साथ शरीर पर किसी भी प्रभाव के बिना नहीं की जाती है, लेकिन अनुसंधान के लिए ली गई जैविक सामग्री के साथ, संभावित खतरे की अनुपस्थिति के कारण पीसीआर के लिए कोई मतभेद नहीं हैं।

हालांकि, गर्भाशय की ग्रीवा नहर से बायोमटेरियल का नमूना कोल्पोस्कोपी प्रक्रिया के बाद नहीं किया जाता है। विश्लेषण के लिए स्मीयर, स्क्रैपिंग के वितरण की अनुमति मासिक धर्म की समाप्ति के 4 से 6 दिनों के बाद और निर्वहन की पूर्ण समाप्ति के बाद ही दी जाती है।

क्या तरीका सुरक्षित है

प्रयोगशाला में उसके बायोमटेरियल के पृथक अध्ययन में रोगी पर कोई नकारात्मक प्रभाव संभव नहीं है।

प्रक्रिया की तैयारी (विश्लेषण के लिए जैविक पदार्थों की डिलीवरी)

पीसीआर विश्लेषण के लिए एक नमूने के रूप में, जिसमें एक विदेशी रोगज़नक़ के डीएनए का पता लगाया जाता है, किसी भी जैविक तरल पदार्थ, ऊतक, शरीर के स्राव का उपयोग किया जाता है। परीक्षण पदार्थ का नमूना शिरा से रक्त लेने, स्वरयंत्र, नाक गुहा, मूत्रमार्ग, फुफ्फुस गुहा, गर्भाशय ग्रीवा से स्क्रैपिंग के रूप में किया जाता है।

निदान प्रक्रिया से पहले, डॉक्टर रोगी को समझाता है कि कौन सी सामग्री ली जाएगी:

1. यौन संक्रमण की जांच करते समय, जननांग अंगों से स्राव, मूत्र और मूत्रमार्ग से एक धब्बा लिया जाता है।
2. हर्पेटिक संक्रमण, साइटोमेगालोवायरस, मोनोन्यूक्लिओसिस के लिए विश्लेषण करते समय - वे मूत्र लेते हैं, विश्लेषण के लिए एक गले की सूजन, हेपेटाइटिस के लिए, टोक्सोप्लाज़मोसिज़ - एक नस से रक्त।
3. विभिन्न प्रकार के निदान के लिए, मस्तिष्कमेरु द्रव लिया जाता है।
4. पल्मोनोलॉजी में, विश्लेषण के लिए नमूने थूक और फुफ्फुस द्रव हैं।
5. गर्भ के दौरान संभावित अंतर्गर्भाशयी संक्रमण का अध्ययन करते समय, विश्लेषण के लिए एमनियोटिक द्रव और अपरा कोशिकाओं का उपयोग किया जाता है।

विश्लेषण की विश्वसनीयता और सटीकता सामग्री लेते समय स्थितियों की बाँझपन पर निर्भर करती है। चूंकि पीसीआर परीक्षण अत्यधिक संवेदनशील है, परीक्षण पदार्थ का कोई भी संदूषण परिणाम को विकृत कर सकता है।

बायोमटेरियल की डिलीवरी के लिए सक्षम तैयारी रोगियों के लिए कोई कठिनाई पेश नहीं करती है। कुछ सिफारिशें हैं:

• यौन संक्रमण का विश्लेषण करते समय:
  • सामग्री की डिलीवरी से 72 घंटे पहले अंतरंग संपर्कों को बाहर करें;
  • 3 दिनों के लिए किसी भी योनि उत्पाद का उपयोग बंद करें;
  • पिछले दिन की शाम से, अध्ययन के तहत क्षेत्र की स्वच्छता न करें;
  • मूत्रमार्ग से नमूना लेते समय 3-4 घंटे के लिए पेशाब को बाहर करें;
• संक्रमण के परीक्षण से एक महीने पहले एंटीबायोटिक्स लेना बंद कर दें;
• सुबह खाने-पीने से पहले रक्तदान करें;
• मूत्र के पहले सुबह के हिस्से का संग्रह पूरी तरह से अंतरंग शौचालय के बाद एक बाँझ कंटेनर में किया जाता है।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन विधि का उपयोग करके निदान कैसे किया जाता है, इसके बारे में और पढ़ें।

कैसी है प्रक्रिया

रिएक्टर (एम्पलीफायर या थर्मल साइक्लर) में बार-बार पीसीआर अध्ययन करते समय, कुछ चक्र दोहराए जाते हैं:

1. पहला कदम विकृतीकरण है. लार, रक्त, बायोप्सी, स्त्री रोग संबंधी नमूने, थूक, जिसमें रोगज़नक़ के डीएनए (या आरएनए) की उपस्थिति का संदेह है, एक एम्पलीफायर में रखा जाता है, जहां सामग्री को गर्म किया जाता है और डीएनए को दो अलग-अलग श्रृंखलाओं में विभाजित किया जाता है।
2. दूसरा चरण सामग्री का एनीलिंग या हल्का ठंडा करना है।और इसमें प्राइमर जोड़ना जो डीएनए अणु में वांछित वर्गों को पहचान सके और उन्हें बांध सके।
3. तीसरा चरण बढ़ाव है- प्रत्येक डीएनए स्ट्रैंड में 2 प्राइमरों को जोड़ने के बाद होता है। प्रक्रिया के दौरान, रोगज़नक़ का डीएनए टुकड़ा पूरा हो जाता है, और इसकी प्रतिलिपि बन जाती है।

इन चक्रों को एक "श्रृंखला प्रतिक्रिया" की तरह दोहराया जाता है, हर बार एक विशिष्ट डीएनए टुकड़े की प्रतियों की दोहरीकरण की ओर जाता है (उदाहरण के लिए, एक खंड जहां एक निश्चित वायरस प्रोग्राम किया जाता है)। कुछ ही घंटों में डीएनए के टुकड़े की कई प्रतियां बन जाती हैं, और नमूने में उनकी उपस्थिति का पता लगाया जाता है। उसके बाद, परिणामों का विश्लेषण किया जाता है और संक्रमण के प्रकार को निर्धारित करने के लिए विभिन्न प्रकार के रोगजनकों के डेटाबेस के साथ तुलना की जाती है।

पीसीआर प्रतिक्रिया के आधार पर परिणामों की व्याख्या और निष्कर्ष के बारे में नीचे पढ़ें।

परिणामों को समझना

अध्ययन का अंतिम परिणाम जैविक सामग्री के वितरण के 1-2 दिन बाद जारी किया जाता है। अक्सर - विश्लेषण के बाद पहले दिन में।

गुणात्मक विश्लेषण

• नकारात्मकपरिणाम का मतलब है कि शोध के लिए प्रस्तुत पदार्थ में संक्रामक एजेंटों का कोई निशान नहीं पाया गया।
• सकारात्मकएक परिणाम का मतलब है कि जैविक नमूने में रोगजनक वायरस या बैक्टीरिया का पता लगाने के समय जमा करने के समय बहुत उच्च सटीकता के साथ।

यदि परिणाम सकारात्मक है, लेकिन संक्रमण के सक्रिय होने के कोई संकेत नहीं हैं, तो शरीर की इस स्थिति को स्पर्शोन्मुख "स्वस्थ गाड़ी" कहा जाता है। वायरल रोगों में एक निश्चित स्थान (गर्भाशय ग्रीवा नहर, मूत्रमार्ग, मौखिक गुहा) से बायोमटेरियल लेते समय अक्सर देखा जाता है। इस मामले में उपचार की आवश्यकता नहीं है, लेकिन निरंतर चिकित्सा पर्यवेक्षण आवश्यक है, क्योंकि एक संभावना है:

• वाहक और स्वस्थ लोगों के संक्रमण से वायरस का प्रसार;
• प्रक्रिया की सक्रियता और रोग के जीर्ण रूप में संक्रमण।

हालांकि, यदि रक्त परीक्षण सकारात्मक है, तो यह इंगित करता है कि संक्रमण ने शरीर को प्रभावित किया है, और यह अब एक वाहक अवस्था नहीं है, बल्कि एक विकृति है जिसके लिए तत्काल विशिष्ट चिकित्सा की आवश्यकता होती है।

मात्रात्मक विश्लेषण

मात्रात्मक परिणाम विशेषज्ञ द्वारा विशेष रूप से एक विशेष प्रकार के संक्रमण के लिए निर्धारित किया जाता है। इसके आधार पर, विकास की डिग्री, बीमारी के चरण का आकलन करना संभव है, जिससे तुरंत सही उपचार निर्धारित करना संभव हो जाता है।

औसत लागत

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन के संचालन के लिए कीमतें निर्धारित की जाती हैं: अध्ययन का प्रकार, रोगज़नक़ की पहचान करने की जटिलता, जैविक सामग्री एकत्र करने की कठिनाई, विश्लेषण का प्रकार (गुणात्मक या मात्रात्मक), प्रयोगशाला में मूल्य स्तर।

दूसरी ओर, पीसीआर के अध्ययन में, विश्लेषण के लिए एक प्रकार की सामग्री लेते समय एक साथ कई रोगजनकों का पता लगाया जा सकता है। यह अन्य प्रयोगशाला परीक्षणों पर बचाता है।

लगभग, रूबल में पीसीआर विश्लेषण की लागत:

• गोनोकोकस, गार्डनेरेला, ट्राइकोमोनास वेजिनेलिस - 180 . से
• क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस - 190 . से
• पेपिलोमावायरस - 380 से 500 . तक
• महिलाओं में मूत्रजननांगी पथ का बायोकेनोसिस (माइक्रोफ्लोरा का मात्रात्मक और गुणात्मक मूल्यांकन) - 800 से।

और भी अधिक उपयोगी जानकारीपीसीआर अध्ययन के संबंध में, नीचे दिया गया वीडियो देखें:

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) आणविक आनुवंशिक निदान की एक उच्च-सटीक विधि है, जो मनुष्यों में तीव्र और पुरानी दोनों अवस्थाओं में, और रोग के प्रकट होने से बहुत पहले, विभिन्न संक्रामक और वंशानुगत रोगों का पता लगाना संभव बनाता है।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) 1983 में कैरी मुलिस (यूएसए) द्वारा विकसित किया गया था, जिसके लिए उन्हें 1993 में रसायन विज्ञान में नोबेल पुरस्कार से सम्मानित किया गया था।

अधिकांश संक्रमणों के लिए पीसीआर विश्लेषण एक प्रकार का "स्वर्ण मानक" बन गया है। अधिकांश विशेषज्ञ लगभग प्रतिदिन इसका सामना करते हैं और इसके बिना अंतिम निदान करने की कल्पना नहीं कर सकते। पीसीआर अक्सर उन क्षणों में रोग के सक्रिय चरणों का पता लगाने के लिए एकमात्र प्रतिक्रिया बन जाती है जब अन्य बैक्टीरियोलॉजिकल, वायरोलॉजिकल, इम्यूनोलॉजिकल डायग्नोस्टिक तरीके काम नहीं करते हैं।

आधुनिक चिकित्सा में पीसीआर निदान के लाभ:

परीक्षण नमूने में एक रोगज़नक़ (अर्थात्, डीएनए या रोगज़नक़ के आरएनए का एक विशिष्ट क्षेत्र) की उपस्थिति का प्रत्यक्ष पता लगाना।
उच्च विशिष्टता किसी विशेष रोगज़नक़ के डीएनए या आरएनए विशेषता के एक अद्वितीय खंड को निर्धारित करना संभव बनाती है, जो झूठी प्रतिक्रियाओं की संभावना को समाप्त करती है।
पीसीआर पद्धति की उच्च संवेदनशीलता रोगजनकों (वायरस, बैक्टीरिया) की एकल कोशिकाओं का भी पता लगाना संभव बनाती है। पीसीआर विश्लेषण की संवेदनशीलता परीक्षण नमूने में 10-1000 कोशिकाएं हैं (उदाहरण के लिए, प्रतिरक्षाविज्ञानी और सूक्ष्म परीक्षणों की संवेदनशीलता केवल 103-105 कोशिकाएं हैं)।
विभिन्न रोगजनकों का पता लगाने के लिए एक सार्वभौमिक पीसीआर तकनीक का विकास। पीसीआर द्वारा शोध की वस्तु रोगज़नक़ की आनुवंशिक सामग्री (डीएनए, आरएनए) है। तकनीक एक जैविक नमूने से कई रोगजनकों का पता लगाने की अनुमति देती है।
अपेक्षाकृत तेजी से विश्लेषण के परिणाम। 4-4.5 घंटों में एक पूरा अध्ययन किया जाता है, कम बार - थोड़ी देर।
रोग के लक्षणों की शुरुआत से पहले (प्रीक्लिनिकल डायग्नोसिस) और पिछली बीमारी (पूर्वव्यापी निदान) के बाद रोगजनकों का पता लगाने की क्षमता। प्रीक्लिनिकल डायग्नोसिस का एक उदाहरण ऊष्मायन अवधि (संक्रमण के क्षण से रोगी की शिकायतों की शुरुआत तक) के साथ-साथ एक गुप्त संक्रमण (जब कोई लक्षण नहीं है, लेकिन केवल प्रयोगशाला डेटा हैं - पीसीआर) के दौरान एक परीक्षा होगी। , उदाहरण के लिए)। पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के महत्वपूर्ण बिंदुओं में से एक अभिलेखीय सामग्री या जैविक अवशेषों में पीसीआर है, जो किसी व्यक्ति या पितृत्व की पहचान के लिए महत्वपूर्ण है।

वर्तमान में, पीसीआर डायग्नोस्टिक्स महत्वपूर्ण विकास के दौर से गुजर रहा है। विधि में ही सुधार किया जा रहा है, नए प्रकार के पीसीआर बार-बार दिखाई देते हैं, इस प्रतिक्रिया के लिए नई परीक्षण प्रणाली चिकित्सा बाजार में प्रवेश करती है। इसके कारण, हर साल मरीजों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए पीसीआर अध्ययन की लागत अधिक सस्ती होती जा रही है।

पीसीआर पद्धति का आधार क्या है

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का आधार प्रयोगशाला में एंजाइमों का उपयोग करके डीएनए या आरएनए के एक निश्चित खंड की बार-बार दोहरीकरण (प्रवर्धन) है। नतीजतन, दृश्य विश्लेषण के लिए पर्याप्त डीएनए या आरएनए की मात्रा बनती है। अध्ययन के दौरान, केवल उस क्षेत्र की नकल की जाती है जो निर्दिष्ट परिस्थितियों में फिट बैठता है, और केवल परीक्षण नमूने में इसकी उपस्थिति की स्थिति में।

उदाहरण के लिए, अनुसंधान के लिए एक सामग्री, जिसमें डीएनए के टुकड़े या रोगज़नक़ (लार, रक्त, मूत्र, जननांग अंगों से स्राव) के आरएनए की उपस्थिति की उम्मीद की जाती है, एक विशेष रिएक्टर (एम्पलीफायर) में रखा जाता है। इसके अलावा, इसमें विशिष्ट एंजाइम जोड़े जाते हैं, जो रोगज़नक़ के डीएनए या आरएनए से जुड़ते हैं, और इसकी एक प्रति संश्लेषित होती है। यह प्रतिलिपि कई चरणों में होती है, जैसे "श्रृंखला प्रतिक्रिया", और अंततः एक प्रति से आनुवंशिक सामग्रीसैकड़ों और हजारों प्रतियां बनाई जा सकती हैं। इसके बाद विभिन्न रोगजनकों की संरचना पर मौजूदा डेटाबेस के साथ परिणाम का विश्लेषण और तुलना आती है। पीसीआर के माध्यम से, आप न केवल रोगज़नक़ के प्रकार की पहचान कर सकते हैं, बल्कि विश्लेषण का मात्रात्मक परिणाम भी दे सकते हैं, अर्थात मानव शरीर में कितने रोगजनक हैं।

पीसीआर पद्धति वर्तमान में चल रहे अनुसंधान के लिए संभावनाओं की सीमा का विस्तार कर रही है: उत्परिवर्तन की शुरूआत, डीएनए अंशों का विभाजन, और दवा में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, उदाहरण के लिए, पितृत्व स्थापित करने के लिए, नए जीन का उद्भव, और इसी तरह।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग करके किन संक्रमणों का पता लगाया जा सकता है

1) एचआईवी संक्रमण (मानव इम्यूनोडिफीसिअन्सी वायरस एचआईवी -1 का पता लगाया जा सकता है)
2) वायरल हेपेटाइटिस ए, बी, सी, जी (आरएनए-एचएवी, डीएनए-एचबीवी, आरएनए-एचसीवी, आरएनए-एचजीवी)
3) संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस (एपस्टीन-बार वायरस का डीएनए - EBV)
4) साइटोमेगालोवायरस संक्रमण (डीएनए-सीएमवी)
5) हर्पेटिक संक्रमण (डीएनए - हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस एचएसवी टाइप 1 और 2)
6) एसटीआई (यौन संचारित संक्रमण) - यूरियाप्लाज्मोसिस, गार्डनरेलोसिस, क्लैमाइडिया, मायकोप्लास्मोसिस, ट्राइकोमोनिएसिस,
7) क्षय रोग (माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस)
8) ऑन्कोजेनिक वायरस - पैपिलोमावायरस संक्रमण (ह्यूमन पेपिलोमावायरस (इसकी ऑन्कोजेनिक प्रजाति 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 और 59 सहित)
9) बोरेलियोसिस, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस
10) लिस्टरियोसिस
11) कैंडिडिआसिस (जीनस कैंडिडा का कवक)
12) हेलिकोबैक्टर पाइलोरी संक्रमण
और दूसरे

रोगजनकों के स्पेक्ट्रम को ध्यान में रखते हुए, पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का सक्रिय रूप से स्त्री रोग, मूत्र संबंधी, संक्रामक रोग अभ्यास, पल्मोनोलॉजी, पैथिसियोलॉजी, गैस्ट्रोएंटरोलॉजी, हेमटोलॉजी, ऑन्कोलॉजी और अन्य में उपयोग किया जाता है।

अनुसंधान के लिए सामग्री और इसके संग्रह के लिए नियम

पीसीआर अनुसंधान के लिए सामग्री, जिसमें एक जीवाणु के विदेशी डीएनए या वायरस के डीएनए या आरएनए का पता लगाया जा सकता है, विभिन्न जैविक मीडिया और मानव तरल पदार्थ हो सकते हैं: बलगम, मूत्र, रक्त, थूक, उपकला कोशिकाओं का स्क्रैपिंग, अपरा ऊतक, रक्त , प्रोस्टेट रस, एमनियोटिक द्रव, फुफ्फुस द्रव।

यौन संचारित संक्रमणों (एसटीआई) के लिए स्क्रीनिंग करते समय, पुरुष और महिलाएं जननांग अंगों से स्राव, गर्भाशय ग्रीवा से एक धब्बा या स्क्रैपिंग, मूत्रमार्ग (मूत्रमार्ग), मूत्र से एक स्वैब या स्क्रैपिंग लेते हैं।

संक्रमण (हर्पेटिक संक्रमण, सीएमवीआई, मोनोन्यूक्लिओसिस, टोक्सोप्लाज्मोसिस, हेपेटाइटिस बी, सी, एचआईवी संक्रमण) की जांच करते समय, पीसीआर के लिए रक्त लिया जाता है।

संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, सीएमवीआई, हर्पेटिक संक्रमण के निदान के लिए, सीएमवीआई - मूत्र की जांच के लिए गले से एक स्वाब लिया जाता है। कई अध्ययनों में तंत्रिका तंत्र को हुए नुकसान की जांच के लिए अक्सर मस्तिष्कमेरु द्रव लिया जाता है।

पल्मोनोलॉजी में, सामग्री थूक, फुफ्फुस द्रव है।

अंतर्गर्भाशयी संक्रमण की जांच करते समय - एमनियोटिक द्रव, अपरा ऊतक।

सामग्री और पीसीआर डायग्नोस्टिक्स की डिलीवरी की तैयारी

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स से गुजरने वाले लगभग सभी रोगियों को एक विश्वसनीय, सटीक और तेज परिणाम पर भरोसा करने का अधिकार है, जो काफी हद तक प्रयोगशाला की क्षमताओं और प्रयोगशाला सहायक की व्यावसायिकता पर निर्भर करता है। इसी समय, कई लोग यह नहीं सोचते हैं कि यह बहुत ही विश्वसनीयता काफी हद तक खुद पर निर्भर करती है, अर्थात् उपस्थित चिकित्सक की सिफारिशों, जीवन शैली और सामग्री के नमूने की शुद्धता पर। सामग्री का नमूना लेते समय, ऐसी स्थितियों की आवश्यकता होती है जो सामग्री के संदूषण (संदूषण) को बाहर करती हैं और तदनुसार, विश्लेषण की निष्पक्षता पर संदेह करती हैं।

सामग्री के वितरण के लिए उचित तैयारी विशेष रूप से कठिन नहीं है। रोगियों के लिए डॉक्टरों की निम्नलिखित सिफारिशें हैं:

1) सामग्री की डिलीवरी से एक दिन पहले यौन संबंध नहीं बनाना;
2) शोध के लिए रक्त सुबह खाली पेट दिया जाता है (खाना नहीं, पीना नहीं);
3) पेशाब करते समय, सुबह के पहले हिस्से को एक साफ बाँझ कंटेनर में एकत्र किया जाता है।

पीसीआर विश्लेषण के लिए समय सीमा

सामग्री की डिलीवरी के बाद 1.5-2 दिनों में अंतिम परिणाम तैयार हो जाता है। कुछ मामलों में, परिणाम पहले दिन तैयार होता है।

पीसीआर परिणामों की व्याख्या

नकारात्मकपीसीआर परिणाम इंगित करता है कि इसकी डिलीवरी के समय परीक्षण सामग्री में संक्रामक एजेंटों का कोई निशान नहीं पाया गया था। अधिकांश मामले उस संक्रमण की अनुपस्थिति को दर्शाते हैं जिसे परीक्षण नमूने में खोजने का प्रयास किया गया था।

सकारात्मकपीसीआर का परिणाम अध्ययन के तहत जैविक नमूने में संक्रमण के निशान का पता लगाने का संकेत देता है। बड़ी सटीकता के साथ, एक सकारात्मक परिणाम एक निश्चित समय में संक्रमण की उपस्थिति को इंगित करता है।

ऐसी स्थितियां हैं जब पीसीआर सकारात्मक है, लेकिन एक सक्रिय संक्रमण के बारे में बात करना असंभव है - यह रोग के नैदानिक ​​लक्षणों के बिना तथाकथित "स्वस्थ गाड़ी" है, जिसके लिए उपचार की आवश्यकता नहीं होती है, लेकिन डॉक्टर द्वारा गतिशील अवलोकन की आवश्यकता होती है। यह कई वायरल संक्रमणों (एचपीवी, सीएमवीआई, ईबीवी संक्रमण, दाद संक्रमण, और अन्य) में लार, ग्रीवा नहर के स्क्रैपिंग, मूत्रमार्ग, यानी स्थानीय फोकस से अधिक बार देखा जाता है। हालांकि, हमें यह नहीं भूलना चाहिए कि वाहक से स्वस्थ लोगों में संक्रमण का संचरण संभव है, जैसा कि प्रक्रिया की सक्रियता के साथ रोग के पुराने रूप में संक्रमण होता है। यदि पीसीआर रक्त में सकारात्मक है, तो यह अब वाहक अवस्था नहीं है और इसके लिए विशिष्ट उपचार की आवश्यकता होती है।

पीसीआर के मात्रात्मक परिणाम का मूल्यांकन केवल एक डॉक्टर द्वारा व्यक्तिगत रूप से किसी विशेष संक्रमण के लिए अलग से किया जाता है और इसमें सामान्य ग्रेडेशन नहीं होता है। मात्रात्मक पीसीआर परिणाम के आधार पर, डॉक्टर संक्रमण गतिविधि की डिग्री निर्धारित कर सकता है और रोग का चरण निर्धारित कर सकता है, जो निश्चित रूप से निर्धारित दवाओं के पाठ्यक्रम और खुराक को प्रभावित करेगा।

आखिरी रोमांचक सवालों में से एक: पीसीआर डायग्नोस्टिक्स कितना सही है?

पीसीआर विश्लेषण के लिए 3 परिभाषाएँ हैं:

1. शुद्धता (संभाव्यता की उच्च डिग्री के साथ, संक्रमण का पता लगाना या अनुपस्थिति संभव है)।
2. विशिष्टता (एक विशिष्ट संक्रमण का पता लगाने में सटीकता)।
3. संवेदनशीलता (यहां तक ​​कि परीक्षण नमूने में रोगजनकों की आनुवंशिक सामग्री की कम सामग्री के साथ, संक्रमण का पता लगाया जाएगा)।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन व्यावहारिक रूप से गलत सकारात्मक परिणाम नहीं देता है (अर्थात, कोई सकारात्मक नमूने नहीं हैं जहां कोई संक्रमण नहीं है)। गलत-नकारात्मक परिणाम दुर्लभ हैं (अधिक बार यह इस समय किसी व्यक्ति में सक्रिय संक्रमण की अनुपस्थिति के कारण होता है)। उदाहरण के लिए, गुप्त संक्रमण, गतिविधि से पुराना संक्रमण।

संक्रामक रोग विशेषज्ञ बायकोवा एन.आई.

संक्रमण के लिए पीसीआर परीक्षण क्यों और कैसे करें, इस पर वीडियो

पीसीआर डायग्नोस्टिक पद्धति का सार

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) विधि आणविक जीव विज्ञान के सिद्धांतों पर आधारित है और आनुवंशिक अनुसंधान के क्षेत्र से संबंधित है।

किसी भी जीवित जीव में इसकी संरचना में न्यूक्लिक एसिड के अणु होते हैं - डीएनए और आरएनए। यह एक प्रकार का आनुवंशिक पासपोर्ट है, जो यह निर्धारित करने में मदद करता है कि यह या वह "वाहक" किस प्रजाति का है। हालांकि, इस "पासपोर्ट" को स्कैन करने के लिए, हाल तक, जैविक सामग्री की एक निश्चित न्यूनतम मात्रा की आवश्यकता थी। यदि डीएनए सांद्रता आवश्यकता से कम थी, तो नैदानिक ​​विश्लेषण संभव नहीं था।

पीसीआर द्वारा निदान करते समय, जैविक सामग्री का एक नमूना विशेष एंजाइम (पोलीमरेज़) के साथ इलाज किया जाता है, जो आपको मौजूदा डीएनए (आरएनए) की कई प्रतिलिपि बनाने की प्रक्रिया शुरू करने की अनुमति देता है। एक चेन रिएक्शन कैस्केड का उपयोग करके, ज्यामितीय प्रगति के सिद्धांत के अनुसार, कुछ ही घंटों में, एक न्यूक्लिक एसिड अणु से कई दसियों ट्रिलियन प्रतियां प्राप्त की जा सकती हैं। यह मात्रा किसी भी तुलनात्मक अध्ययन के लिए पर्याप्त से अधिक है।

विश्लेषण के लिए, एक एम्पलीफायर का उपयोग किया जाता है, जिसमें सख्त तापमान की स्थिति में, कई डीएनए प्रतिकृति की प्रक्रिया होती है। आमतौर पर 20-30 प्रतिकृति चक्र पर्याप्त होते हैं। उनमें से प्रत्येक में लगातार 3 चरण शामिल हैं:

• विकृतीकरण - आसन्न श्रृंखलाओं के बीच हाइड्रोजन बांड के विनाश के साथ डीएनए मैट्रिक्स को 96 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करना;
• एनीलिंग - एक प्रतिकृति कांटा बनाने के लिए तापमान को 4 डिग्री सेल्सियस कम करना;
• बढ़ाव - माता-पिता के आधार पर नई न्यूक्लियोटाइड श्रृंखलाओं के संश्लेषण के लिए डीएनए पोलीमरेज़ का प्रक्षेपण।

प्रत्येक तीन-चरण चक्र औसतन 15-20 मिनट तक रहता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के लाभ

पीसीआर विश्लेषण उच्च तकनीक वाला है और इसके लिए प्रयोगशाला कर्मचारियों से व्यावसायिकता की आवश्यकता होती है, लेकिन आधुनिक चिकित्सा के लिए यह सटीक निदान के क्षेत्र में अभूतपूर्व अवसरों का स्रोत बन गया है।

पीसीआर के लाभ:

• सार्वभौमिकता (किसी भी जैविक सामग्री की जांच की जा सकती है - रक्त कोशिकाओं, लार और बालों से लेकर अपराध स्थल पर संदिग्ध स्थानों तक);
• संवेदनशीलता की उच्च सीमा (विधि नमूने में एकल कोशिकाओं या व्यक्तिगत डीएनए अणुओं की उपस्थिति में परिणाम देने में सक्षम है);
• मल्टीटास्किंग - एक दृष्टिकोण में, कई अलग-अलग प्रकार के सूचना वाहकों का एक साथ पता लगाया जा सकता है (बैक्टीरियोलॉजिकल तरीके इसके लिए सक्षम नहीं हैं, क्योंकि उन्हें प्रत्येक प्रकार के सूक्ष्मजीव के लिए अलग-अलग पोषक तत्व मीडिया की आवश्यकता होती है);
• सटीक मात्रात्मक विश्लेषण करने की क्षमता;
• प्रसंस्करण गति (अन्य प्रकार के आनुवंशिक अध्ययनों के विपरीत, पीसीआर निदान में केवल 5-7 घंटे लगते हैं);
• परिणाम की सटीकता (यदि तकनीक देखी जाती है, तो त्रुटि को व्यावहारिक रूप से बाहर रखा गया है);
• अपेक्षाकृत कम लागत (पीसीआर विश्लेषण मानक परीक्षणों के लिए औसत मूल्य से आगे नहीं जाता है)।

ये सभी लाभ उपचार प्रक्रिया की नियमित निगरानी के लिए पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का उपयोग करना संभव बनाते हैं।

पीसीआर डायग्नोस्टिक पद्धति के विकासकर्ता को एक कारण के लिए अपने "दिमाग की उपज" के लिए नोबेल पुरस्कार मिला। पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन विधि की अनुमति देता है:

• बायोमटेरियल (एकल वायरल संरचनाओं तक) में न्यूनतम सामग्री के साथ एक संक्रामक एजेंट के तनाव का निर्धारण करें;
• पूरे शरीर में रोगज़नक़ की सटीक एकाग्रता की गणना करें (दवाओं की इष्टतम खुराक निर्धारित करने के लिए);
• रोगी पर रोग संबंधी प्रभावों की डिग्री का आकलन करें और उच्च औषधीय प्रतिरोध वाले उपभेदों की पहचान करें;
• संक्रमण के क्रमिक चरणों को स्थापित करें और एक और रोग का निदान करें।

यह दिलचस्प है! पीसीआर विश्लेषण की संभावनाएं मानव शरीर में संक्रामक पृष्ठभूमि के मात्रात्मक और गुणात्मक मूल्यांकन की तुलना में बहुत व्यापक हैं। संक्रमण का पता लगाने के अलावा, इसका उपयोग रिश्तेदारी स्थापित करने, व्यक्तित्व का निर्धारण करने, आनुवंशिक विकृति की पहचान करने और फोरेंसिक विज्ञान में जैव सामग्री की तुलना करने के लिए किया जाता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स द्वारा किन संक्रमणों का पता लगाया जा सकता है

पीसीआर विश्लेषण रोगों की आधुनिक चिकित्सा सूची में शामिल किसी भी संक्रामक वाहक की उच्च सटीकता के साथ गणना करने में सक्षम है:

• सभी प्रकार के हेपेटाइटिस के प्रेरक एजेंट (पीसीआर आपको ऊष्मायन अवधि के चरण में संक्रमण के स्रोत की पहचान करने और रोग के लक्षणों की शुरुआत से बहुत पहले उपचार शुरू करने की अनुमति देता है);
• एचआईवी और एसटीडी के रोगजनकों (यूरियाप्लाज्मा, माइकोप्लाज्मा, क्लैमाइडिया, ट्राइकोमोनास);
• TORCH संक्रमणों का एक समूह (भ्रूण विकृति का शीघ्र पता लगाने के लिए गर्भवती महिलाओं की जांच करते समय प्रासंगिक);
• तपेदिक (बीमारी का अव्यक्त रूप);
• कैंडिडिआसिस (अव्यक्त रूप);
• एंटरोवायरस संक्रमण;
• मोनोन्यूक्लिओसिस;
• लिस्टरियोसिस;
• साल्मोनेलोसिस (एक विशिष्ट तनाव की परिभाषा);
• पैपिलोमावायरस;
• गार्डनरेलोसिस;
• टिक-जनित एन्सेफलाइटिस वायरस।

विशेष रूप से लोकप्रिय इंट्रासेल्युलर संक्रमण (उदाहरण के लिए, क्लैमाइडिया) के लिए विश्लेषण है, जिसका निर्धारण रोगी के ऊतकों में इन सूक्ष्मजीवों की उच्च सांद्रता के साथ भी सामान्य तरीके से करना मुश्किल है।

विधि के मल्टीटास्किंग को देखते हुए, 12 बुनियादी संक्रमणों के लिए एक साथ पीसीआर विश्लेषण करना संभव है। गलत निदान के न्यूनतम जोखिम के साथ यौन संचारित संक्रमणों के लिए नियमित शरीर जांच के लिए एक एकीकृत दृष्टिकोण एक सुविधाजनक विकल्प है।

एक नोट पर! पीसीआर डायग्नोस्टिक्स की मदद से, संक्रमण के तथाकथित "नींद" रूपों के लिए एक पूर्वानुमान किया जाता है जो रोग के लक्षणों को प्रकट किए बिना शरीर में होते हैं (विशेष रूप से स्त्री रोग और मूत्र संबंधी रोगों, तपेदिक, टिक-जनित के उपचार में महत्वपूर्ण) एन्सेफलाइटिस, पेपिलोमावायरस)।

किन जैविक पदार्थों का अध्ययन किया जा रहा है

कोई निर्धारित नियम या सीमाएँ नहीं हैं। विधि की बहुमुखी प्रतिभा विश्लेषण के लिए किसी भी जैविक सामग्री के उपयोग की अनुमति देती है:

• योनि स्वैब, मूत्रमार्ग और ग्रीवा नहर से स्क्रैपिंग (एसटीडी के निदान के लिए);
• मूत्र (तपेदिक, कुछ एसटीडी, साइटोमेगालोवायरस);
• रक्त (एचआईवी, हेपेटाइटिस, मशाल संक्रमण);
• गले की सूजन (मोनोन्यूक्लिओसिस, साइटोमेगालोवायरस);
• शराब (न्यूरोइन्फेक्शन)
• एमनियोटिक द्रव और अपरा ऊतक (भ्रूण के विकास की विकृति को रोकने के लिए TORCH संक्रमण का विश्लेषण);
• फुफ्फुस द्रव (फेफड़ों में संक्रमण)।

अन्य प्रकार के पीसीआर निदान के लिए (रिश्तेदारी की स्थापना, जैव सामग्री की तुलना), लार, बाल, नाखून, उपकला कोशिकाएं और आनुवंशिक जानकारी के अन्य स्रोतों का उपयोग किया जाता है।

एक नोट पर! पीसीआर डायग्नोस्टिक्स की विधि न केवल जीवित ऊतकों की संरचना में, बल्कि मिट्टी, पानी, पौधों के सब्सट्रेट के नमूनों में भी रोगजनकों को प्रकट करती है; मानव शरीर और उसके पर्यावरण दोनों में सूक्ष्मजीवों की रोगजनक गतिविधि का मूल्यांकन करें (बीमारी के एक स्थापित स्रोत की उपस्थिति भविष्य में इसे रोकने के लिए उचित उपाय करने की अनुमति देगी)।

विश्लेषण की तैयारी कैसे करें

हमारे क्लिनिक के मरीजों को यह सोचने की जरूरत नहीं है कि पीसीआर टेस्ट कहां करना है। हम सामग्री के बाँझ नमूने के लिए और इसे प्रयोगशाला में भेजने के लिए सभी शर्तें प्रदान करते हैं।

विशेष प्रशिक्षण की आवश्यकता नहीं है, लेकिन सामान्य सिफारिशों की सूची का पालन करना उचित है। कुछ दिनों के लिए शराब छोड़ दें, धूम्रपान सीमित करें, यदि संभव हो तो, दवाओं को छोड़ दें, तनावपूर्ण स्थितियों और भारी शारीरिक परिश्रम से बचने की कोशिश करें।

विश्लेषण पास करने की बाकी तैयारी बायोमटेरियल के प्रकार पर निर्भर करती है:

• मूत्रजननांगी संक्रमण के लिए स्मीयर या स्क्रैपिंग लेने से पहले, 2-3 दिनों के लिए संभोग से बचना चाहिए (महिलाओं को यह सुनिश्चित करना चाहिए कि परीक्षण का दिन मासिक धर्म के दिनों में नहीं आता है);
• पीसीआर के लिए रक्त परीक्षण करने से पहले, सुबह खाने से परहेज करें (परीक्षण खाली पेट लिया जाता है) और एक गिलास साफ गैर-कार्बोनेटेड पानी पिएं;
• पेशाब करने से पहले, उन खाद्य पदार्थों से बचना चाहिए जो मूत्र की अम्लता को प्रभावित करते हैं (फल, मांस, फलियां, साग)।

महत्वपूर्ण! संक्रमण के पीसीआर निदान में सबसे महत्वपूर्ण आवश्यकता जैव सामग्री की शुद्धता है। इसलिए, विदेशी डीएनए के साथ ऊतकों के संदूषण को बाहर करने के लिए हर संभव प्रयास करने का प्रयास करें (शिपिंग कंटेनर की बाँझपन, व्यक्तिगत स्वच्छता, साफ कपड़े का ध्यान रखें)।

पीसीआर विश्लेषण को समझना

संक्रमण के लिए गुणात्मक पीसीआर विश्लेषण के परिणाम एक तालिका के रूप में दिए गए हैं, जहां प्रत्येक संक्रामक एजेंट का एक समान चिह्न होता है:

• नकारात्मक परिणाम (इस प्रजाति का प्रेरक एजेंट अनुपस्थित है);
• सकारात्मक परिणाम (प्रेरक एजेंट का पता चला)।

रोग के लक्षणों की अनुपस्थिति वास्तविक तस्वीर के अनुरूप नहीं हो सकती है, इसलिए किसी के लिए विश्लेषण के परिणाम अप्रत्याशित होंगे। आपको परेशान नहीं होना चाहिए: प्रारंभिक अवस्था में एक संक्रामक एजेंट की पहचान करना एक सफल और त्वरित इलाज की कुंजी है।

मात्रात्मक पीसीआर विश्लेषण करते समय, वायरल लोड की डिग्री का आकलन करना संभव है (प्रति यूनिट वॉल्यूम में वायरस की प्रतियों की संख्या का पता लगाएं)। इस प्रकार के अध्ययन के लिए धन्यवाद, संक्रामक प्रक्रिया के पाठ्यक्रम की तीव्रता को निर्धारित करना संभव है, साथ ही उपचार की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करना भी संभव है।

पीसीआर विश्लेषण: मूल्य और शर्तें

औसत निदान समय 5-10 घंटे है। एक तालिका के रूप में परिणाम बायोमटेरियल के नमूने के अगले कारोबारी दिन जारी किए जाते हैं।

पीसीआर विश्लेषण चुनते समय, कीमत मायने नहीं रखती है। औसतन, लागत की मात्रा पारंपरिक जैव रासायनिक परीक्षणों के दायरे से बाहर नहीं जाती है और आनुवंशिक अध्ययनों के विपरीत, सभी रोगियों के लिए उपलब्ध है।