Kui palju tehakse PCR-i varjatud infektsioonide jaoks. Kuidas PCR analüüsi tehakse: protseduuri kirjeldus. Kui määritakse, on see vajalik

Erinevat tüüpi nakkushaiguste - nii viiruslike kui ka bakteriaalsete - diagnoosimine on suunatud patogeenide tuvastamisele varases staadiumis, mis võimaldab määrata õigeaegse ja eriti tõhusa ravi. Kõige kaasaegsem meetod infektsioonide tuvastamiseks on PCR, mis tähistab polümeraasi ahelreaktsiooni. Mis on selle meetodi olemus ja mis on selle eesmärk?

Polümeraasi reaktsiooni olemus

Iga viiruse ja mikroorganismi struktuur sisaldab RNA või DNA molekule. On iseloomulik, et need ühendid on igaühe jaoks ainulaadsed ja seetõttu saab täiskasvanute või laste vereanalüüsis nukleiinhappeid eraldades panna absoluutse täpsusega diagnoosi.

Kahjuks on DNA kontsentratsioon nii vereproovides kui ka muudes bioloogilistes materjalides üsna madal, mistõttu seda ei saa tavaliste diagnostiliste meetoditega määrata. Selle probleemiga toimetulemiseks leiutati korraga polümeraasi ahelreaktsioon.

Niisiis, selle analüüsi olemus seisneb vereproovi spetsiifilises töötlemises, mille tõttu DNA molekulide kontsentratsioon selles suureneb ja nende tüübi kindlaksmääramine tulevikus võimaldab tuvastada ka patogeeni tüüpi. õige diagnoosi panemiseks.

Kuidas PCR-i vereanalüüsi tehakse?

PCR meetod viiakse läbi ainult laboritingimustes. Selle läbiviimiseks kasutatakse spetsiaalseid ensüüme, mis suurendavad mitu korda patsiendi RNA ja DNA struktuuri. Sel juhul tuleks neid moodustada selline arv, et oleks võimalik visuaalset uuringut läbi viia. Uuringu käigus tehakse sellise saidi koopia, mis vastab igati nõutavatele tingimustele. Mis on RNA PCR-i vereanalüüs, on paljudele huvitav.

Laboris on olemas vajalik andmebaas, mis näitab erinevate nakkusetekitajate täpset struktuuri. PCR-meetodi kasutamine võimaldab mitte ainult kindlaks teha patogeeni tüübi, vaid ka arvutada selle kvantitatiivse osakaalu.

PCR-diagnostika sisaldab ka mõningaid uuendusi, mille hulgast paistab silma:

Erinevate DNA fragmentide ühendamine;

Mutatsiooni sisseviimine;

Isaduse tuvastamine jne.

Milliseid haigusi tuvastatakse PCR-iga?

Tänu PCR-ile on võimalik tuvastada peaaegu kõik bakteriaalsed ja viiruslikud patoloogiad. Uurimiseks võib kasutada mitte ainult verd, vaid ka muid bioloogilisi materjale, näiteks ureetra ja emakakaela määrdeid, sülge, spermat. Analüüs muutub üsna informatiivseks, kui teatud haiguse põhjustaja satub inimese verre. Seetõttu on PCR-i vereanalüüs ette nähtud järgmiste patoloogiate jaoks:

A-, B-, C-, D- ja TT-tüüpi viirushepatiit;

Herpeetiline infektsioon (see tähendab esimest, teist ja neljandat tüüpi viirused);

tsütomegaloviirus;

Enteroviiruse infektsioon;

HIV-nakkus;

punetised;

listerioos;

vöötohatis;

Nakkuslik mononukleoos;

Toksoplasmoos.

Kui võtame arvesse PCR-i rakendamist muude biomaterjalide abil, tuleks selle meetodi abil tuvastatavate patoloogiate loendisse lisada järgmine:

salmonelloos;

difteeria;

Gardnerelloos;

Mükoplasmoos;

Tuberkuloos;

Trihhomonoos;

- papilloomiviiruse infektsioon (umbes sada erinevat inimese papilloomiviiruse tüve).

Eriti oluliseks on nüüdseks muutunud PCR-i vereanalüüs raseduse ajal TORCH-nakkuste suhtes, mille hulka kuuluvad toksoplasmoos, tsütomegaloviirus, herpesviirusnakkus ja punetised. See on tingitud asjaolust, et ülaltoodud haigused võivad põhjustada kõrvalekaldeid loote arengus.

PCR eelised

Millised on selle meetodi eelised?

• Diagnoosi sada protsenti täpsus: kui veres on vähemalt mitu patogeeni DNA fragmenti, määratakse need PCR reaktsiooniga, mis tähendab, et pannakse õige diagnoos. See on peamine erinevus selle meetodi ja teiste diagnostikameetodite vahel - täielik vereanalüüs, ELISA ja teised.
• Spetsiifilisus. Näiteks borrelioosi PCR-i vereanalüüsi ajal pole sellist asja nagu valenegatiivne või valepositiivne tulemus, mis eristab seda ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsist ehk ELISA-st.
• Analüüsi saab teha mitme patogeeni korraga määramiseks ühe biomaterjali proovi põhjal, muutes selle meetodi patsiendile mugavaks, sest ta ei pea analüüsi mitu korda tegema.
• Kiirus. Puudub vajadus patogeeni isoleerimiseks ja kasvatamiseks spetsiaalsel toitekeskkonnal, mis on vajalik bakterioloogilise uuringu käigus. Lõpliku tulemuse saate analüüsi päeval.

• Näiteks hepatiidi PCR-i vereanalüüsi abil tehakse kindlaks haiguse varjatud põhjustaja organismis, kui patsient toimib nakkuse (HIV või hepatiidi) kandjana.
• Taskukohane hind. PCR-analüüsi maksumus ühe patogeeni määramiseks on vahemikus kakssada viiskümmend kuni viissada rubla. Viiruste poolkvantitatiivne uuring maksab veidi rohkem - umbes tuhat rubla.

Meetodi puudused

PCR on kõrgtehnoloogiline uurimismeetod, mis seab laboriseadmetele kõrged nõudmised. Analüüsiruumis peab tingimata olema bioloogiline filter, kuna õhus on alati sülje ja naha osakesi, mis sisaldavad DNA molekule. Biomaterjalidega töötamise tehniliste nõuete täitmata jätmine võib põhjustada valediagnoosi.

Kes peaks võtma PCR jaoks vereanalüüsi?

Küsitlusele võivad vastata kõik soovijad. Näidustuseks on sugulisel teel levivate infektsioonide (HIV-nakkus, bakteriaalne vaginoos, klamüüdia) kahtlus. Kui kogemata toimus kaitsmata seksuaalkontakt, võimaldab ainult PCR õige diagnoosi panna varajases staadiumis, kui inimene on nakatunud konkreetsesse haigusse.

TORCH-kompleksi veri on kohustuslik rasedatele naistele, samuti neile, kes alles plaanivad last rasestuda.

Kuigi PCR on maksimaalne tõhus meetod diagnostika, kuid te ei pea selles tsüklitena käima. Patsienti on vaja iga patoloogia juuresolekul põhjalikult uurida. Kui polümeraasi ahelreaktsioon võimaldab määrata patogeeni, siis tänu seroloogilisele uuringule on võimalik hinnata ravi efektiivsuse taset, inimkeha reaktsiooni patogeenile ja ravimitele. Arst peaks määrama HIV PCR-i vereanalüüsi.

Protseduuri ja ettevalmistamise tunnused

Patsiendid, keda uuritakse PCR-meetodi abil, saavad kõige usaldusväärsema tulemuse. Peab ütlema, et sel juhul on vigade tõenäosus peaaegu täielikult välistatud. Selle analüüsi tulemused koostatakse ka üsna kiiresti, mis muudab diagnoosi kindlaksmääramise lihtsamaks ja muutub võimalikuks vajalike meditsiiniliste protseduuride õigeaegse määramise.

PCR-meetodil saadud tulemuse usaldusväärsuse määrab bioloogilise materjali õige kohaletoimetamine uurimiseks. See ei tohiks olla millegagi saastunud, vastasel juhul pole tulemus objektiivne.

• seksuaalvahekorra keeld päev enne protseduuri;
• vereanalüüs infektsioonide tuvastamiseks tuleks võtta hommikul ja ainult tühja kõhuga;
• uriini antakse ka hommikul steriilses anumas.

Poolteist-kaks päeva pärast protseduuri dekodeeritakse PCR vereanalüüs ja tulemus on valmis. On isegi juhtumeid, kui saate tulemuse juba samal päeval.

Kuidas analüüsiks materjali ette valmistada?

Uuringu võimalikult edukaks läbiviimiseks on vaja patsiendilt materjal õigesti võtta ja selle pädev ette valmistada. On üldteada tõsiasi, et laboriuuringus esineb proovi ettevalmistamisel suur hulk vigu (kuni ligikaudu seitsekümmend protsenti).

Praegu võetakse mõnes laboris verd vaakumsüsteemide abil. Ühelt poolt vigastavad need patsienti minimaalselt, teisalt võimaldavad materjali võtta nii, et see ei puutuks kokku ei keskkonna ega personaliga. See väldib bioloogilise materjali saastumist ja suurendab analüüsi usaldusväärsust.

Tulemuste dešifreerimine

PCR-i vereanalüüsi tulemus võib olla positiivne või negatiivne. Kui vereanalüüs on negatiivne, näitab see nakkuslike patogeenide puudumist patsiendi poolt üleantavas materjalis. Positiivne analüüs kinnitab, et veres on nakkustekitajad, mis tähendab, et on vaja patsiendi kõige tõhusamat ja kvaliteetsemat ravi.

Saadud tulemus võib olla positiivne isegi haiguse sümptomite puudumisel. See näitab kas patoloogilise protsessi algust või seda, et inimene on kandja. Viimase avastamisel pole meditsiinilisi protseduure vaja. Sel juhul soovitatakse patsienti pidevalt arsti järelevalve all hoida, mis tähendab näiteks perioodilist PCR-i vereanalüüsi herpese ja muude infektsioonide suhtes.

Enamasti leidub neid kusitist, emakakaelakanalist tehtud kaabitsates, süljes. Siiski tuleb meeles pidada, et haige inimene on võimeline nakatama täiesti terveid inimesi, isegi kui see haigus teda ei häiri. See võib muutuda krooniliseks. Peab ütlema, et PCR-i abil saadud positiivse tulemuse korral on vaja ette näha sobivad meditsiinilised protseduurid.

PCR kvantitatiivne iseloomustus

Infektsioonide PCR-i vereanalüüsi iseloomustatakse ka kvantitatiivselt. Sellist tulemust saab hinnata ainult spetsialist, kuna see on erinevate infektsioonide puhul individuaalne. See on kvantitatiivne tunnus, mis võimaldab arstil määrata sellise patoloogilise protsessi aktiivsuse astet, määrata konkreetse haiguse täpse arenguetapi.

Saadud tulemuste uurimine aitab spetsialistil valida sobiva ravimi, täpsustada vajalikku annust.

Diagnostiline täpsus

PCR-il on kolm kõige olulisemat omadust, nimelt:

Tundlikkus;

Spetsiifilisus;

Täpsus.

Infektsioonide diagnoosimist PCR-i abil iseloomustab nakkusetekitajate tuvastamise suur tõenäosus organismis. Vere ja muude vedelike analüüs on väga spetsiifiline. Tänu temale saate hõlpsasti määrata konkreetse nakkusprotsessi, läbides näiteks hepatiidi või HIV-i PCR-i vereanalüüsi. Samuti on PCR-diagnostika väga tundlik. Kui uuritavas materjalis on minimaalne arv nakkustekitajaid, on PCR-meetod alati positiivne.

Väga harvadel juhtudel võib saada valepositiivse tulemuse. Nakkuse puudumisel on see vastavalt negatiivne.

Varjatud haiguste tuvastamine

Kui inimesel kahtlustatakse STI-d, määratakse varjatud infektsioonide kindlakstegemiseks vereanalüüs. Mis tahes suguelundite haigusi saab kindlaks teha ainult patsiendi uurimisel.

Kursuse varjatud olemus võib olla järgmistel haigustel:

• ureaplasmoos;
• klamüüdia;
• mükoplasmoos;
• herpes;
• gonorröa;
• gardnerelloos.

Need infektsioonid on üsna tavalised ja väga salakavalad. Haiguse alguses ei ole neil täpselt määratletud sümptomeid, mistõttu patsiendid ei pöördu spetsialisti poole. Klamüüdia, borrelioosi ja muude infektsioonide õigeaegse PCR-i vereanalüüsi tulemused aitavad arstil määrata tõhusa ravi.

STI-d mõjutavad negatiivselt reproduktiivsüsteemi. Need võivad põhjustada viljatust või loote defektide ilmnemist. Seetõttu on enne raseduse planeerimist oluline teha PCR-test.

Sisu

Uute diagnostikameetodite huvilised peaksid uurima, mis on PCR meetod. Valdkonnas kaasaegsed tehnilised võimalused laboriuuringud annab võimaluse avastada paljusid haigusi algstaadiumis. Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) peetakse praegu kõige täpsemaks ja uuemaks meetodiks.

PCR analüüs

PCR analüüs - mis see on? See meetod kasutab molekulaarbioloogia põhimõtteid. Materjali uurimiseks kasutatakse spetsiaalseid ensüüme, mis kopeerivad korduvalt ja kiiresti patogeenide DNA, RNA fragmente. Olemas erinevad tüübid PCR analüüs sõltuvalt uuritavast materjalist (veri, uriin, väljaheited jne). Pärast töötlemist võrdlevad laboritöötajad tulemust andmebaasiga, tuvastavad kontsentratsiooni, patogeeni tüübi.

PCR analüüs asetatakse spetsiaalsesse võimendisse (seadmesse), mis soojendab ja jahutab katseklaase koos biomaterjaliga. Fragmentide replikatsiooniks on vaja temperatuurimuutusi. Tulemuse täpsus sõltub temperatuurirežiimi täpsusest. Polümeraasi ahelreaktsiooni meetod aitab tuvastada:

• Nakkuslik mononukleoos;
• tsütomegaloviiruse infektsioon;
• viirushepatiit G, C, B, A;
• sugulisel teel levivad infektsioonid / haigused (STI-d / STD-d): gardnerelloos, trikhomoniaas, ureaplasmoos;
• herpeetiline infektsioon;
• onkogeensed viirused;
• listerioos;
• helikobakteri infektsioon;
• puukentsefaliit, borrelioos;
• tuberkuloos;
• kandidoos.

Veri

Hetkel on tehnoloogia uudsuse tõttu PCR vereanalüüsil veel kõrge hind. Biomaterjali ettevalmistamisel ei ole vaja järgida teatud nõudeid. Isegi põhjustatud füüsilisest aktiivsusest, stressist, toitumise muutusest, koostise muutused ei mõjuta uuringu tulemust. PCR-vereanalüüs võib rikkuda ainult antibakteriaalsete ainete tarbimist, seetõttu tuleb enne selle võtmist teha paus ravi ja testi vahel.

PCR-vereanalüüs on kõige levinum võimalus viirusliku või ebatüüpilise ilminguga krooniliste, ägedate nakkuspatoloogiate diagnoosimiseks. Seroloogiliste uurimismeetodite läbiviimisel on teatud raskused - patogeeni olemasolu määrab antikehade olemasolu inimkehas. Tulemus võib olla valenegatiivne, kui patsiendi seisund ei andnud aega nende arenguks.

määrima

Günekoloogia valdkonnas kasutatakse nakkusohtlike mikroorganismide esinemise uurimiseks PCR-määrianalüüsi. Materjaliga töötamine toimub samal põhimõttel nagu verega: patogeeni DNA fragmentide mitmekordne suurenemine, et seda hõlpsalt tuvastada. Samuti aitab see tuvastada naisel peidetud nakkusi. Analüüsiks võib võtta erinevaid bioloogilisi vedelikke: sülge, röga, uriini, verd. Günekoloogias kasutatakse määramise täpsuse huvides sagedamini emakakaela kanalist tupe limaskesta määrdumist.

PCR-i jaoks on teatud näidustused. Sageli tuleb seda teha antibiootikumiresistentse patogeeni tüübi tuvastamiseks. Naistel on selle meetodi abil diagnoosimise peamised näidustused järgmised:

• raske rasedus;
• STI-de äge faas;
• kui kahtlustatakse STI-de üleminekut kroonilisele staadiumile;
• viljatuse põhjuste otsimine.

Cala

Nakkuse tuvastamiseks võib arst määrata väljaheite PCR-testi. Pärast testi kõige usaldusväärsemate tulemuste saamiseks tuleb enne biomaterjali võtmist järgida järgmisi reegleid:

• lõpetage mõneks päevaks lahtistite võtmine: õlid, suposiidid;
• välja jätta ravimid, mis annavad väljaheitele kindla värvi, näiteks rauasisaldusega.

Proovide võtmiseks kasutage steriilset pulka ja anumat. Midagi nende täiendavaks pühkimiseks, loputamine pole vajalik. Materjali kogumisel olge ettevaatlik, et te ei puudutaks käega anuma siseseinu. Veenduge, et väljaheites ei oleks uriini lisandeid, te ei saa kasutada täiendavaid soolte liikumise abivahendeid (klistiiri). Materjali tuleb koguda tarnepäeval, piisab 1/3 mahuti mahust. Sellel diagnostilisel meetodil on järgmised eelised:

Uriin

Vajadusel võib arst analüüsiks võtta uriini. Kõrge täpsus avab võimaluse töötada mis tahes bioloogilise vedelikuga, millest on võimalik eraldada viiruse DNA. PCR uriinianalüüsi läbimiseks peate enne materjali võtmist järgima järgmisi piiranguid:

• vähemalt 1 päev enne protseduuri lõpetada seksuaalvahekord;
• 3 nädalat enne sünnitust tuleks lõpetada igasugune antibakteriaalne ravi, sest ravimid ähmastavad pilti;
• peate testi tegema tühja kõhuga (ka vedelik on keelatud);
• peate võtma materjali esimese hommikuse osa.

PCR testi tulemused

Eelnevast on selge, mis on PCR analüüs ja selle uurimismeetodi selged eelised on nähtavad. Selle diagnostilise protseduuri teine ​​pluss on tulemuste dešifreerimise lihtsus. Arvestades, kui palju PCR-analüüsi tehakse (protsess ise võtab aega umbes 5 tundi, kuid labor väljastab andmed 1-2 päevaga), muutub see diagnostikameetod parimaks võimaluseks paljude infektsioonide määramiseks. Tulemuste põhjal võib arst teile öelda, et test:

1. Negatiivne - uuritud materjal ei sisaldanud soovitud patogeeni.
2. Positiivne - leiti patogeeni RNA, DNA.

Mõnikord tehakse mikroorganismide kvantitatiivne määramine. See on vajalik haiguste puhul, mis põhjustavad oportunistlikke patogeene. Nende viiruste eripära on see, et neid esineb ainult ülemääraselt ja tavauuringutega on nende leidmine äärmiselt problemaatiline. See tegur on oluline terapeutilise taktika valikul, et tõhusalt ravida viirusinfektsioone, näiteks hepatiiti, HIV-i.

12 infektsiooni korral

Et täielikult mõista, mis PCR on infektsioonide diagnoosimiseks ja kui tõhus see on, peate teadma, et see on võimeline eraldama kuni 12 patogeeni. Tekst viiakse läbi ainult laboritingimustes. Uurimiseks kasutatakse spetsiaalseid ensüüme, mis suurendavad kordades RNA, viiruse DNA fragmentide hulka. 12 infektsiooni PCR-analüüs võib paljastada:

• mycobacterium tuberculosis;
• tsütomegaloviirus;
• hepatiit C, G, B, A;
• herpes 1, 2 tüüpi;
• Epsteini-Barri viirus (nakkuslik mononukleoos);
• sugulisel teel levivad infektsioonid, näiteks klamüüdia;
• listerioos;
• Candida infektsioon;
• helicobacter pylori;
• borrelioos, puukentsefaliit.

C-hepatiidi korral

See diagnostiline meetod aitab kindlaks teha viiruse olemasolu veres. See annab arstidele võimaluse rääkida selle olemasolust või puudumisest. C-hepatiidi PCR analüüsi on kahte tüüpi: kvalitatiivne ja kvantitatiivne. Esimene valik näitab ainult selle olemasolu ja võib olla sõnastatud "tuvastatud" / "ei tuvastatud". Seda tüüpi testi tundlikkus on 10-500 IU/ml. See viitab sellele, et patogeeni vähese sisalduse korral kehas analüüsi "ei tuvastata".

Kvantitatiivne analüüs on täpsem ja näitab infektsiooni kontsentratsiooni veres. Seda indikaatorit nimetatakse "viiruskoormuseks", mõõdetuna viiruse RNA koguses vere konkreetse mahu kohta. Dekrüpteerimine erinevates laborites võib erineda. Lisaks mõõtmisele IU / ml kasutatakse "koopia" ühikuid. Saate ümber arvutada koopiad RÜ kohta, kasutades valemit: 1 IU = 4 koopiat. Kui transkriptis ületab viiruse esinemise väärtus 800 000 RÜ / ml (või 800 * 103), näitab see patogeeni suurt sisaldust.

Tuberkuloosi vastu

Katse tuleks teha hommikul. See on oluline selleks, et vältida kogu öö jooksul tekkinud röga maost väljumist. Tuberkuloosi PCR-analüüs on sama oluline kui ELISA, Mantoux, tomograafia. Uuring aitab tuvastada mükobakterite esinemist, uriini seisundit, koguimmunoglobuliini, ESR-i ja määrata kopsude hetkeseisu. PCR-analüüsi tulemuste täpsuse tagamiseks tuleb see läbi viia vastavalt järgmistele reeglitele:

1. Külvamine toimub 3 korda, kuid mao sisu täielikku aspireerimist tuleks läbi viia ainult haiglas.
2. Tuvastab mükobakterid maos olemasolevate masside külvi abil vähem kui 50% diagnoosidest. Isegi optimaalsete tingimuste saavutamisel soovitatakse selle asemel teha ultraheli.
3. Isegi negatiivse tulemuse korral ei saa täielikult välistada tuberkuloosi tekke tõenäosust ESR-i, immunoglobuliini või muude näitajate muutumisega.
4. PCR-i külv on patoloogiliste seisundite suhtes vähem vastuvõtlik, kui see on saadud bronhoskoopilise uuringu käigus, mis välistab lapse tuberkuloosi kahtluse.

HIV-i jaoks

Paljude inimeste jaoks peetakse seda diagnoosi surmaotsuseks. Sel põhjusel muutub inimene pärast sagedast seksuaalvahekorda tähelepanelikumaks signaale, mida tema keha annab (ja mõnikord tuleb nendega välja). Kõige usaldusväärsem võimalus selle haiguse kinnituse või ümberlükkamise saamiseks on HIV-i PCR-test. Testi abil saab tuvastada järgmisi võimalikke terviseprobleeme:

1. HIV-i esinemise eitamine/kinnitamine seronegatiivse hobuse perioodil.
2. HIV-1, HIV-2 genotüübi määramine.
3. Immunobloti kahtlase tulemusega patoloogilise protsessi kirjelduse selgitamine.
4. Infektsioon pärast vereülekannet.
5. HIV-staatuse määramine kandjatest emadel sündinud lastel.
6. Aitab sisse seada organismi viiruskoormuse jälgimise.

HPV jaoks

Papilloomiviirust saab tuvastada igal inimesel, pikka aega võib see olla varjatud olekus. Areng kutsub esile immuunsüsteemi nõrgenemise, stressi või emotsionaalseid puhanguid. HPV PCR-analüüs aitab määrata viiruse kontsentratsiooni veres. Sel põhjusel on soovitatav teha kvantitatiivne, mitte kvalitatiivne määramine. Need andmed aitavad ennustada infektsiooni pahaloomulise olemuse tekkimise tõenäosust.

HPV olemasolu diagnoosimise tehnika põhineb PCR-i peamisel omadusel eraldada materjalist viiruse DNA. Testi kõrge tundlikkuse tõttu tuvastatakse isegi väike kogus baktereid. Kvantitatiivsed uuringud annavad arstidele võimaluse määrata haiguse ohtlikkuse aste, teha prognoos tulevikuks. See diagnoos on kohustuslik kõigile meestele ja naistele, kellel on tüükad. Kvantitatiivne PCR-analüüs aitab kindlaks teha, mis põhjustas HPV arengu: ajutine immuunsuse vähenemine või krooniline haigus.

Herpese puhul

Seda tüüpi diagnostika mikrobioloogias aitab suure täpsusega läbi viia herpese PCR-analüüsi. Viiruse DNA fragmentide kopeerimine toimub ainult siis, kui materjalis on soovitud geen. Sel juhul võib käitumise tulemuste põhjal tehtud test viidata patogeeni olemasolule või puudumisele. Seda on võimalik tuvastada isegi madala kontsentratsiooni korral veres.

Teine PCR-analüüsi pluss on see, et see suudab tuvastada herpesviiruse infektsiooni kohe pärast nakatumist, enne kliiniliste sümptomite ilmnemist. Herpese tüüpi (1 või 2) on võimalik määrata, analüüsi läbimiseks ei ole vaja spetsiaalset ettevalmistust, kuid arstid soovitavad enne vere võtmist keelduda:

• praetud;
• äge;
• alkohol;
• paksuke.

Raseduse ajal

Lapse kandmisel on väga oluline see uuring läbi viia, et võtta arvesse naise seisundit. PCR-analüüs raseduse ajal on loetletud kõige tõhusamate meetodite loendis mitmesuguste haiguste esinemise määramiseks. Testi on vaja läbi viia mitte ainult patoloogiate tuvastamiseks, vaid ka lapse emakasisese nakatumise tõenäosuse kindlakstegemiseks. Ainult tänu PCR-diagnostikale sai võimalikuks tuvastada progresseerumise aste, paljude infektsioonide areng emaüsas.

PCR analüüside kohaletoimetamine

Kui soovite teada, kuidas PCR-analüüsi tehakse, tuleks kaaluda iga üksikjuhtumit, võttes arvesse biomaterjali tüüpi. Näiteks kraapimisel, määrimisel või vereproovide võtmisel on oma eripärad.

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on ülitäpne meetod pärilike patoloogiate, infektsioonide, viirushaiguste diagnoosimiseks mis tahes staadiumis (ägedas või krooniline), samuti - varajases staadiumis - enne haiguse ilmseid ilminguid, tuvastades. patogeenid, mis põhinevad nende DNA-l, RNA-l, mis on geneetiline materjal, patsiendilt võetud proovides. Ja täna räägime polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodite olemusest, diagnostilistest etappidest ja põhimõtetest, samuti selle maksumusest.

Mis on polümeraasi ahelreaktsioon

Analüüsi aluseks on amplifikatsioon (duubeldamine) – paljude koopiate loomine lühikesest DNA lõigust (desoksüribonukleiinhape), mis esindab inimese geneetilist kompleksi. Uuringuks on vaja väga väikeses koguses füsioloogilisi aineid (röga, väljaheited, epiteeli kaabid, eesnäärme mahl, veri, sperma, lootevesi, lima, platsenta kude, uriin, sülg, pleuravedelik, tserebrospinaalvedelik). Sel juhul võib näiteks patsiendi urogenitaaltraktist avastada isegi üksiku kahjuliku mikroobi.

PCR tehnika (polümeraasi ahelreaktsioon) töötas välja Ameerika teadlane K. Mullis, kes sai 1993. aastal Nobeli preemia.

Aktiivselt kasutatud:

• infektsioonide varases diagnoosimises, geneetiline,;
• kohtuarstlikus ekspertiisis äärmiselt väikese koguse DNA juuresolekul uurimiseks;
• veterinaarmeditsiinis, farmaatsias, bioloogias, molekulaargeneetikas;
• isiku tuvastamiseks DNA järgi, isaduse kinnitamiseks;
• paleontoloogias, antropoloogias, ökoloogias (toodete kvaliteedi, keskkonnategurite jälgimisel).

See video räägib teile, mis on polümeraasi ahelreaktsioon:

Kellele see on määratud

Polümeraasi ahelreaktsioon nakkushaiguste diagnoosimisel on üks kõige usaldusväärsemaid kõrge täpsuse ja usaldusväärsuse meetodeid. Näiteks klamüüdia ja paljude teiste patogeenide PCR-analüüsi usaldusväärsus läheneb 100%-le (absoluutne). Kõige sagedamini on polümeraasi ahelreaktsiooni protseduur ette nähtud patsientidele, kellel on diagnoosimisel raskusi konkreetse patogeeni tuvastamisega.

Laboratoorset PCR-i kasutatakse:

• avastada kuse- ja suguelundite nakatumist põhjustavaid patogeene, mida on põllukultuuride või immunoloogiliste meetoditega raske tuvastada;
• HIV-i uuesti diagnoosimiseks esialgses etapis esialgse analüüsi positiivse, kuid küsitava tulemuse korral (näiteks AIDS-i nakatunud vanemate vastsündinutel);
• onkoloogilise haiguse tuvastamine varases staadiumis (onkogeensete mutatsioonide uuring) ja raviskeemi individuaalne korrigeerimine konkreetse patsiendi jaoks;
• pärilike patoloogiate varajase avastamise ja võimaliku ravi eesmärgil.

Niisiis testitakse tulevasi vanemaid, et välja selgitada, kas nad on geneetilise patoloogia kandjad; lastel määrab PCR päriliku haigusega kokkupuute tõenäosuse.

• loote kõrvalekallete tuvastamiseks varajane tähtaeg rasedusaeg (kasvava embrüo üksikuid rakke uuritakse võimalike mutatsioonide suhtes);
• patsientidel enne elundisiirdamist - "koe tüpiseerimiseks" (koe ühilduvuse määramiseks);
• avastada loovutatud verest ohtlikke patogeenseid organisme;
• vastsündinutel - varjatud infektsioonide tuvastamiseks;
• viirusevastase ja antimikroobse ravi tulemuste hindamiseks.

Miks seda protseduuri läbida?

Kuna PCR on väga tõhus diagnostiline meetod, mis annab peaaegu 100% tulemuse, kasutatakse protseduuri:

• lõpliku diagnoosi kinnitamiseks või välistamiseks;
• ravi efektiivsuse kiire hindamine.

Paljudel juhtudel on PCR ainus võimalik test areneva haiguse tuvastamiseks, kui muud bakterioloogilised, immunoloogilised ja viroloogilised diagnostikameetodid on kasutud.

• Viirused tuvastatakse PCR abil kohe pärast nakatumist ja enne haigusnähtude ilmnemist. Viiruse varajane avastamine võimaldab kiiret ravi.
• Kvantitatiivse DNA analüüsiga määratakse ka nn viiruskoormus (ehk viiruste arv organismis).
• Spetsiifilised patogeenid (nagu Kochi tuberkuloosibatsill) on keerulised ja nende kultiveerimine võtab liiga kaua aega. PCR-analüüs võimaldab teil kiiresti tuvastada proovides minimaalse patogeenide arvu (elusad ja surnud), mis on uuringu jaoks mugavad.

Kasutatakse üksikasjalikku patogeeni DNA analüüsi:

• määrata selle tundlikkus teatud tüüpi antibiootikumide suhtes, mis võimaldab teil kohe ravi alustada;
• ohjeldada epideemiate levikut kodu-, metsloomade seas;
• tuvastada ja jälgida uusi nakkavaid mikroobiliike ja patogeeni alatüüpe, mis on soodustanud varasemaid epideemiaid.

Diagnostika tüübid

Standardmeetod

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüs viiakse läbi spetsiifilise DNA ja RNA fragmendi mitmekordse amplifikatsiooni (kahekordistamise) põhjal, kasutades spetsiaalseid praimerensüüme. Kopeerimise ahela tulemusena saadakse uurimiseks piisav kogus materjali.

Protseduuri käigus kopeeritakse ainult soovitud fragment (vastab määratud spetsiifilistele tingimustele), isegi kui see on proovis tegelikult olemas.

See üksikasjalik video koos kasulike diagrammidega räägib, kuidas PCR töötab:

Muud meetodid

• Reaalajas PCR. Seda tüüpi uuringutes algab antud DNA fragmendi tuvastamise protsess pärast iga tsüklit, mitte pärast kogu 30-40 tsükli ahela lõppemist. Seda tüüpi uuring võimaldab teil saada teavet patogeeni (viiruse või mikroobi) koguse kohta organismis, see tähendab kvantitatiivse analüüsi läbiviimiseks.
• RT-PCR (pöördtranskriptsiooni režiim). Seda analüüsi kasutatakse üheahelalise RNA leidmiseks, et tuvastada viiruseid, mille geneetiline alus on RNA (näiteks C-hepatiidi viirus, immuunpuudulikkuse viirus). Sellises uuringus kasutatakse spetsiaalset ensüümi - pöördtranskriptaasi ja teatud praimerit ning üheahelaline DNA ehitatakse RNA baasil. Seejärel taastatakse sellest ahelast teine ​​DNA ahel ja viiakse läbi standardprotseduur.

Näidustused hoidmiseks

PCR protseduuri kasutatakse nakkushaiguste, neonatoloogia, sünnitusabi, pediaatria, uroloogia, günekoloogia, venereoloogia, neuroloogia, nefroloogia, oftalmoloogia kliinikus.

Näidustused analüüsi läbiviimiseks:

• pärilike patoloogiate tõenäosusega lapse geneetiliste kõrvalekallete tekke riski selgitamine;
• mõlema vanema diagnoosimine rasedust planeerides või ema rasket seisundit käimasoleva raseduse ajal;
• raskused rasestumisel, viljatuse põhjuste väljaselgitamine;
• seksuaalsete infektsioonide kahtlus ägedas staadiumis ja nende krooniliseks ülemineku sümptomitega;
• ebaselge päritoluga põletikuliste protsesside põhjuste tuvastamine;
• kaitsmata juhuslikud ja pidevad seksuaalsed kontaktid;
• patogeense mikroorganismi tundlikkuse määramine spetsiifiliste antibiootikumide suhtes;
• latentse infektsiooni kahtlusega patsiendid patogeenide tuvastamiseks enne ilmsete sümptomite tekkimist (prekliiniline diagnoos);
• patsiendid haigusejärgse taastumise kinnitamiseks (retrospektiivne diagnoos);

Diagnostikat kasutatakse ka siis, kui on vaja täpselt tuvastada järgmised patogeenid:

• hepatiidiviirused (A B C G), inimese immuunpuudulikkus, tsütomegaloviirus;
• vibrio koolera;
• herpes simplex viirus, herpetiformsed liigid;
• retro - adeno - ja rinoviirused;
• punetiste viirused, Epstein-Barr, tuulerõuged (Zoster - viirus);
• parvo- ja pikornaviirused;
• bakter Helicobacter pylori;
• legionella, Escherichia coli patogeensed tüübid;
• staphylococcus aureus;
• patogeen;
• Clostridia, difteeria ja Haemophilus influenzae;

Seda kasutatakse ka infektsioonide tuvastamiseks:

• Nakkuslik mononukleoos;
• borrelioos, listerioos, puukentsefaliit;
• Candida seente põhjustatud kandidoos;
• seksuaalsed infektsioonid - trihhomoniaas, ureaplasmoos, kahvatu treponema, gardnerelloos, gonorröa, mükoplasmoos, klamüüdia;
• tuberkuloos.

Hoidmise vastunäidustused

Kuna protseduuri ei teostata koos patsiendiga, ilma kehale mõju avaldamata, vaid uurimiseks võetud bioloogilise materjaliga, ei ole võimaliku ohu puudumise tõttu PCR-i jaoks vastunäidustusi.

Siiski ei võeta pärast kolposkoopia protseduuri emakakaela kanalist biomaterjali proove. Analüüsiks mõeldud määride, kaabitsate kohaletoimetamine on lubatud alles 4–6 päeva pärast menstruatsiooni lõppu ja eritise täielikku lõpetamist.

Kas meetod on ohutu

Negatiivne mõju patsiendile tema biomaterjali laboris isoleeritud uuringus ei ole võimalik.

Protseduuri ettevalmistamine (bioloogiliste ainete analüüsiks tarnimine)

Proovina PCR analüüsiks, milles tuvastatakse võõrpatogeeni DNA, kasutatakse mis tahes bioloogilist vedelikku, kudet, kehasekreeti. Uuritava aine proovide võtmine toimub veenist vere võtmise teel, kraapides kõrist, ninaõõnest, kusiti, pleuraõõnest, emakakaelast.

Enne diagnostilist protseduuri selgitab arst patsiendile, millist materjali võetakse:

1. Seksuaalinfektsioonide uurimisel võetakse suguelundite eritist, uriin ja määrdumine kusiti.
2. Herpeetiliste infektsioonide, tsütomegaloviiruse, mononukleoosi analüüsimisel võetakse analüüsimiseks uriin, kõri tampooni, hepatiidi, toksoplasmoosi - verd veenist.
3. Erinevat tüüpi diagnoosimiseks võetakse tserebrospinaalvedelikku.
4. Pulmonoloogias on analüüsitavateks proovideks röga ja pleuravedelik.
5. Raseduse ajal võimalike emakasiseste infektsioonide uurimisel kasutatakse analüüsiks amnionivedelikku ja platsentarakke.

Analüüsi usaldusväärsus ja täpsus sõltub materjali võtmise tingimuste steriilsusest. Kuna PCR-test on väga tundlik, võib uuritava aine saastumine tulemust moonutada.

Pädev ettevalmistus biomaterjali kohaletoimetamiseks ei valmista patsientidele raskusi. On teatud soovitused:

• seksuaalsete infektsioonide analüüsimisel:
  • välistada intiimkontaktid 72 tundi enne materjali kohaletoimetamist;
  • lõpetage 3 päeva jooksul mis tahes vaginaalsete toodete kasutamine;
  • alates eelmise päeva õhtust ärge tehke uuritavas piirkonnas hügieeni;
  • kusitist proovi võtmisel välistada urineerimine 3-4 tunni jooksul;
• lõpetage antibiootikumide võtmine kuu aega enne infektsioonide tuvastamist;
• annetada verd hommikul enne söömist ja joomist;
• esimese hommikuse uriini kogumine toimub pärast põhjalikku intiimset tualetti steriilses anumas.

Lisateavet selle kohta, kuidas polümeraasi ahelreaktsiooni meetodil diagnostikat tehakse.

Kuidas on protseduur

Reaktoris (võimendis või termotsükleris) ikka ja jälle PCR-uuringu läbiviimisel korratakse teatud tsükleid:

1. Esimene samm on denatureerimine. Sülg, veri, biopsia, günekoloogilised proovid, röga, milles kahtlustatakse patogeeni DNA (või RNA) esinemist, asetatakse võimendisse, kus materjal kuumutatakse ja DNA jagatakse kaheks eraldi ahelaks.
2. Teine samm on materjali lõõmutamine või kerge jahutamine. ja sellele praimerite lisamine, mis suudavad DNA molekulis soovitud lõigud ära tunda ja nendega seonduda.
3. Kolmas samm on pikenemine- tekib pärast 2 praimeri lisamist igale DNA ahelale. Protsessi käigus valmib patogeeni DNA fragment ja moodustub selle koopia.

Neid tsükleid korratakse nagu "ahelreaktsiooni", mis viib iga kord konkreetse DNA fragmendi (näiteks segmendi, kuhu on programmeeritud teatud viirus) koopiad kahekordistuvad. Mõne tunni jooksul moodustub DNA fragmendist palju koopiaid ja tuvastatakse nende olemasolu proovis. Pärast seda analüüsitakse tulemusi ja võrreldakse neid erinevat tüüpi patogeenide andmebaasiga, et määrata kindlaks nakkuse tüüp.

Tulemuste tõlgendamise ja PCR reaktsiooni põhjal tehtud järelduse kohta lugege allpool.

Tulemuste dešifreerimine

Uuringu lõpptulemus väljastatakse 1-2 päeva pärast bioloogilise materjali tarnimist. Sageli - juba esimesel päeval pärast analüüsi.

Kvalitatiivne analüüs

• Negatiivne tulemus tähendab, et uuringule esitatud aines ei leitud nakkusetekitajate jälgi.
• Positiivne tulemus tähendab patogeensete viiruste või bakterite avastamist bioloogilises proovis esitamise hetkel väga suure täpsusega.

Kui tulemus on positiivne, kuid nakkuse aktiveerumise märke pole, nimetatakse seda keha seisundit asümptomaatiliseks "tervislikuks kandmiseks". Kõige sagedamini täheldatakse viirushaiguste korral biomaterjali võtmisel teatud kohast (emakakaela kanal, kusiti, suuõõne). Sellisel juhul ei ole ravi vajalik, kuid vajalik on pidev meditsiiniline järelevalve, kuna on olemas võimalus:

• viiruse levik kandjatelt ja tervete inimeste nakatumine;
• protsessi aktiveerimine ja haiguse üleminek krooniliseks vormiks.

Kui vereanalüüs on aga positiivne, näitab see, et infektsioon on mõjutanud keha ja see ei ole enam kandja seisund, vaid patoloogia, mis nõuab kohest spetsiifilist ravi.

Kvantitatiivne analüüs

Kvantitatiivse tulemuse määrab spetsialist konkreetse infektsiooni tüübi jaoks. Selle põhjal on võimalik hinnata haiguse arenguastet, staadiumi, mis võimaldab õigeaegselt määrata õige ravi.

keskmine maksumus

Polümeraasi ahelreaktsiooni läbiviimise hinnad määravad: uuringu tüüp, patogeeni tuvastamise keerukus, bioloogilise materjali kogumise raskus, analüüsi tüüp (kvalitatiivne või kvantitatiivne), hinnatase laboris.

Teisest küljest saab PCR-i uurimisel üht tüüpi materjali analüüsimiseks võtmisel tuvastada korraga mitu patogeeni. See säästab teiste laboratoorsete testide pealt.

Ligikaudne PCR-analüüsi maksumus rublades:

• gonokokk, gardnerella, trichomonas vaginalis - alates 180
• Chlamydia trachomatis - alates 190
• papilloomiviirus - 380 kuni 500
• urogenitaaltrakti biotsenoos naistel (mikrofloora kvantitatiivne ja kvalitatiivne hindamine) - alates 800.

Isegi rohkem kasulik informatsioon PCR-uuringu kohta vaadake allolevat videot:

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on ülitäpne molekulaargeneetilise diagnostika meetod, mis võimaldab avastada inimesel erinevaid nakkus- ja pärilikke haigusi nii ägedas kui kroonilises staadiumis ning ammu enne haiguse avaldumist.

Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) töötas 1983. aastal välja Cary Mullis (USA), mille eest pälvis ta 1993. aastal Nobeli keemiaauhinna.

PCR-analüüsist on saanud enamiku nakkuste omamoodi "kuldstandard". Enamik spetsialiste seisab silmitsi sellega peaaegu iga päev ega kujuta ette lõpliku diagnoosi panemist ilma selleta. PCR muutub sageli ainsaks reaktsiooniks haiguse aktiivsete etappide tuvastamiseks nendel hetkedel, kui muud bakterioloogilised, viroloogilised, immunoloogilised diagnostikameetodid ei tööta.

PCR-diagnostika eelised kaasaegses meditsiinis:

Patogeeni (nimelt patogeeni DNA või RNA spetsiifilise piirkonna) olemasolu otsene tuvastamine uuritavas proovis.
Kõrge spetsiifilisus võimaldab määrata konkreetsele patogeenile iseloomuliku ainulaadse DNA või RNA lõigu, mis välistab valereaktsioonide võimaluse.
PCR-meetodi kõrge tundlikkus võimaldab tuvastada isegi patogeenide (viirused, bakterid) üksikuid rakke. PCR analüüsi tundlikkus on 10-1000 rakku uuritavas proovis (näiteks immunoloogiliste ja mikroskoopiliste testide tundlikkus on vaid 103-105 rakku).
Universaalse PCR-tehnika väljatöötamine erinevate patogeenide tuvastamiseks. PCR-i uurimise objektiks on patogeeni geneetiline materjal (DNA, RNA). Tehnika võimaldab tuvastada ühest bioloogilisest proovist mitu patogeeni.
Suhteliselt kiired analüüsitulemused. Täielik uuring viiakse läbi 4-4,5 tunni pärast, harvemini - veidi kauem.
Võimalus avastada patogeene enne haiguse sümptomite ilmnemist (prekliiniline diagnoos) ja pärast möödunud haigust (retrospektiivne diagnoos). Prekliinilise diagnoosi näiteks võiks olla uuring inkubatsiooniperioodil (nakkuse hetkest kuni patsiendi kaebuste ilmnemiseni), aga ka varjatud infektsioon (kui sümptomid puuduvad, kuid on ainult laboratoorsed andmed - PCR). , näiteks). PCR-diagnostika üheks oluliseks punktiks on PCR arhiivimaterjalis või bioloogilistes säilmetes, mis on oluline isiku või isaduse tuvastamiseks.

Praegu toimub PCR-diagnostika märkimisväärne areng. Meetodit ennast täiustatakse, ikka ja jälle ilmuvad uued PCR-i tüübid, meditsiiniturule tulevad selle reaktsiooni uued testimissüsteemid. Tänu sellele muutub PCR-uuringute maksumus iga aastaga paljudele patsientidele taskukohasemaks.

Mis on PCR meetodi aluseks

Polümeraasi ahelreaktsiooni aluseks on teatud DNA või RNA lõigu korduv kahekordistamine (amplifitseerimine) ensüümide abil laboris. Selle tulemusena moodustub visuaalseks analüüsiks piisav kogus DNA-d või RNA-d. Uuringu käigus kopeeritakse ainult see ala, mis sobib kindlaksmääratud tingimustele ja seda ainult juhul, kui see on uuritavas proovis.

Näiteks paigutatakse spetsiaalsesse reaktorisse (võimendisse) uurimistöö materjal, milles eeldatakse patogeeni DNA või RNA fragmentide (sülg, veri, uriin, suguelundite eritised) olemasolu. Edasi lisatakse sellele spetsiifilisi ensüüme, mis seonduvad patogeeni DNA või RNA-ga ning sünteesitakse selle koopia. See kopeerimine toimub mitmes etapis, nagu "ahelreaktsioon" ja lõpuks ühest koopiast geneetiline materjal saab moodustada sadu ja tuhandeid koopiaid. Seejärel tuleb analüüs ja tulemuse võrdlemine olemasoleva andmebaasiga erinevate patogeenide struktuuri kohta. PCR-i abil saate mitte ainult kindlaks teha patogeeni tüübi, vaid anda ka analüüsi kvantitatiivse tulemuse, see tähendab, kui palju patogeene inimkehas on.

PCR-meetod avardab praegu käimasolevate uuringute võimaluste ringi: mutatsioonide sisseviimine, DNA fragmentide splaissimine ning seda kasutatakse laialdaselt meditsiinis näiteks isaduse tuvastamiseks, uute geenide tekkeks jne.

Milliseid infektsioone saab PCR-diagnostika abil tuvastada

1) HIV-nakkus (saab tuvastada inimese immuunpuudulikkuse viiruse HIV-1)
2) Viiruslik hepatiit A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Nakkuslik mononukleoos (Epstein-Barri viiruse DNA – EBV)
4) Tsütomegaloviiruse infektsioon (DNA-CMV)
5) Herpeetiline infektsioon (DNA – herpes simplex viiruse HSV tüübid 1 ja 2)
6) STI-d (sugulisel teel levivad infektsioonid) - ureaplasmoos, gardnerelloos, klamüüdia, mükoplasmoos, trihhomoniaas,
7) Tuberkuloos (mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogeensed viirused – papilloomiviirusnakkus (inimese papilloomiviirus (sh selle onkogeensed liigid 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 ja 59)
9) Borrelioos, puukentsefaliit
10) listerioos
11) Candidiasis (perekonna Candida seened)
12) Helicobacter pylori infektsioon
ja teised

Arvestades patogeenide spektrit, kasutatakse PCR-diagnostikat aktiivselt günekoloogias, uroloogias, nakkushaiguste praktikas, pulmonoloogias, ftisioloogias, gastroenteroloogias, hematoloogias, onkoloogias jt.

Materjal uurimistööks ja selle kogumise reeglid

PCR-uuringute materjaliks, millest saab tuvastada bakteri võõr-DNA või viiruse DNA või RNA, võivad olla erinevad bioloogilised keskkonnad ja inimvedelikud: lima, uriin, veri, röga, epiteelirakkude kraapimine, platsenta koed, veri. , eesnäärmemahl, lootevesi, pleuravedelik.

Sugulisel teel levivate nakkuste (STI-de) skriinimisel võtavad mehed ja naised suguelundite eritist, emakakaela määrdumist või kraapimist, tampooni või kraapi kusiti (ureetra), uriini.

Infektsioonide (herpeetilised infektsioonid, CMVI, mononukleoos, toksoplasmoos, B-, C-hepatiit, HIV-nakkus) uurimisel võetakse veri PCR jaoks.

Nakkusliku mononukleoosi, CMVI, herpeetilise infektsiooni diagnoosimiseks võetakse kurgust tampoon, CMVI uurimiseks - uriin. Sageli võetakse paljudes uuringutes närvisüsteemi kahjustuste uurimiseks tserebrospinaalvedelikku.

Pulmonoloogias on materjaliks röga, pleuravedelik.

Emakasisese infektsioonide uurimisel - amnionivedelik, platsenta kude.

Materjali kohaletoimetamise ettevalmistamine ja PCR diagnostika

Peaaegu kõigil PCR-diagnostika läbinud patsientidel on õigus loota usaldusväärsele, täpsele ja kiirele tulemusele, mis sõltub suurel määral labori võimalustest ja laborandi professionaalsusest. Samal ajal ei usu paljud, et see usaldusväärsus sõltub suuresti meist endist, nimelt raviarsti soovitustest, elustiilist ja materjali proovide võtmise õigsusest. Materjali proovide võtmisel on nõutavad tingimused, mis välistavad materjali saastumise (saastumise) ja seavad vastavalt kahtluse alla analüüsi objektiivsuse.

Materjali kohaletoimetamise nõuetekohane ettevalmistus ei ole eriti keeruline. Arstide soovitused patsientidele on järgmised:

1) mitte elada seksuaalselt päev enne materjali üleandmist;
2) verd uuringuks antakse hommikul tühja kõhuga (ei söö, ei joo);
3) urineerimisel kogutakse esimene hommikune portsjon puhtasse steriilsesse anumasse.

PCR analüüsi tähtajad

Lõpptulemus on valmis 1,5-2 päeva pärast materjali tarnimist. Mõnel juhul on tulemus valmis juba esimesel päeval.

PCR tulemuste tõlgendamine

Negatiivne PCR tulemus näitab, et uuritavas materjalis ei leitud selle kohaletoimetamise ajal nakkusetekitajate jälgi. Enamikul juhtudest ilmneb nakkuse puudumine, mida proovis tuvastada.

Positiivne PCR tulemus näitab infektsiooni jälgede tuvastamist uuritavas bioloogilises proovis. Suure täpsusega näitab positiivne tulemus infektsiooni olemasolu teatud ajahetkel.

On olukordi, kus PCR on positiivne, kuid aktiivsest infektsioonist ei saa rääkida - see on niinimetatud "terve kandmine" ilma haiguse kliiniliste sümptomiteta, mis ei vaja ravi, kuid nõuab arsti dünaamilist jälgimist. Seda täheldatakse sagedamini mitmete viirusnakkuste (HPV, CMVI, EBV-nakkus, herpesinfektsioon ja teised) puhul sellistes materjalides nagu sülg, emakakaela kanali kraapimine, kusiti, st lokaalsest fookusest. Kuid me ei tohi unustada, et nakkuse ülekandumine kandjatelt tervetele inimestele on võimalik, nagu ka haiguse üleminek kroonilisele vormile koos protsessi aktiveerimisega. Kui PCR on veres positiivne, ei ole see enam kandjaseisund ja vajab spetsiifilist ravi.

PCR-i kvantitatiivset tulemust hindab ainult arst individuaalselt konkreetse infektsiooni jaoks eraldi ja sellel ei ole üldisi astmeid. Kvantitatiivse PCR tulemuse põhjal saab arst määrata infektsiooni aktiivsuse astme ja määrata haiguse staadiumi, mis kindlasti mõjutab määratud ravimite kulgu ja annuseid.

Üks viimaseid põnevaid küsimusi: kui täpne on PCR-diagnostika?

PCR analüüsi jaoks on kolm määratlust:

1. Täpsus (suure tõenäosusega on nakkuse tuvastamine või puudumine võimalik).
2. Spetsiifilisus (konkreetse infektsiooni tuvastamise täpsus).
3. Tundlikkus (isegi vähese patogeenide geneetilise materjali sisalduse korral uuritavas proovis tuvastatakse nakkus).

Polümeraasi ahelreaktsioon praktiliselt ei anna valepositiivseid tulemusi (see tähendab, et infektsiooni puudumisel pole positiivseid proove). Valenegatiivsed tulemused on haruldased (sagedamini on see tingitud aktiivse infektsiooni puudumisest inimesel hetkel). Näiteks varjatud infektsioon, krooniline infektsioon tegevusetusest.

Nakkushaiguste spetsialist Bykova N.I.

Video selle kohta, miks ja kuidas infektsioonide PCR-testi teha

PCR-i diagnostikameetodi olemus

Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetod põhineb molekulaarbioloogia põhimõtetel ja kuulub geeniuuringute valdkonda.

Iga elusorganism sisaldab oma struktuuris nukleiinhapete molekule - DNA ja RNA. See on omamoodi geneetiline pass, mis aitab kindlaks teha, millisesse liiki see või teine ​​“kandja” kuulub. Selle "passi" skaneerimiseks oli aga kuni viimase ajani vaja teatud minimaalset kogust bioloogilist materjali. Kui DNA kontsentratsioon oli vajalikust madalam, ei olnud diagnostiline analüüs võimalik.

PCR-iga diagnoosimisel töödeldakse bioloogilise materjali proovi spetsiaalsete ensüümidega (polümeraasid), mis võimaldavad teil alustada olemasoleva DNA (RNA) mitmekordse kopeerimise protsessi. Ahelreaktsiooni kaskaadi abil saab geomeetrilise progressiooni põhimõtte kohaselt vaid mõne tunniga ühest nukleiinhappemolekulist saada mitukümmend triljonit koopiat. See maht on enam kui piisav igasuguste võrdlevate uuringute jaoks.

Analüüsiks kasutatakse võimendit, milles rangete temperatuuritingimuste korral toimub DNA mitmekordse replikatsiooni protsess. Tavaliselt piisab 20-30 replikatsioonitsüklist. Igaüks neist sisaldab 3 järjestikust etappi:

• denatureerimine - DNA maatriksi kuumutamine temperatuurini 96 ° C koos külgnevate ahelate vaheliste vesiniksidemete hävitamisega;
• lõõmutamine - temperatuuri alandamine 4 ° C võrra, et luua replikatsioonikahvel;
• elongatsioon - DNA polümeraaside käivitamine uute nukleotiidahelate sünteesiks, mis põhinevad vanemal.

Iga kolmeetapiline tsükkel kestab keskmiselt 15-20 minutit.

PCR-diagnostika eelised

PCR-analüüs on kõrgtehnoloogiline ja nõuab laboritöötajatelt professionaalsust, kuid kaasaegse meditsiini jaoks on sellest saanud enneolematute võimaluste allikas täpse diagnostika vallas.

PCR-i eelised:

• universaalsus (saab uurida mis tahes bioloogilist materjali - vererakkudest, süljest ja juustest kuni kahtlaste laikudeni kuriteopaigal);
• kõrge tundlikkuse lävi (meetod on võimeline andma tulemuse üksikute rakkude või üksikute DNA molekulide olemasolul proovis);
• multitegumtöötlus - ühes lähenemisviisis saab korraga tuvastada mitut erinevat tüüpi teabekandjat (bakterioloogilised meetodid pole selleks võimelised, kuna need nõuavad iga mikroorganismitüübi jaoks erinevat toitainekeskkonda);
• oskus teostada täpset kvantitatiivset analüüsi;
• töötlemise kiirus (erinevalt teist tüüpi geneetilistest uuringutest võtab PCR-diagnostika vaid 5-7 tundi);
• tulemuse täpsus (tehnoloogia järgimisel on viga praktiliselt välistatud);
• suhteliselt madal hind (PCR-analüüs ei ületa standardsete testide keskmist hinda).

Kõik need eelised võimaldavad polümeraasi ahelreaktsiooni kasutada raviprotsessi regulaarseks jälgimiseks.

PCR-diagnostika meetodi arendaja sai oma "ajulapse" eest Nobeli preemia mingil põhjusel. Polümeraasi ahelreaktsiooni meetod võimaldab:

• määrata kindlaks nakkustekitaja tüvi minimaalse sisaldusega biomaterjalis (kuni üksikute viirusstruktuurideni);
• arvutada patogeeni täpne kontsentratsioon kogu kehas (ravimite optimaalse annuse määramiseks);
• hinnata patsiendile avalduva patoloogilise toime astet ja tuvastada kõrge farmakoloogilise resistentsusega tüved;
• teha kindlaks infektsiooni järjestikused etapid ja teha edasine prognoos.

See on huvitav! PCR analüüsi võimalused on palju laiemad kui inimorganismi nakkusliku tausta kvantitatiivne ja kvalitatiivne hindamine. Lisaks infektsioonide tuvastamisele kasutatakse seda suguluse tuvastamiseks, isiksuse määramiseks, geneetiliste patoloogiate tuvastamiseks ja biomaterjali võrdlemiseks kohtuekspertiisi valdkonnas.

Milliseid infektsioone saab PCR-diagnostika abil tuvastada

PCR-analüüs suudab suure täpsusega arvutada kõik kaasaegses meditsiinilises haiguste kataloogis sisalduvad nakkuskandjad:

• igat tüüpi hepatiidi tekitajad (PCR võimaldab teil tuvastada nakkuse allika inkubatsiooniperioodi staadiumis ja alustada ravi juba ammu enne haiguse sümptomite ilmnemist);
• HIV ja sugulisel teel levivate haiguste patogeenid (ureaplasmas, mükoplasmas, klamüüdia, trihhomonas);
• TORCH-nakkuste rühm (asjakohane rasedate naiste uurimisel loote patoloogiate varajaseks avastamiseks);
• tuberkuloos (haiguse varjatud vorm);
• kandidoos (latentne vorm);
• enteroviiruse infektsioon;
• mononukleoos;
• listerioos;
• salmonelloos (konkreetse tüve määratlus);
• papilloomiviirus;
• gardnerelloos;
• puukentsefaliidi viirus.

Eriti populaarne on intratsellulaarsete infektsioonide (näiteks klamüüdia) analüüs, mille määramine tavapärasel viisil on keeruline isegi nende mikroorganismide suure kontsentratsiooni korral patsiendi kudedes.

Arvestades meetodi multitegumtöötlust, on võimalik teha samaaegne PCR analüüs 12 põhinakkuse kohta. Integreeritud lähenemine on mugav valik sugulisel teel levivate infektsioonide rutiinseks kehasõeluuringuks minimaalse valediagnoosi riskiga.

Märkusena! PCR-diagnostika abil tehakse prognoos nn "uinuvate" infektsioonide vormide kohta, mis on organismis ilma haigussümptomite ilmnemiseta (eriti oluline günekoloogiliste ja uroloogiliste haiguste, tuberkuloosi, puukide leviku ravis). entsefaliit, papilloomiviirus).

Milliseid bioloogilisi materjale uuritakse

Ei ole kehtestatud reegleid ega piire. Meetodi mitmekülgsus võimaldab analüüsimiseks kasutada mis tahes bioloogilist materjali:

• tupe tampoon, kraapimine kusiti ja emakakaela kanalist (suguhaiguste diagnoosimiseks);
• uriin (tuberkuloos, mõned suguhaigused, tsütomegaloviirus);
• veri (HIV, hepatiit, TORCH-nakkused);
• kurgu tampoon (mononukleoos, tsütomegaloviirus);
• alkohol (neuroinfektsioon)
• amnionivedelik ja platsenta kuded (TORCH-nakkuse analüüs, et vältida loote arengu patoloogiaid);
• pleura vedelik (kopsuinfektsioonid).

Muud tüüpi PCR-diagnostika jaoks (suguluse tuvastamine, biomaterjali võrdlemine) kasutatakse sülge, juukseid, küüsi, epiteelirakke ja muid geneetilise teabe allikaid.

Märkusena! PCR-diagnostika meetod paljastab patogeenid mitte ainult eluskudede koostises, vaid ka pinnase, vee, taimede substraatide proovides; hinnata mikroorganismide patogeenset aktiivsust nii inimkehas kui ka selle keskkonnas (väljakujunenud haigusallika olemasolu võimaldab võtta asjakohaseid meetmeid selle vältimiseks tulevikus).

Kuidas analüüsiks valmistuda

Meie kliiniku patsiendid ei pea mõtlema, kus PCR-testi teha. Tagame kõik tingimused materjali steriilseks proovivõtuks ja laborisse saatmiseks.

Eriväljaõpe pole vajalik, kuid soovitatav on järgida üldiste soovituste loendit. Loobuge mõneks päevaks alkoholist, piirake suitsetamist, võimalusel välistage ravimid, püüdke vältida stressirohke olukordi ja rasket füüsilist koormust.

Ülejäänud ettevalmistus analüüsi läbimiseks sõltub biomaterjali tüübist:

• enne urogenitaalinfektsioonide määrdumise või kraapimist hoiduma seksuaalvahekorrast 2-3 päeva (naised peaksid veenduma, et testi päev ei langeks menstruatsiooni päevadele);
• enne PCR-i jaoks vereanalüüsi võtmist hoiduge hommikusest söömisest (test tehakse tühja kõhuga) ja jooge klaas puhast gaseerimata vett;
• enne urineerimist hoiduda toitudest, mis mõjutavad uriini happesust (puuviljad, liha, kaunviljad, rohelised).

Tähtis! Infektsioonide PCR-diagnostikas on kõige olulisem nõue biomaterjali puhtus. Seetõttu püüdke teha kõik endast oleneva, et välistada kudede saastumine võõr-DNA-ga (hoolitsege saatekonteineri steriilsuse, isikliku hügieeni, puhaste riiete eest).

PCR analüüsi dešifreerimine

Infektsioonide kvalitatiivse PCR-analüüsi tulemused on esitatud tabeli kujul, kus igal nakkustekitajal on vastav märk:

• negatiivne tulemus (selle liigi põhjustaja puudub);
• positiivne tulemus (tekitaja tuvastatud).

Haigussümptomite puudumine ei pruugi vastata tegelikule pildile, nii et kellegi jaoks on analüüsi tulemused ootamatud. Te ei tohiks olla ärritunud: nakkustekitaja tuvastamine varases staadiumis on eduka ja kiire ravi võti.

Kvantitatiivse PCR analüüsi läbiviimisel on võimalik hinnata viiruskoormuse astet (saada teada viiruse koopiate arv mahuühiku kohta). Tänu seda tüüpi uuringutele on võimalik määrata nakkusprotsessi kulgemise intensiivsust, samuti hinnata ravi efektiivsust.

PCR analüüs: hind ja tingimused

Keskmine diagnostikaaeg on 5-10 tundi. Tulemused tabeli kujul väljastatakse kohe järgmisel tööpäeval pärast biomaterjali proovi võtmist.

PCR analüüsi valimisel ei ole hind oluline. Kulude suurus ei ületa keskmiselt tavapäraste biokeemiliste testide ulatust ja erinevalt suuremast osast geneetilistest uuringutest on see kättesaadav kõigile patsientidele.